非動脈炎性前部缺血性視神經(jīng)病變(nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy,NAION)是指由于各種原因造成供應(yīng)視神經(jīng)的血管發(fā)生循環(huán)障礙的視神經(jīng)功能異常,是導(dǎo)致中老年人視力嚴重受損,甚至失明的常見眼病。由于該病病機尚不明確,故目前缺乏公認有效的治療方法,成為一項眼科疑難病。導(dǎo)師馮俊主任醫(yī)師在辨病與辨證相結(jié)合基礎(chǔ)上,結(jié)合眼底病氣血辨證理論以及絡(luò)病學(xué)理論,將NAION的病機概括為精血虧虛、目絡(luò)瘀阻,并提出相關(guān)治法剔絡(luò)化瘀、養(yǎng)血明目法,總結(jié)經(jīng)驗方歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方。本方由當(dāng)歸、土鱉蟲、桃仁、川芎、黃芪、丹參組成,前期在臨床觀察取得了一定的療效。此次擬探討歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方改善NAION的作用機制。目的:觀察不同劑量歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方對大鼠NAION模型視神經(jīng)組織病理學(xué)改變的影響,探討歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方可能改善大鼠NAION模型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡的作用機制,探討歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方改善大鼠NAION模型血管舒縮、氧化應(yīng)激的作用機制。方法:選用健康SD大鼠96只,隨機分為正常組,模型組,甲鈷胺組以及中藥低、中、高劑量組,除正常組外其他組均采用光動力法制備NAION模型。造模成功后,正常組常規(guī)飼養(yǎng),模型組采用蒸餾水灌胃,其他藥物組分別采用相對應(yīng)藥物灌胃,總共干預(yù)28天。第28天取材,分別通過經(jīng)上丘逆行標記RGC、HE染色、視神經(jīng)透射電鏡、Western blotting、酶聯(lián)免疫法、放射免疫法、比色法從形態(tài)和功能角度討論歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方改善NAION的作用機制。結(jié)果:1.視神經(jīng)病理切片HE染色后,正常組大鼠纖維排列規(guī)則有序,其間可見膠質(zhì)細胞。模型組大鼠4周后視神經(jīng)萎縮,視盤周圍神經(jīng)纖維層變薄,視神經(jīng)內(nèi)可見細胞增生,紅細胞溢出。甲鈷胺組大鼠視神經(jīng)萎縮,盤周視神經(jīng)纖維層結(jié)構(gòu)疏松明顯。中藥低劑量組大鼠視神經(jīng)萎縮,盤周神經(jīng)纖維層欠規(guī)則,網(wǎng)狀改變。中藥中劑量組大鼠視神經(jīng)萎縮,盤周神經(jīng)纖維層排列疏松。中藥高劑量組大鼠視神經(jīng)纖維排列有序,盤周神經(jīng)纖維層結(jié)構(gòu)略疏松;視網(wǎng)膜病理切片HE染色后,正常組大鼠視網(wǎng)膜層次清晰,結(jié)構(gòu)完整,RGC數(shù)量豐富,排列緊湊,致密有序。模型組大鼠RGC結(jié)構(gòu)疏松,排列散亂,大部RGC缺失。甲鈷胺組大鼠RGC結(jié)構(gòu)疏松,排列散亂,較多RGC缺失。中藥低劑量大鼠RGC結(jié)構(gòu)疏松,排列散亂,較多RGC缺失。中藥中劑量組大鼠RGC結(jié)構(gòu)略緊密,排列有序,間有缺失。中藥高劑量組大鼠RGC結(jié)構(gòu)緊湊有序,RGC數(shù)量較豐富,偶有缺失。視神經(jīng)透射電鏡觀察正常大鼠視神經(jīng)內(nèi)神經(jīng)纖維束大小不等,視神經(jīng)纖維束膜內(nèi)包裹大量排列較為規(guī)整的軸突。模型組大鼠視神經(jīng)大量軸突消失,膠質(zhì)瘢痕明顯,軸索腫脹,髓鞘解體。甲鈷胺組大鼠視神經(jīng)軸突消失較多,排列不規(guī)則,膠質(zhì)瘢痕嚴重,軸索腫脹。中藥低劑量組大鼠視神經(jīng)軸突消失較多,排列不規(guī)則,膠質(zhì)瘢痕嚴重,軸索腫脹。中藥中劑量組大鼠視神經(jīng)軸突排列略紊亂,軸突部分缺失,軸索腫脹。中藥高劑量組大鼠視神經(jīng)軸突排列有序,缺失較少,偶有髓鞘異常。熒光顯微鏡大鼠RGC分布:熒光顯微鏡下可見RGC形態(tài)清晰,分布呈放射狀排列,與視網(wǎng)膜血管走形方向一致,鄰近視盤處RGC排列較為緊密,向視網(wǎng)膜周邊部延伸分布的RGC排列逐漸稀疏。正常組大鼠實驗眼各象限RGC密度無明顯差異,模型組大鼠實驗眼RGC數(shù)量明顯減少,視乳頭上方區(qū)域減少較其他區(qū)域更為明顯,可見胞體形狀不規(guī)則之小膠質(zhì)細胞散在分布,甲鈷胺組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組均可見實驗眼RGC數(shù)量減少并呈區(qū)域性分布。RGC存活率:不同組別RGC存活率存在統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)LSD法兩兩比較:模型組,甲鈷胺組,中藥低、中、高劑量組RGC數(shù)量均低于正常組;中藥低、中、高以及甲鈷胺組的RGC存活率均高于模型組;中藥中、高劑量組的RGC數(shù)量高于甲鈷胺組;中藥中、高劑量組的RGC數(shù)量高于中藥低劑量組;中藥高劑量組RGC數(shù)量高于中藥中劑量組;甲鈷胺組與中藥低劑量組間不存在統(tǒng)計學(xué)意義。2.不同組別caspase-3存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。經(jīng)過LSD法兩兩比較:中藥低、中、高劑量組及甲鈷胺組均與正常組之間存在統(tǒng)計學(xué)意義;甲鈷胺組及中藥高劑量組caspase-3表達低于模型組;中藥低劑量組、中藥中劑量組caspase-3表達高于甲鈷胺組;中藥高劑量組caspase-3表達低于中藥低劑量組;中藥高劑量組caspase-3表達低于中藥中劑量組;中藥高劑量組與甲鈷胺組無統(tǒng)計學(xué)意義。不同組別caspase-9存在統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)過LSD法兩兩比較:模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、甲鈷胺組均與正常組之間存在統(tǒng)計學(xué)意義;中藥高劑量組caspase-9表達低于模型組;中藥高劑量組caspase-9表達低于甲鈷胺組;中藥高劑量組caspase-9表達低于中藥低劑量組;中藥高劑量組caspase-9表達低于中藥中劑量組;模型組、甲鈷胺組、中藥低劑量組、中藥中劑量組之間均無統(tǒng)計學(xué)意義。不同組別fas存在統(tǒng)計學(xué)意義,經(jīng)過LSD法兩兩比較:中藥高劑量組及甲鈷胺組fas表達低于正常組;甲鈷胺組及中藥高劑量組fas表達低于模型組;中藥低劑量組、中藥中劑量組fas表達高于甲鈷胺組,中藥高劑量組fas表達低于甲鈷胺組;中藥高劑量組fas表達低于中藥低劑量組;中藥高劑量組fas表達低于中藥中劑量組。不同組別fas配體(fas-ligand,fas-1)存在統(tǒng)計學(xué)意義,經(jīng)過LSD法兩兩比較:中藥高劑量組及甲鈷胺組均與正常組之間存在統(tǒng)計學(xué)意義;甲鈷胺組及中藥高劑量組fas-1表達低于模型組;中藥低劑量組、中藥中劑量組fas-1表達高于甲鈷胺組;中藥高劑量組fas-1表達低于中藥低劑量組;中藥高劑量組fas-1表達低于中藥中劑量組。不同組別bcl-2存在統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)過LSD法兩兩比較:模型組、低、中、高、甲鈷胺組的bcl-2表達均高出正常組表達;中藥高劑量組bcl-2表達高于模型組、甲鈷胺組、中藥低劑量組、中藥中劑量組。中藥模型組、甲鈷胺組、中藥低劑量組、中藥高劑量組之間均不存在統(tǒng)計學(xué)意義。不同組別bax存在統(tǒng)計學(xué)意義,經(jīng)過LSD法兩兩比較:模型組、中藥低劑量組均與正常組之間存在統(tǒng)計學(xué)意義;甲鈷胺組及中藥低、中、高劑量組與模型組之間存在統(tǒng)計學(xué)意義;中藥低劑量組bax表達高于甲鈷胺組、中藥高劑量組bax表達低于甲鈷胺組;中藥中、高劑量組bax表達低于中藥低劑量組;中藥高劑量組bax表達低于中藥中劑量組。3.不同組別活性氧(reactive oxygen species,ROS)存在統(tǒng)計學(xué)意義,經(jīng)過LSD法兩兩比較:模型組ROS表達高于正常組,中藥高劑量組ROS表達低于正常組;中藥低、中、高劑量組ROS表達低于模型組;中藥高劑量組ROS表達低于中藥低劑量組;中藥高劑量組ROS表達低于中藥中劑量組。不同組別在超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)上存在顯著差異。經(jīng)過LSD法兩兩比較,模型組與正常組、高組之間均存在顯著差異。不同組別一氧化氮(nitric oxide,NO)不存在統(tǒng)計學(xué)意義。不同組別在血管內(nèi)皮素-1(endothelin-1,'ET-1)上存在統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)過LSD法兩兩比較:模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組ET-1表達均高于正常組;中藥低、中、高組ET-1表達全部低于模型組;中藥中、高劑量組ET-1表達全部低于中藥低劑量組;中藥高劑量組ET-1表達低于中藥中劑量組。結(jié)論:1.歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方對NAION模型大鼠病理組織形態(tài)的修復(fù)起到一定積極作用,可能具有防止或延緩RGC死亡的作用,高劑量歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方效果更優(yōu)。2.高劑量組中藥歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方可能具有從抑制外源性途徑及內(nèi)源性途徑蛋白凋亡雙重作用并刺激凋亡抑制蛋白表達等方面起到抑制RGC凋亡的作用。3.高劑量組中藥歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方針對大鼠NAION模型可能具有一定的保證血管張力穩(wěn)定,保護器官灌流以及修復(fù)損傷的作用;高劑量組中藥歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方可以通過抑制自由基在體內(nèi)不斷堆積,促進自由基清除劑生成,減少脂質(zhì)過氧化物的生成和堆積,降低氧化應(yīng)激反應(yīng)的負面效應(yīng),維護氧化與抗氧化之間作用的平衡等方式保護視神經(jīng)。
【學(xué)位單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

診為“雙眼缺血性視神經(jīng)病變”，中醫(yī)診斷“雙眼暴盲精血虧虛、目絡(luò)瘀阻”。??予歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方治療，１個月后雙眼視力均恢復(fù)至１．０，查視野缺損范圍明顯??改善（圖１）。??２２??

診為“雙眼缺血性視神經(jīng)病變”，中醫(yī)診斷“雙眼暴盲精血虧虛、目絡(luò)瘀阻”。??予歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方治療，５０天后右眼視力恢復(fù)至０．６，左眼視力恢復(fù)至０．２，查??視野缺損范圍明顯改善（圖２）。??ｍ??＿?＇￣７＾．．?國■－、丨丨」■＿■＿??—一?一一?？?．ｒ?ｖ??圖２：患者治療前后視野情況。Ａ．右眼治療前，視力０．１２；?Ｂ．右眼治療后，視力??０．６；?Ｃ．左眼治療前，視力眼前指數(shù)；Ｄ．左眼治療后，視力０．２。??２４??

診為“右眼缺血性視神經(jīng)病變”，中醫(yī)診斷“右眼暴盲精血虧虛、目絡(luò)瘀阻”。??予歸元剔絡(luò)養(yǎng)血方治療，３０天后右眼視力恢復(fù)至０．６，左眼視力恢復(fù)至０．４，查??視野缺損范圍明顯改善（圖３）。??２５??
【參考文獻】

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本文編號：2851388