目的:目前研究發(fā)現(xiàn)姜黃素可以有效抑制體內(nèi)外腫瘤細(xì)胞生長,同時具有抑制腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用。然而,其具體作用機(jī)制尚未明確。本研究旨在探討姜黃素對人結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株的影響,以更好地了解其機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)通過MTS檢測姜黃素對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞活性的影響;通過Western blotting、Real-time qPCR檢測姜黃素對體外結(jié)腸癌SW620細(xì)胞內(nèi)相關(guān)Wnt信號通路基因(NKD2、Axin、β-catenin和TCF4)、EMT表型特定標(biāo)記基因(E-cadherin和Vimentin)以及趨化因子CXCR4的蛋白和mRNA表達(dá)情況;通過Western blotting分別檢測轉(zhuǎn)染NKD2 siRNA和Wnt信號通路活化劑,觀察Wnt通路和EMT的表達(dá)情況;運(yùn)用以上方法檢測轉(zhuǎn)染NKD2 siRNA或CXCR4表達(dá)質(zhì)粒,再通過姜黃素處理,觀察結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)NKD2和CXCR4的表達(dá)情況。結(jié)果:姜黃素能明顯抑制結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的增殖活性。姜黃素能顯著下調(diào)β-catenin、TCF4、Vimentin 以及 CXCR4 的表達(dá),上調(diào) NKD2、Axin 和 E-cadherin的表達(dá),且呈劑量依賴性。轉(zhuǎn)染NKD2 siRNA和Wnt信號通路活化劑,能激活Wnt信號通路。轉(zhuǎn)染NKD2 siRNA或CXCR4表達(dá)質(zhì)粒,能明顯上調(diào)姜黃素處理后細(xì)胞內(nèi)β-catenin、TCF4、Vimentin以及CXCR4的表達(dá),同時能下調(diào)NKD2和E-cadherin的表達(dá)水平。結(jié)論:姜黃素通過誘導(dǎo)NKD2基因的表達(dá),能明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)Wnt信號通路和EMT,從而抑制趨化因子CXCR4基因表達(dá),具有抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的潛能。
【學(xué)位單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
一、實(shí)驗(yàn)研究
    （一） 實(shí)驗(yàn)材料
        1. 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2. 實(shí)驗(yàn)藥品和器材
    （二） 實(shí)驗(yàn)方法
        1. 姜黃素溶液的配制
        2. 細(xì)胞復(fù)蘇
        3. 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        4. 檢測姜黃素對細(xì)胞生長的抑制率（MTS法）
        5. Western blot檢測蛋白變化情況
        6. Real-time qPCR檢測mRNA變化情況
    （三） 統(tǒng)計分析
二、結(jié)果
    1. 姜黃素對結(jié)腸癌細(xì)胞SW620的增殖活性影響
    2. 不同濃度姜黃素對Wnt信號通路和EMT相關(guān)基因表達(dá)的影響
    3. 不同濃度姜黃素對NKD2和CXCR4基因表達(dá)的影響
    4. 轉(zhuǎn)染NKD2 siRNA或Wnt信號通路活化劑,觀察Wnt信號通路相關(guān)基因表達(dá)的影響
    5. 通過轉(zhuǎn)染NKD2 siRNA,觀察姜黃素對Wnt信號通路相關(guān)基因表達(dá)的影響
    6. 通過轉(zhuǎn)染NKD2 siRNA,觀察姜黃素對CXCR4基因表達(dá)的影響
    7. 轉(zhuǎn)染CXCR4表達(dá)質(zhì)粒,觀察姜黃素對EMT及CXCR4表達(dá)水平的影響
三、分析與討論
四、結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附圖
致謝
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2856031