目的:(1)考察龍眼葉總黃酮的最佳提取工藝并對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。(2)對(duì)龍眼葉抗2型糖尿病活性部位進(jìn)行篩選及其抗2型糖尿病的藥理作用和機(jī)制研究,為進(jìn)一步研究龍眼葉提供一定的科學(xué)依據(jù)。方法:(1)采用單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)合Box-Behnken響應(yīng)面法,考察乙醇濃度、乙醇用量、提取時(shí)間三個(gè)因素對(duì)龍眼葉中總黃酮提取工藝的影響,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行含量測(cè)定。(2)(1)采用滲漉的方式提取龍眼葉得到總提取物,并依次使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取,得到各極性部位。(2)對(duì)龍眼葉總提取物及各極性部位進(jìn)行急性毒性試驗(yàn),觀察各自的毒性情況。(3)考察各極性部位對(duì)高糖高脂飼料結(jié)合鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠的降糖作用:給藥28天后,觀察記錄小鼠的生長(zhǎng)情況及體重變化,檢測(cè)小鼠空腹血糖,對(duì)小鼠進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn),并測(cè)定小鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的含量,在此基礎(chǔ)上對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較,篩選出龍眼葉抗2型糖尿病的活性部位。(3)考察龍眼葉乙酸乙酯部位對(duì)2型糖尿病大鼠的藥理作用:給藥28天后,觀察記錄大鼠的生長(zhǎng)情況及體重變化,檢測(cè)大鼠空腹血糖,對(duì)其進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn);采用酶標(biāo)法測(cè)定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、血脂各項(xiàng)的含量;采用ELISA測(cè)定大鼠血清胰島素(INS)、腫瘤壞死因子(TNF-a)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)的含量;剖取大鼠胸腺計(jì)算其重量指數(shù);取大鼠胰腺做HE染色,觀察其胰島細(xì)胞的病理變化,通過(guò)以上探討其主要降糖機(jī)制。結(jié)果:(1)實(shí)驗(yàn)得到龍眼葉中總黃酮的最佳提取工藝為:乙醇濃度53%,乙醇用量57ml,回流時(shí)間83min,此條件下總黃酮的含量測(cè)定為15.479%,與預(yù)測(cè)值(15.482%)相差甚微。(2)(1)實(shí)驗(yàn)得到龍眼葉總提取物3150g、石油醚部位514g、乙酸乙酯部位504.7g、正丁醇部位677.4g、水部位552g。(2)急性毒性實(shí)驗(yàn)得知:龍眼葉水部位具有明顯毒性,計(jì)算其LD_(50)為740g(生藥)/kg;其余各部位未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng),計(jì)算得到龍眼葉總提取物MTD為101.4(生藥)/kg,石油醚部位MTD為888.8(生藥)/kg、乙酸乙酯部位MTD為320(生藥)/kg、正丁醇部位MTD為316(生藥)/kg。(3)抗2型糖尿病活性部位篩選實(shí)驗(yàn)得知:龍眼葉總提取物能降低糖尿病模型小鼠的血糖(p0.05),對(duì)小鼠的體重影響不大;龍眼葉乙酸乙酯部位能很好的降低糖尿病模型小鼠的血糖(p0.01),改善模型小鼠的體重變化,增強(qiáng)小鼠的葡萄糖耐受能力,并對(duì)糖尿病小鼠的血脂紊亂情況具有一定的調(diào)節(jié)作用;龍眼葉正丁醇部位對(duì)糖尿病小鼠同樣具有降血糖的藥理作用,但效果不如乙酸乙酯部位明顯;龍眼葉石油醚部位和水部位未見(jiàn)有明顯的降血糖作用。(3)龍眼葉乙酸乙酯部位抗2型糖尿病藥理作用研究表明:(1)龍眼葉乙酸乙酯部位能很好的降低糖尿病大鼠的血糖(p0.01),在一定程度上增強(qiáng)大鼠的葡萄糖耐受能力。并能通過(guò)升高模型大鼠的胰島素濃度,提高其胰島素敏感指數(shù)從而改善其胰島素抵抗程度,對(duì)大鼠的胰島素抵抗具有較好的調(diào)節(jié)作用。(2)龍眼葉乙酸乙酯部位對(duì)糖尿病大鼠有升高SOD活性、降低MDA含量的作用,并能在一定程度上抑制糖尿病大鼠的胸腺萎縮。(3)龍眼葉乙酸乙酯部位能很好的調(diào)節(jié)糖尿病模型大鼠的血脂紊亂情況,同時(shí)降低大鼠血清中TNF-a和IL-6炎癥因子的分泌。對(duì)糖尿病模型大鼠的胰腺病理形態(tài)特征也有一定的改善。結(jié)論:(1)采用Box-Behnken響應(yīng)面方法優(yōu)化龍眼葉提取工藝不僅提取率高,而且簡(jiǎn)單可行,可為龍眼葉的進(jìn)一步研究提供理論參考;(2)龍眼葉乙醇總提取物、乙酸乙酯部位和正丁醇部位對(duì)糖尿病小鼠均具有一定的降血糖作用,可為后期實(shí)驗(yàn)研究作鋪墊;(3)龍眼葉乙酸乙酯部位具有很好的抗2型糖尿病作用,其機(jī)理可能與與修復(fù)胰島損傷、抑制炎癥有關(guān)。
【學(xué)位單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285;R284.2
【部分圖文】：

搖勻，放置6min；再加入4%NaOH溶液10mL，搖勻，用提取溶劑定容至刻度，放置15min，最后再以相應(yīng)試劑作空白，照紫外可見(jiàn)分光光度法，在400～800nm測(cè)定吸收光譜圖。結(jié)果如圖1-1,圖1-2所示，蘆丁對(duì)照品溶液和龍眼葉供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)均為506nm，故將506nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

搖勻，放置6min；再加入4%NaOH溶液10mL，搖勻，用提取溶劑定容至刻度，放置15min，最后再以相應(yīng)試劑作空白，照紫外可見(jiàn)分光光度法，在400～800nm測(cè)定吸收光譜圖。結(jié)果如圖1-1,圖1-2所示，蘆丁對(duì)照品溶液和龍眼葉供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)均為506nm，故將506nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
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本文編號(hào)：2854306