金釵石斛(Dendrobium nobile Lindl.)是蘭科(Orchidaceae)屬的名貴中藥,其具有輕身延年、厚胃腸、補(bǔ)腎益力和強(qiáng)陰益精等功效。金釵石斛的化學(xué)組成豐富,目前研究主要集中石斛的酚類、萜類、生物堿和多糖等化合物。石斛多糖作為石斛的主要活性成分之一,具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化、抗腫瘤、降高血壓和抗炎等多種的生理作用,因此對(duì)石斛多糖的研究已成為目前研究熱點(diǎn)之一。但金釵石斛多糖的結(jié)構(gòu)及其構(gòu)象分析并未得到深層研究,及其是否對(duì)胃粘膜具有保護(hù)作用不得而知。因此,本文在研究金釵石斛多糖提取、分離、純化、結(jié)構(gòu)解析、分子模擬及構(gòu)象的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究其對(duì)乙醇誘導(dǎo)胃粘膜損傷的保護(hù)作用及其初步的作用機(jī)理,為以金釵石斛多糖為原料的食品或醫(yī)藥提供一定的理論依據(jù)。主要結(jié)果如下:1.金釵石斛多糖高效提取工藝設(shè)計(jì)針對(duì)傳統(tǒng)提取工藝存在的諸如耗時(shí)長(zhǎng)、高溫提取對(duì)多糖結(jié)構(gòu)造成一定的不利影響,利用聚乙二醇(PEG)不揮發(fā)性、無(wú)鹵代基團(tuán)、無(wú)毒、降解能力強(qiáng)等一系列的優(yōu)勢(shì),實(shí)現(xiàn)對(duì)金釵石斛多糖高效提取并對(duì)其工藝進(jìn)行優(yōu)化�；诮⒌臄�(shù)學(xué)模型,模擬優(yōu)化后最佳提取條件為溫度:60℃,超聲功率:195 w,PEG-200濃度:44%,預(yù)測(cè)多糖得率為15.57%,驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)實(shí)際結(jié)果是15.23±0.45%,顯著高于傳統(tǒng)水提多糖得率(7.98%)。再將優(yōu)化方法得到多糖與傳統(tǒng)方式所得多糖進(jìn)行紅外光譜、熱重量、微分熱重、差式掃描分析以及二者體外抗氧化能力活性對(duì)比,結(jié)果顯示二者并無(wú)顯著性差異。2.金釵石斛多糖分離、純化及其結(jié)構(gòu)解析金釵石斛粗多糖經(jīng)過(guò)Sevag法除蛋白,反復(fù)凍融法去除淀粉后得金釵石斛精制多糖(JCP),再利用DEAE-52 cellulose柱及乙醇梯度醇沉法純化后得到高均一性多糖(JCP-40)。通過(guò)單糖組成、甲基化結(jié)合GC-MS分析及一維(1H NMR和13C NMR)和二維(COSY、HSQC、HMBC和TOCSY)核磁共振波譜等方法表征了 JCP-40的化學(xué)結(jié)構(gòu),結(jié)果表明其平均分子量為67.46 kDa,結(jié)構(gòu)由→4)-β-D-Manp-(1→和→4)-β-D-Glcp-(l→連接的水溶性直鏈甘露葡聚糖,并在甘露糖C-2或C-3位有乙�；〈�。JCP-40的重復(fù)結(jié)構(gòu)單元如下:(?)3.金釵石斛多糖(JCP-40)分子模擬及其構(gòu)象研究金釵石斛多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜,其化學(xué)結(jié)構(gòu)和構(gòu)象之間的關(guān)系也并未建立完善。為了解JCP-40分子性質(zhì)與其化學(xué)組成和分子結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系,由已知的JCP-40結(jié)構(gòu),利用分子模擬軟件構(gòu)建和表征JCP-40空間結(jié)構(gòu),分析不同分子量及在不同溫度條件下JCP-40的可視立體結(jié)構(gòu)與構(gòu)象之間關(guān)系,同時(shí)利用HPSEC計(jì)算其構(gòu)象參數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)JCP-40分子模擬的重復(fù)單元由30上升至120個(gè)時(shí),分子量對(duì)聚合物的鏈柔性有一定影響;但當(dāng)重復(fù)單元在120至240個(gè)范圍內(nèi),分子量對(duì)聚合物鏈柔性沒(méi)有顯著性影響。隨著溫度的升高所得分子模型參數(shù)值(Lp和Cn)有所下降,而Rg值隨著溫度升高而上升。因此溫度越高,模擬所得JCP-40聚合物的構(gòu)象剛性變?nèi)�。由HPSEC測(cè)得數(shù)據(jù)通過(guò)公式計(jì)算JCP-40的Rg為12.32 nm,并推測(cè)JCP-40在低分子量時(shí)為無(wú)規(guī)則卷曲狀聚合物,這與分子模擬得到結(jié)果相吻合。4.金釵石斛精制多糖對(duì)乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜損傷保護(hù)作用及作用機(jī)理通過(guò)用乙醇誘導(dǎo)急性胃潰瘍模型評(píng)價(jià)JCP對(duì)胃粘膜的保護(hù)作用。結(jié)果顯示,與模型組相比,由肉眼觀察JCP高劑量組的大鼠胃粘膜出血情況較輕,只有些許斑點(diǎn)或短小條帶出血現(xiàn)象。HE染色病理切片結(jié)果反應(yīng)JCP組可見(jiàn)上皮黏膜層局部脫落,粘膜出血范圍變少,炎癥細(xì)胞的數(shù)目也有所減少,其胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)僅為0.32±0.19%。通過(guò)對(duì)大鼠胃粘膜組織中SOD、MDA、EGF和PGE2含量測(cè)定,JCP主要通過(guò)抑制氧自由基的釋放、促進(jìn)表皮生長(zhǎng)因子的分泌和促進(jìn)PGE2的合成等原理保護(hù)胃黏膜。同時(shí)利用Western blot結(jié)果顯示JCP可抑制ERK信號(hào)通路的激活、抑制JNK磷酸化、減少M(fèi)MP-2的分泌及降低MMP-9的表達(dá)量以此使胃粘膜抵制乙醇損傷。5.JCP-40對(duì)乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜損傷保護(hù)作用體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高純度金釵石斛多糖JCP-40對(duì)預(yù)防胃粘膜損傷具有保護(hù)作用。H-JCP-40劑量組(200mg/kg,b.w)的大鼠經(jīng)過(guò)乙醇處理后胃粘膜表面損傷較輕,肉眼觀察可見(jiàn)線狀或點(diǎn)狀出血,胃粘膜表面顏色呈現(xiàn)淡紅色,水腫、充血及損傷情況輕于模型組,由HE染色病理切片結(jié)果可知,JCP-40高劑量組有少量紅細(xì)胞外滲、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象。JCP-40高劑量可以有效降低TNF-α的分泌以及IL-1β的表達(dá)量,減少致炎因子釋放。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高純度金釵石斛多糖JCP-40對(duì)預(yù)防胃粘膜損傷具有保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

[6]。金釵石斛一般高度不超過(guò)60 cm，花姿優(yōu)美，花色鮮艷，多節(jié)叢生，植物下部呈圓柱形（圖1-1），主要分布于中國(guó)的西南和華南地區(qū)以及緬甸、尼泊爾、泰國(guó)、印度、老撾等東南亞國(guó)家[7, 8]。金釵石斛得名“千金草”之稱，在我國(guó)的《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品�！兜啦亍穼⑵淞袨椤爸腥A九大仙草”之首。在《本草綱目》的記載中，金釵石斛具有輕身延年、厚胃腸、腎益力、陰益精等功效[9]。當(dāng)代對(duì)其研究的結(jié)果表明，金釵石斛具有抗腫瘤、抗白內(nèi)障、增加機(jī)體免疫力、治療糖尿病、降血糖、抗衰老等藥效[10-12]。目前，市場(chǎng)上與石斛相關(guān)的保健品與營(yíng)養(yǎng)食品已有一定數(shù)量，產(chǎn)品多以石斛鮮品、干品和經(jīng)過(guò)精深加工的保健藥品和保健食品為主，其中保健食品主要有石斛糕點(diǎn)、石斛茶、石斛飲料等；保健藥品根據(jù)不同的藥效制成片劑、膠囊和顆粒等[13]。但產(chǎn)品多以鐵皮石斛為主要原料

研究技術(shù)路線示意圖

含量（%） 76.45 1.73 0.01 2.242.4.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，按照方法2.3.2.4所述繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖2-1所示。得到的線性回歸方程式為y=21.372x+0.0304，其中y軸為在490 nm處的吸光度值A(chǔ)，x軸為對(duì)應(yīng)的葡萄糖濃度（mg/mL），相關(guān)系數(shù)為R2=0.999，表明樣品濃度與吸光度A具有良好的線性相關(guān)性，根據(jù)測(cè)定樣品的吸光值代入回歸方程即可計(jì)算所測(cè)樣品的多糖含量圖2-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 2-1 The calibration curve of glucose2.4.3 聚乙二醇超聲協(xié)同提取金釵石斛多糖2.4.3.1 聚乙二醇分子量對(duì)金釵石斛多糖得率的影響考慮聚乙二醇所具備不同分子量，不同分子量的聚乙二醇所具有的粘度和極性等特性在提取過(guò)程中所起到的不同效果，因此選擇5種不同聚乙二醇的分子量（200、400、600、8000和1000 Da
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 安鳳娟;何宇新;;金釵石斛多糖的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年13期

2 羅林會(huì);王勤;;金釵石斛的離體快繁體系研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年15期

3 陳仕江;張明;金仕勇;劉從軍;丑敏霞;;GA_3和6-BA對(duì)金釵石斛生長(zhǎng)發(fā)育及生物堿含量的影響[J];重慶中草藥研究;2005年01期

4 施子棣;何季芬;張桂蘭;蔣時(shí)紅;;金釵石斛水煎液對(duì)小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能影響的實(shí)驗(yàn)觀察[J];河南中醫(yī);1989年02期

5 包英華;張海玲;黃依琳;陳天韻;黃晶晶;梁基敏;;三種居群金釵石斛的性狀與顯微鑒別特征比較分析[J];韶關(guān)學(xué)院學(xué)報(bào);2019年03期

6 陳明輝;張志錄;佟偉霜;楊風(fēng)嶺;;低溫脅迫下脫落酸對(duì)金釵石斛膜透性和內(nèi)源激素的影響[J];北方園藝;2015年23期

7 李靜婷;牛磊;侯玉杰;;金釵石斛的快速繁殖研究[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年09期

8 馮冰;吳越;趙亞;方程;祝樂(lè);;金釵石斛復(fù)方在細(xì)胞水平的美容功效研究[J];日用化學(xué)工業(yè);2014年10期

9 張艷磊;何曉然;劉園園;李小瓊;唐彥萍;;金釵石斛多糖對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2013年01期

10 鄭家歡;吳觀健;吳岳濱;黃潤(rùn)祥;鄭艷雁;劉志霞;王兆玉;;GC-MS分析金釵石斛花揮發(fā)油成分[J];中藥材;2016年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 張怡;金釵石斛多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及其對(duì)乙醇誘導(dǎo)胃黏膜損傷的保護(hù)作用[D];江南大學(xué);2018年

2 張雪;金釵石斛的化學(xué)成分與生物活性研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2005年

3 嚴(yán)文津;金釵石斛的種質(zhì)保存、遺傳多樣性及葉綠體基因組研究[D];南京師范大學(xué);2015年

4 王軍輝;金釵石斛多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗白內(nèi)障活性研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2011年

5 侯曉強(qiáng);石斛屬植物菌根生物學(xué)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張冰潔;復(fù)方金釵石斛口服液及其增強(qiáng)免疫和護(hù)胃功效研究[D];江南大學(xué);2019年

2 黃思;金釵石斛總生物堿對(duì)高脂飲食模型小鼠膽汁酸代謝的影響與機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

3 蔡莉;金釵石斛不同種質(zhì)生物學(xué)特性及產(chǎn)量質(zhì)量比較研究[D];貴州大學(xué);2019年

4 陳洪;金釵石斛總生物堿對(duì)KK-Ay小鼠血糖的影響及機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2018年

5 張宗敏;金釵石斛多糖對(duì)秀麗隱桿線蟲(chóng)衰老的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2018年

6 黎恩立;金釵石斛抗抑郁活性及超微粉碎對(duì)其理化性質(zhì)影響的初步研究[D];廣東藥科大學(xué);2018年

7 夏杰;金釵石斛乙酸乙酯部位抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2018年

8 孟映霞;金釵石斛葉水溶性多糖的提取分離純化及體外生物活性研究[D];江南大學(xué);2017年

9 安鳳娟;金釵石斛含片的制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D];西華大學(xué);2014年

10 鄭斯卓;金釵石斛多糖對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2009年

本文編號(hào)：2856628