目的:通過觀察各組SHR(Spontaneous Hypertension Rat)腎間質(zhì)纖維化的程度,探討黃芪-丹參藥對防治腎間質(zhì)纖維化病理進(jìn)程,維持腎臟結(jié)構(gòu)、功能的藥效學(xué);通過兩藥配伍研究其對腎臟結(jié)構(gòu)、促纖維化因子表達(dá)及對腎臟內(nèi)PI3K、AKT的蛋白質(zhì)和mRNA表達(dá)的影響,探究黃芪-丹參配伍改善RIF的作用機制。方法:(1)45只16周齡SHR作為實驗組,9只同周齡WKY大鼠作為對照組,飼養(yǎng)至24周齡,使用隨機數(shù)字表法分組,實驗組每組9只,共分為5組:H組(黃芪組)、D組(丹參組)、HD組(黃芪-丹參組)、X組(纈沙坦組)、M組(SHR模型組),對照組為W組(9只WKY)。(2)每組大鼠相應(yīng)藥物灌胃干預(yù)(每只2ml/日),持續(xù)4周。(3)干預(yù)療程結(jié)束后,大鼠麻醉,主動脈取血,ELISA測血清AngⅡ、β2-MG等影響腎間質(zhì)纖維化標(biāo)志物的濃度。(4)提取大鼠腎臟標(biāo)本,行HE染色與透射電鏡觀察腎臟形態(tài)、結(jié)構(gòu)及組織病理變化。(5)免疫組化觀察腎臟組織中促纖維化細(xì)胞因子表達(dá);(6)RT-PCR測試腎臟內(nèi)PI3K、AKT的mRNA水平變化,WB測試腎臟內(nèi)PI3K、AKT的蛋白質(zhì)水平變化。結(jié)果:(1)各用藥組較M組相比,大鼠血清β2-MG含量均有降低,差異明顯(P0.05),其中以HD組血清指標(biāo)含量最低,與其他用藥組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與M組對比,其余5組大鼠血清AngⅡ檢驗結(jié)果顯著下降(P0.05),其中以HD組效果最為明顯,與其他用藥組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。(2)HE示:WKY組腎臟組織形態(tài)正常,無明顯病理表現(xiàn),其余各用藥組少見腎間質(zhì)小灶纖維化,發(fā)現(xiàn)輕度增生的系膜,每系膜區(qū)細(xì)胞數(shù)量減少,少見炎性浸潤,可見少量蛋白管型,以HD組腎臟組織結(jié)構(gòu)及形態(tài)最為正常,趨近于WKY組。(3)TEM示:各用藥組與M組對比,少量成纖維細(xì)胞聚集,細(xì)胞形態(tài)較正常,炎癥浸潤減輕,各細(xì)胞器較豐富,基底膜基本正常,偶見輕度增厚,其中HD組腎臟組織病理表現(xiàn)最優(yōu)。(4)IHC示:各組TGF-β1、CTGF受體表達(dá)存在明顯差異,其中以M組TGF-β1、CTGF陽性表達(dá)率最高,HD組及WKY組陽性表達(dá)率最低,其余用藥組較M組陽性表達(dá)率均有不同程度降低。(5)RT-PCR示:M組PI3K、AKT的mRNA表達(dá)與其余5組對比明顯增多(P0.05),其中以HD組抑制作用最為顯著;Western Blotting結(jié)果提示其余組別PI3K、AKT的蛋白表達(dá)量均較M組明顯抑制,以HD組抑制效果最為顯著。結(jié)論:(1)HD相伍可顯著改善SHR大鼠RIF的輕重,藥效學(xué)比較優(yōu)于H組、D組、X組;(2)黃芪-丹參藥對改善腎間質(zhì)纖維化的藥理機制與其抑制SHR腎臟PI3K、AKT表達(dá),阻斷PI3K/AKT通路激活密切相關(guān)。
【學(xué)位單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1 血清β2 微球蛋白標(biāo)志物含量鼠血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）的含量發(fā)現(xiàn)，模型組與各用藥組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0及纈沙坦組、WKY 對照組與模型組比較差異具有顯著性意義

但黃芪-丹參藥對效果好于單味中藥，且優(yōu)于纈沙坦組，詳見表 4、圖2。表 4 血清 AngⅡ標(biāo)志物的含量 （X±S）注：*P＜0.05 示與 SHR 模型組比較差異存在顯著性，**P＜0.01 表示與 SHR 模型組比較具有極顯著性差異，ΔP＜0.01 表示與黃芪-丹參組比較具有極顯著性差異。圖 2 血清 AngⅡ標(biāo)志物含量1.4.3 HE 染色WKY 腎小球大小正常，系膜區(qū)未見明顯增生，腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)正常，無腎小球硬化。SHR 模型組可見腎小球體積增大，系膜區(qū)增生，每系膜細(xì)胞數(shù)量 3～5 個，系膜基質(zhì)擴大，少量腎小球局灶階段硬化，球囊黏連，毛細(xì)血管管腔擴張充血，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，空泡變性，可見蛋白管型，腎間質(zhì)小灶纖維化，炎細(xì)胞灶性浸潤，間質(zhì)內(nèi)小動脈肌層明顯增厚。黃芪組、丹參組、纈沙坦組可見腎小球體積稍增大，系膜區(qū)可見輕度增生，每系膜細(xì)胞數(shù)量 2～3 個，系膜基質(zhì)輕度擴大，個別腎小球從局灶階段硬化，毛細(xì)血管輕度擴張，腎小球上皮細(xì)胞輕度腫脹，可見少量蛋白管型，炎細(xì)胞灶性浸潤；黃芪-丹參組組織較其他用藥組腎小球體積較正常，系膜區(qū)增生較輕，每系膜細(xì)胞數(shù)量 1～2 個

1.4.4 透射電鏡觀察腎臟組織如圖 4 所示，WKY 組細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，基底膜結(jié)構(gòu)正常，足突排列規(guī)則，無小管間質(zhì)纖維化表現(xiàn)，無炎癥浸潤；M 組細(xì)胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)不規(guī)則，可見明顯的足突融合，細(xì)胞質(zhì)明顯減少，足突寬大，腎間質(zhì)明顯水腫和細(xì)胞數(shù)增多，
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2847914