目的:通過觀察補骨脂素對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響,及對TGF-β1和Smad4蛋白表達的影響,來闡明補骨脂素調(diào)節(jié)骨代謝和防治骨質(zhì)疏松癥的可能作用機制。材料與方法:采用大鼠股骨全骨髓貼壁法分離、提取大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞。傳代培養(yǎng)3次后將細胞分為空白對照組、條件誘導(dǎo)組、補骨脂素組與補骨脂素聯(lián)合條件誘導(dǎo)組�？瞻讓φ战M:10%FBS的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng);條件誘導(dǎo)組:成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng);補骨脂素組:含15umol/L補骨脂素的培養(yǎng)液進行培養(yǎng);補骨脂素聯(lián)合條件誘導(dǎo)組:用含15umol/L補骨脂素的成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)。在此期間,時刻觀察細胞生長狀態(tài),每3d換液一次,12d后進行各項指標的檢測。Elisa法檢測各組細胞上清液中ALP的表達水平;RT-PCR法檢測趨化因子CXCL12的表達;Western Blot法檢測COL I、Cbfɑ1、TGF-β1、Smad4蛋白的表達。結(jié)果:1.Elisa法顯示:與空白對照組相比,條件誘導(dǎo)組、補骨脂素組與補骨脂素聯(lián)合條件誘導(dǎo)組的培養(yǎng)液中ALP水平均顯著升高(p0.05),與條件誘導(dǎo)組相比,補骨脂素聯(lián)合條件誘導(dǎo)組ALP水平顯著升高(p0.05)。2.RT-PCR法顯示:與空白對照組相比,條件誘導(dǎo)組、補骨脂素組與補骨脂素聯(lián)合條件誘導(dǎo)組細胞CXCL12 mRNA水平均顯著升高(p0.05),與條件誘導(dǎo)組相比,補骨脂素聯(lián)合條件誘導(dǎo)組CXCL12 mRNA水平顯著升高(p0.05)。3.Western Blot法:與空白對照組相比,條件誘導(dǎo)組、補骨脂素組與補骨脂素聯(lián)合條件誘導(dǎo)組細胞COL I、Cbfɑ1、TGF-β1、Smad4水平均顯著升高(p0.05),與條件誘導(dǎo)組相比,補骨脂素聯(lián)合條件誘導(dǎo)組COL I、Cbfɑ1、TGF-β1、Smad4水平顯著升高(p0.05)。結(jié)論:1.補骨脂素能促進大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞ALP、CXCL12、COL I、Cbfɑ1的表達,誘導(dǎo)其向成骨細胞分化。2.補骨脂素防治骨質(zhì)疏松的機制可能是通過影響TGF-β1/Smad4信號途徑,從而協(xié)同成骨誘導(dǎo)液促進大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨分化。
【學(xué)位單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

見表 1。MSCs 中 ALP 蛋白表達（—X ±S）ALP（ug/L）116.21±9.0152.17±15.7*143.69±17.2*條件誘導(dǎo)組 180.39±11.6*#對照組；#p<0.05vs 條件培養(yǎng)組測趨化因子 CXCL12 的表達照組相比，條件誘導(dǎo)組、補骨脂素組與補骨脂素聯(lián)合條件誘 水平均顯著升高（p<0.05），與條件誘導(dǎo)組相比，補骨脂素聯(lián)NA 水平顯著升高（p<0.05）。見表 2，圖 1。

補骨脂素對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響及機制研究1.42±0.11*1.29±0.08*條件誘導(dǎo)組 1.65±0.12*#對照組；#p<0.05vs 條件培養(yǎng)組ot 法檢測 COL I、Cbfɑ 1、TGF-β1、Smad4 蛋白的表達COL I 蛋白的表達照組相比，條件誘導(dǎo)組、補骨脂素組與補骨脂素聯(lián)合條件升高（p<0.05），與條件誘導(dǎo)組相比，補骨脂素聯(lián)合條顯著升高（p<0.05）。見圖 2。

圖 3 各組 BMSCs 中 Cbfɑ 1 蛋白表達水平空白對照組 2：條件誘導(dǎo)組 3：補骨脂素組 4：補骨脂素聯(lián)*p<0.05 vs 空白對照組；#p<0.05vs 條件培養(yǎng)組 TGF-β1 蛋白的表達照組相比，條件誘導(dǎo)組、補骨脂素組與補骨脂素聯(lián)合條件誘表達水平均顯著升高（p<0.05），與條件誘導(dǎo)組相比，補骨1 蛋白表達水平顯著升高（p<0.05）。見圖 4。
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本文編號：2857978