目的:通過體外實(shí)驗(yàn)研究小青龍湯對肺癌H292細(xì)胞活性及分泌MUC5AC的影響,探討小青龍湯作用的分子機(jī)制并為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:采用MTT法檢測不同劑量小青龍湯(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)對人肺癌H292細(xì)胞活性的抑制作用;倒置顯微鏡觀察不同劑量小青龍湯對H292細(xì)胞產(chǎn)生的形態(tài)學(xué)影響;ELISA法檢測IL-1β誘導(dǎo)的H292細(xì)胞MUC5AC分泌情況,根據(jù)結(jié)果建立體外炎癥模型,并檢測不同劑量小青龍湯(1000μg/mL、500μg/mL)對炎癥模型細(xì)胞分泌MUC5AC、IL-8、TNF-α的影響;Western Blot法檢測小青龍湯對炎癥模型細(xì)胞NF-κB信號通路IκB、P65蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1 MTT法檢測結(jié)果顯示,與空白對照組相比,不同劑量小青龍湯(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)作用H292細(xì)胞24h、48h后,OD值均有降低(P0.01)。隨著給藥濃度的增加,細(xì)胞抑制率增加,在同一時間里細(xì)胞抑制率有劑量依賴性。2不同濃度小青龍湯(1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL)作用H292細(xì)胞24h、48h后,在倒置顯微鏡下可以觀察到H292細(xì)胞發(fā)生了不同程度的變小、變圓,細(xì)胞間隙增大,細(xì)胞碎片增多等改變,1000μg/mL濃度組的改變最為明顯。3 ELISA結(jié)果顯示使用IL-1β作為刺激劑,當(dāng)IL-1β濃度為5ng/mL,作用時間為24h時,H292細(xì)胞分泌到胞外的MUC5AC含量與對照組相比有差異(P0.05),并且此時由細(xì)胞分泌到胞外的MUC5AC含量占細(xì)胞總產(chǎn)生量(胞內(nèi)+胞外)的百分比最高,可作為炎癥模型用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。在檢測細(xì)胞上清MUC5AC、IL-8、TNF-α的表達(dá)中,與模型組相比,抑制劑組、小青龍湯高劑量組(1000μg/mL)和小青龍湯低劑量組(500μg/mL)均有降低(P0.05)。4 Western Blot結(jié)果顯示,與空白對照組比較,模型組H292細(xì)胞中NF-κB通路相關(guān)蛋白IκB的表達(dá)水平下降,P65的表達(dá)升高(P0.05)。與模型組相比,抑制劑組、小青龍湯高劑量組(1000μg/mL)和小青龍湯低劑量組(500μg/mL)細(xì)胞中蛋白IκB的表達(dá)均有不同程度的升高(P0.05);P65的蛋白表達(dá)有不同程度的降低(P0.05)。結(jié)論:1小青龍湯可以抑制肺癌H292細(xì)胞活性,并具有劑量依賴性。2小青龍湯可以降低炎癥狀態(tài)下肺癌H292細(xì)胞分泌的MUC5AC表達(dá),同時減少炎癥細(xì)胞因子IL-8、TNF-α的釋放,減輕炎癥反應(yīng)。3小青龍湯調(diào)控MUC5AC表達(dá)及炎癥細(xì)胞因子IL-8、TNF-α分泌與NF-κB信號通路相關(guān)。
【學(xué)位單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

controlmodelAB C050100150200**#*##*圖 7.各 藥 物組 對 H292 細(xì) 胞 分 泌 TNF-α含 量 的影 響 制 劑組 ； B.小 青 龍湯 高 劑 量 組； C.小 青 龍湯 低 劑 IL-1β誘導(dǎo)的 H292 細(xì)胞 IκB、P65 蛋白表達(dá) 結(jié)果見圖 8。mL/mL
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2851685