發(fā)布時間：2020-10-23 20:24

　　 第一部分補腎活血方對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的卵巢早衰小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究目的探討補腎活血方對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的卵巢早衰小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的影響及作用機(jī)制。方法采用環(huán)磷酰胺(CTX)腹腔注射建立卵巢早衰小鼠模型。將40只雌性C57BL/6小鼠隨機(jī)平均分為4組:正常組(NC)、環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的卵巢早衰模型組(CTX)、補腎活血方組(BHR)、脫氫表雄酮組(DHEA)。各組小鼠于造模前一周開始給予相對應(yīng)藥物預(yù)防性灌胃治療,造模成功后繼續(xù)治療二周。觀察各組小鼠造模前后體重、卵巢指數(shù),采用放射性免疫分析方法(RIA)檢測各組小鼠血清雌激素和孕激素水平,HE染色法檢測卵巢組織病理學(xué)改變并行閉鎖卵泡計數(shù),TUNEL法檢測卵巢組織顆粒細(xì)胞凋亡水平,Real-time PCR和Western blotting方法分別檢測小鼠卵巢組織凋亡相關(guān)因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果與NC組相比,CTX組小鼠體重、卵巢指數(shù)、雌孕激素水平均下降,閉鎖卵泡數(shù)增加,卵巢顆粒細(xì)胞凋亡增加。經(jīng)補腎活血方治療后,上述指標(biāo)均有不同程度改善。卵巢組織中促凋亡蛋白Bax、凋亡終末剪切酶Caspase-3的mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào),抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào),Bcl-2/Bax的蛋白表達(dá)水平比率增加。結(jié)論補腎活血方可保護(hù)和治療環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的卵巢早衰,改善卵巢儲備功能,其機(jī)制可能與抑制卵巢顆粒細(xì)胞凋亡,上調(diào)抗凋亡因子Bcl-2表達(dá),下調(diào)促凋亡因子Bax、凋亡終末剪切酶Caspase-3表達(dá)有關(guān)。第二部分補腎安胎方對控制性超促排卵著床障礙模型小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制研究目的探討補腎安胎方對控制性超促排卵著床障礙模型小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制。方法采用腹腔注射7.5 IU PMSG,48h后腹腔注射7.5 IU HCG建立控制性超促排卵著床障礙小鼠模型,注射HCG后將雌性小鼠與雄性小鼠以2:1比例合籠,正常組雌鼠于相應(yīng)時間點給予等容積生理鹽水腹腔注射并合籠。于次日8:00am觀察雌鼠陰道發(fā)現(xiàn)陰栓者記為妊娠第1天。將50只成功妊娠的雌性昆明小鼠隨機(jī)分為5組:正常妊娠組(NC)、控制性超促排卵致妊娠模型組(COH)、補腎安胎方低劑量組(LOW)、補腎安胎方中劑量組(MID)、補腎安胎方高劑量組(HIGH)。于妊娠第1天起給予相應(yīng)治療5天。采用RIA法檢測小鼠血清雌、孕激素水平,TEM法檢測卵巢組織超微結(jié)構(gòu)改變,HE法檢測卵巢組織病理學(xué)改變并行閉鎖卵泡和妊娠黃體計數(shù),TUNEL觀察卵巢組織顆粒細(xì)胞凋亡水平,Western blotting方法檢測小鼠卵巢組織凋亡相關(guān)因子Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3 的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果COH著床障礙模型小鼠卵巢濕重、雌激素水平、孕激素水平、閉鎖卵泡數(shù)、妊娠黃體數(shù)增加,卵巢顆粒細(xì)胞凋亡增加。卵巢組織超微結(jié)構(gòu)顯示COH著床障礙模型小鼠卵巢顆粒細(xì)胞核染色質(zhì)增多,凝聚,邊集,或呈新月狀邊集于核膜上,卵巢組織表現(xiàn)為灶性空泡化,凋亡后期顆粒細(xì)胞內(nèi)可見典型的凋亡小體。經(jīng)不同劑量補腎安胎方治療后,TEM觀察顆粒細(xì)胞凋亡所特有的超微結(jié)構(gòu)變化明顯改善,甚至消失,可見正常顆粒細(xì)胞核仁,線粒體增多,嵴增多,空泡明顯減少,脂滴圓形或橢圓形。經(jīng)補腎安胎方治療后,卵巢組織中促凋亡蛋白Bax、凋亡終末剪切酶Cleaved-Caspase-3蛋白表達(dá)下調(diào),抗凋亡蛋白 Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)。結(jié)論補腎安胎方可能通過上調(diào)抗凋亡因子Bcl-2,下調(diào)促凋亡因子Bax和凋亡終末剪切酶Cleaved-caspase-3 凋亡信號通路的表達(dá),抑制卵巢顆粒細(xì)胞凋亡,從而有助于COH著床障礙模型小鼠黃體的形成與維持,改善小鼠著床障礙,減少胚胎丟失,提高孕育成功率。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5;R-332
【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
ABSTRACT
第一部分 補腎活血方對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的卵巢早衰小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 補腎安胎方對控制性超促排卵著床障礙模型小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝

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