目的:1.逍生散顆粒劑對小鼠干眼模型角結(jié)膜組織TLR4、NF-κκB的抑制作用。2.探討逍生散顆粒劑通過免疫炎性抑制達到治療干眼的目的。方法:將健康6周齡C57BL/6雌性小鼠120只,體重20g-25g之間,隨機分6組,即正常組、模型組、陰性對照組、低、中、高劑量組,每組20只。除正常組外,其余組別小鼠通過后肢根部皮下注射氫溴酸東莨菪堿聯(lián)合吹風(fēng)誘導(dǎo)建立實驗性干眼模型。各組分別于治療7d、14d、21d測定其淚液分泌量(schirmer test,SIT)、淚膜破裂時間(break up time,BUT)及角膜染色情況(fluorescein staining,FL),并在每次檢測后分批處死小鼠,取角結(jié)膜組織,進行HE染色、免疫組化及 Western blotting。結(jié)果:在治療劑量上,逍生散顆粒劑治療C57BL/6小鼠7d、14d、21d后中、高劑量組SIT、BUT、FL檢測值與模型組比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),中、高劑量組間比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),且二者與低劑量組比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),陰性對照組與模型組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。逍生散顆粒低劑量組治療7d、14d后與模型組比SIT無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05),治療7d、14d及21d與模型組比BUT、FL有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。說明逍生散顆粒中、高劑量組治療干眼效果明顯,低劑量組治療效果不明顯,陰性對照組治療無效。在治療時間上,正常組、模型組、陰性對照組在治療7d、14d、21d后SIT、BUT及FL檢測值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),逍生散顆粒劑中、高劑量組治療7d、14d、21d后各時間之間SIT、BUT及FL檢測數(shù)值差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。逍生散顆粒低劑量組治療7d、14d之間SIT無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05),治療7d、14d、21d之間BUT無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05),FL值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。表明隨著用藥時間的延長逍生散顆粒中、高劑量組的治療作用愈加明顯,21d效果最佳,而低劑量SIT及BUT在時間上的差別不明顯。HE染色顯示逍生散顆粒劑中劑量組角結(jié)膜組織隨著時間的推移上皮細胞修復(fù)性增生,且排列逐漸緊密規(guī)則,直至21d角結(jié)膜組織逐漸恢復(fù)最佳。角結(jié)膜組織TLR4及NF-κB免疫組化染色顯示模型組與陰性對照組角結(jié)膜上皮細胞呈棕色強陽性表達,治療7d有陽性表達,14d陽性表達減少,21d基本無異常陽性表達(p0.05)。Western blotting結(jié)果顯示角結(jié)膜組織TLR4及NF-κB蛋白量表達在治療7d、14d、21d后差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),且隨著用藥時間的延長蛋白表達量逐漸減少,21d蛋白表達量最低。結(jié)論:1.采用東莨菪堿聯(lián)合吹風(fēng)誘導(dǎo)C57BL/6小鼠建立干眼模型成功率高,且具有與人類相似的病理過程。2.TRL4及NF-κB在小鼠干眼模型中被激活,且加速了小鼠干眼的發(fā)病。逍生散顆粒劑治療能夠有效抑制TRL4及NF-κB的活性,以中、高劑量組治療21d的效果最優(yōu)。3.逍生散顆粒劑通過抑制TRL4及NF-κB的活性,降低了免疫炎癥因子的釋放,進一步穩(wěn)定淚膜,達到治療干眼的目的。
【學(xué)位單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R-332;R285.5
【部分圖文】：

意義〇７＝０．００４，產(chǎn)０．０００，內(nèi)尸０．０００，?ｐ＜０．０１），其中中、高劑量組與低劑量間??治療差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（ｐ＜０．０５），且中、高劑量組間治療差異均無統(tǒng)計學(xué)意義??（ｐ＞０．０５）。說明在淚液分泌上中、高劑量組治療效果最佳。見圖１。??表２治療不同時間點各組ＳＩＴ值比較（Ｉ±Ｓ，ｎ＝８）（單位：ｍｍ）??ｍ＼?７ｄ?１４ｄ?２ｌｄ?ＦＩ?Ｐ?值??正常組?３．８５±０＿２２?３．９２±０．１７?３．８７±０．３３?０．１９８?０．８２２??模型組?１＿７１±０＿０９?１．７１±０．０８?１＿７１±０．０９?０．００２?０．９９８??陰性對照組?１．７＾０．０７＃?１．７〇±〇．〇８＃?１．７０±０．０９＃?０．０４４?０．９５７??低劑量組?１．７４±０．１９＃?１．８２±０．０８＃?１．９２±０．１０Ａ?３．６３６?０．０４４??中劑量組?２．００±０．１２ａ?２．４２±０．１７ａ?２．９３±０．２８ａ?４３．１７４?０．０００??高劑量組?１．９８±０．１２ａ＊?２．４８±０．２６ａ＊?２．８８±０．４９ａ＊?１４．９５７?０．０００??注：模型組在造模后即刻、造模后７ｄ、造模后１４ｄ、造模后２１ｄ均無統(tǒng)計學(xué)差異（ｐ＞０．０５）。??＃：與模型組比

??０．０５）。說明在淚膜破裂時間上，中、高劑量組治療效果明顯。見圖２。??表４治療不同時間點各組的ＢＵＴ值比較（ｉｔＳ，ｎ＝８）（單位：ｓ）??￣＾３｝?７ｄ?１４ｄ?２１ｄ?７Ｗ?Ｐ?值??正常組?１０．８２±１．１５?１０．９±１．０３?１０．８８±０．９０?０．０１４?０．９８６??模型組?３．８１±０．４０?３．７９±０．３９?３．７６±０＿４０?０．０２５?０．９７５??陰性對照組?３．８０±０．３５＃?３．７７±０．３６＃?３．７９±０．３６＃?０．０２２?０．９７８??低劑量組?４．０３±０．２１Ａ?４．２９±０．３８ａ?４．３７±０．４２ａ?２．１０５?０．１４７??中劑量組?４．４４±０．３９ａ?４．９６±０．５３ａ?５．７９±０．５５ａ?１５．０１３?０．０００??高劑量組?４．３９±０．３９ａ＊?４．９３±０．４１ａ＊?５．６６±０．３９ａ＊?２０．６２３?０．０００??注：模型組在造模后即刻、造模后７ｄ、造模后１４ｄ、造模后２１ｄ均無統(tǒng)計學(xué)差異（ｐ＞０．０５）。??＃：與模型組比

２?ＨＥ染色結(jié)果??２．１結(jié)膜組織??從圖４可以看出，正常組結(jié)膜柱狀上皮細胞形態(tài)規(guī)則，排列整齊緊密，核呈??橢圓染色，散在分布正常數(shù)量的杯狀細胞，模型組與陰性對照組上皮細胞排列紊??亂，部分核固縮，杯狀細胞數(shù)量反應(yīng)性增多，固有層可見淋巴細胞浸潤。２１天??中劑量組結(jié)膜上皮細胞形態(tài)規(guī)則，排列比較整齊，杯狀細胞數(shù)量正常，基本無淋??巴細胞浸潤。見圖４。??３７??
【參考文獻】

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本文編號：2857423