肝癌是全世界最常見的癌癥之一,發(fā)病率較高,常用手術(shù)或癌癥特效藥進行治療,費用較高,并且會產(chǎn)生副作用。而中藥中的某些成分具有抗癌活性,提取工藝簡單且毒性較低,可以篩選出來作為有效抗肝癌的藥物。大黃素是從中藥何首烏中提取的一種有效藥物,臨床研究中發(fā)現(xiàn)大黃素具有良好的抗癌活性。然而,大黃素介導的抑制HepG2細胞生長和細胞毒性的分子機制尚未完全闡明。本論文選用HepG2細胞作為受體細胞,研究大黃素的抗腫瘤作用機制。首先運用MTT方法研究大黃素對HepG2細胞的增殖情況,我們發(fā)現(xiàn)大黃素可以抑制HepG2細胞的增殖,而且有明顯地時間、劑量效應。之后我們根據(jù)不同時間點的IC5o值,將細胞分為空白對照組,低劑量、中劑量和高劑量給藥組,最終選擇對細胞樣品的1HNMR數(shù)據(jù)進行正交信號矯正-偏最小二乘法分析(OSC-PLS-DA),并對胞內(nèi)小分子代謝物進行相對定量分析。結(jié)果表明大黃素給藥后許多內(nèi)源代謝物含量顯著改變。利用qRT-PCR方法分析與糖酵解相關基因的變化,我們發(fā)現(xiàn)大黃素可明顯下調(diào)糖酵解相關的HKⅡ,PKM2和LDHA的基因水平。同時我們用流式細胞術(shù)分析胞內(nèi)氧化物ROS的含量及細胞周期與凋亡情況,發(fā)現(xiàn)大黃素可增加胞內(nèi)ROS含量、擾亂細胞周期并誘導細胞凋亡。綜合相關網(wǎng)絡分析我們認為大黃素可以通過影響HepG2細胞能量代謝、氨基酸代謝變化以及影響氧化應激系統(tǒng)來誘導細胞凋亡。
【學位單位】：南京理工大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285
【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 大黃素抗腫瘤作用及相關機制研究
        1.1.1 誘導細胞凋亡
        1.1.2 影響細胞周期
        1.1.3 抑制腫瘤細胞遷移
        1.1.4 抑制各種酶的活性
        1.1.5 抑制與腫瘤相關的血管生成
        1.1.6 與其他抗腫瘤藥物的協(xié)同作用
    1.2 代謝組學研究進展
        1.2.1 代謝組學簡介
        1.2.2 代謝組學分析技術(shù)
        1.2.3 代謝組學數(shù)據(jù)分析方法
        1.2.4 細胞代謝組學研究進展
2 基于核磁共振代謝組學的大黃素對HepG2細胞抗癌活性研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 實驗溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞復蘇、傳代及凍存
        2.2.2 MTT法檢測細胞活力
        2.2.3 核磁測試樣品處理
1H NMR測試'>        2.2.4 ¹H NMR測試
1H NMR數(shù)據(jù)預處理'>        2.2.5 ¹H NMR數(shù)據(jù)預處理
        2.2.6 代謝物指認
        2.2.7 代謝組學數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2.2.8 代謝物相關網(wǎng)絡分析
        2.2.9 熒光定量PCR實驗
        2.2.10 胞內(nèi)ROS檢測
        2.2.11 流式細胞術(shù)檢測細胞周期及細胞凋亡情況
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 大黃素對HepG2細胞活力的抑制作用
        2.3.2 代謝物指認
        2.3.3 一維氫譜的多元統(tǒng)計學分析
        2.3.4 大黃素對HepG2細胞中糖酵解基因的調(diào)控作用
        2.3.5 流式細胞術(shù)對HepG2細胞的門控策略分析
        2.3.6 大黃素引起HepG2細胞內(nèi)ROS含量的變化
        2.3.7 大黃素對HepG2細胞周期及細胞凋亡的影響
    2.4 結(jié)果討論
        2.4.1 能量代謝
        2.4.2 氨基酸代謝
        2.4.3 氧化應激
    2.5 本章小結(jié)
    2.6 總結(jié)與展望
致謝
參考文獻

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本文編號：2854387