研究背景樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)是免疫抑制治療的最主要靶點(diǎn)之一,是機(jī)體調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞,在調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、引發(fā)免疫反應(yīng)和介導(dǎo)免疫耐受兩方面發(fā)揮重要作用。研究表明,DCs廣泛參與感染、腫瘤、自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展,故研究DCs參與發(fā)病的原因及其作用機(jī)制對(duì)于治療這些疾病有深厚的理論基礎(chǔ)。異鼠李素(Isorhamnetin,Iso)是從中藥沙棘中分離出的黃酮類化合物的主要活性成分,它發(fā)揮多種生物學(xué)作用,如抗氧化、抗炎、抗腫瘤、保護(hù)心血管等。Iso還被證實(shí)可以調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),如通過抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生保護(hù)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎。但是Iso在免疫系統(tǒng)上的細(xì)胞靶標(biāo)及相應(yīng)的作用機(jī)制還沒有被闡明,Iso對(duì)DCs功能的影響尚無人報(bào)道。因此,本文首次研究了 Iso對(duì)骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(Bone marrow deprived DCs,BMDCs)成熟、遞呈抗原、吞噬、遷移的影響。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)針對(duì)DCs功能的靶向治療藥物,為自身免疫性疾病治療提供理論基礎(chǔ)和實(shí)用價(jià)值。目的1、探討Iso對(duì)樹突狀細(xì)胞成熟、活化、抗原遞呈、內(nèi)吞的影響。2、探討Iso對(duì)樹突狀細(xì)胞遷移功能的影響。方法本研究以BMDCs為研究對(duì)象,取小鼠骨髓分離培養(yǎng)、CD11c磁珠純化BMDCs,首先采用凋亡壞死率和CCK8檢測(cè)Iso對(duì)BMDCs的細(xì)胞毒性作用。取得安全濃度后采用流式細(xì)胞儀觀察Iso對(duì)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激前后BMDCs的表面共刺激分子CD40,CD80,CD86和MHC Ⅱ類分子表達(dá)的影響;采用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-12p70和IL-10表達(dá),采用Luminex法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α),IL-6和IL-1β的表達(dá);采用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)Iso對(duì)BMDCs刺激CD4+T細(xì)胞增殖情況的影響;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMDCs吞噬大分子物質(zhì)FITC-Dextran的能力;采用Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)觀察Iso對(duì)BMDCs遷移能力的影響,同時(shí)采用流式細(xì)胞儀分析Iso對(duì)成熟BMDCs表面趨化因子受體(chemokine receptor,CCR)5,CCR7和CXCR4表達(dá)的影響,進(jìn)一步明確Iso對(duì)BMDCs遷移的影響。結(jié)果本研究結(jié)果表明,體外培養(yǎng)的BMDCs在LPS刺激下表型和功能成熟,Iso干預(yù)后可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的BMDCs表面CD40、CD80和CD86表達(dá),對(duì)MHCⅡ表達(dá)無影響;同樣Iso干預(yù)后能顯著抑制成熟BMDCs分泌細(xì)胞因子TNF-α,IL-6、IL-1β和IL-12p70,但是對(duì)BMDCs的吞噬功能和刺激T細(xì)胞增殖的能力沒有影響。此外,Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Iso干預(yù)后可顯著抑制成熟BMDCs遷移的能力,通過對(duì)其表面趨化因子受體檢測(cè),我們結(jié)果發(fā)現(xiàn)Iso主要通過抑制CCR7表達(dá)來阻止BMDCs遷移。綜上,Iso可能是一種有效的免疫調(diào)節(jié)劑,它通過抑制BMDCs的成熟和遷移,有望成為預(yù)防及治療慢性炎癥性疾病、自身免疫性疾病的有效藥物。結(jié)論1、Iso顯著抑制體外BMDCs表型及功能成熟。2、Iso顯著抑制體外BMDCs體外遷移。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R593.2
【部分圖文】：

本實(shí)驗(yàn)同時(shí)采用ＣＣＫ８實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)細(xì)胞毒性，結(jié)果表明，與空白組相??比，當(dāng)Ｉｓｏ的濃度時(shí)，ＯＤ值無顯著差異（Ｐ＞０．０５），當(dāng)Ｉｓｏ的濃度２１００??時(shí)，ＯＤ值明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０１）。具體見圖２－３。表明??Ｉｓ〇２的濃度１００?時(shí)細(xì)胞毒性明顯，而１０?對(duì)細(xì)胞無毒性，本課題后續(xù)實(shí)??驗(yàn)中均以安全濃度１０｜ｉＭ的Ｉｓｏ作為各實(shí)驗(yàn)的干預(yù)濃度。??２３??

Ｉ?｜?Ｉ??圖２－２不同濃度Ｉｓｏ對(duì)ＢＭＤＣｓ凋亡壞死的影響。當(dāng)Ｉｓｏ的濃度對(duì)細(xì)胞凋亡壞死率無??顯著差異（Ｐ＞０．０５），Ｉｓｏ的濃度２ｌ００｜ｉＭ時(shí)，凋亡壞死率顯著升高（Ｐ＜０．０５）。＊＊ｐ＜０．０１；??ＮＳ，ｐ＞０．０５。??Ｆｉｇ．２－２?Ｔｈｅ?ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?Ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｎ?ＢＭＤＣｓ．?Ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ＢＭＤＣｓ（＞９５％?ｆｏｒ??ＣＤｌｌｃ＋ｃｅｌｌｓ）?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｖａｒｉｏｕｓ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?Ｉｓｏ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｐｒｅｓｅｎｃｅ?ｏｒ?ａｂｓｅｎｃｅ?ｏｆ??ＬＰＳ（ｌ｜ｉｇ／ｍｌ），?ｔｈｅｎ?ｓｔａｉｎｅｄ?ｗｉｔｈ?Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－ＦＩＴＣ／?Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ?Ｉｏｄｉｎｅ?Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?Ｋｉｔ．??Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ａｎｄ?ｎｅｃｒｏｔｉｃ?ｒａｔｅｓ?ｗｅｒｅ?ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ?ｂｙ?ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．?Ｔｈｅ?Ｖａｌｕｅｓ?ａｒｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ａｓ??ｍｅａｎｓ土ＳＥＭ?ｏｆ?ｔｈｒｅｅ?ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．?＊＊?ｐ＜０．０１?ｗｅｒｅ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ?ｂｅｔｗｅｅｎ??Ｉｓｏ－ｔｒｅａｔｅｄ?ｖｅｒｓｕｓ?Ｉｓｏ?０｝ｉＭ，?ＮＳ，?ｐ＞０．０５．??３．２．２?ＣＣＫ８試齊ｌｊ盒檢測(cè)Ｉｓｏ對(duì)細(xì)胞的毒性：為了更準(zhǔn)確驗(yàn)證Ｉｓｏ對(duì)細(xì)胞（ＢＭＤＣｓ）??的毒性，本實(shí)驗(yàn)同時(shí)采用ＣＣＫ８實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)細(xì)胞毒性，結(jié)果表明，與空白組相??比

功能成熟的影響。第８天收獲了純化ＢＭＤＣｓ后，用ｌｕｇ／ｍＬ?ＬＰＳ刺激ＢＭＤＣｓ??成熟，再用１８〇１０＾刺激細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)８＾＃潮礱媯埃埃福�、＃埃福丁�??ＣＤ４０、ＭＨＣＩＩ（Ｉ－Ａｂ）的表達(dá)，以平均熒光強(qiáng)度（ＭＦＩ）表示檢測(cè)結(jié)果，如圖３－１??所示，我們的數(shù)據(jù)表明，與單純組比較，單用Ｉｓｏ?（１〇ｈＭ）干預(yù)組對(duì)ＢＭＤＣｓ的??表面共刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＭＨＣＩＩ（Ｉ－Ａｂ）的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，??表明ｉＤＣｓ表面低表達(dá)共刺激分子、Ｉｓｏ對(duì)ｉＤＣｓ表面表型改變無影響。與單純對(duì)??照組比較，ＬＰＳ刺激后ＢＭＤＣｓ表面ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＭＨＣＩＩ（Ｉ－Ａｂ）表達(dá)顯??著升高（Ｐ＜０．０１），表明ＬＰＳ有效刺激ＢＭＤＣｓ活化成熟；Ｉｓｏ?（１０ｕＭ）對(duì)ＬＰＳ??催熟后的ＢＭＤＣｓ進(jìn)行預(yù)干預(yù)后，ＢＭＤＣｓ表面共刺激分子ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０??的表達(dá)明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５），說明Ｉｓｏ通過抑制成熟ＢＭＤＣｓ??表面ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０表達(dá)來抑制ＢＭＤＣｓ成熟，而Ｉｓｏ對(duì)ＬＰＳ催熟后ＢＭＤＣｓ??的胃以叩－八？表達(dá)無影響⑶：＾見）。??３８??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Signaling mechanisms for regulation of chemotaxis[J];Cell Research;2005年01期

本文編號(hào)：2847988