目的:通過觀察各組SHR(Spontaneous Hypertension Rat)腎間質纖維化的程度,探討黃芪-丹參藥對防治腎間質纖維化病理進程,維持腎臟結構、功能的藥效學;通過兩藥配伍研究其對腎臟結構、促纖維化因子表達及對腎臟內PI3K、AKT的蛋白質和mRNA表達的影響,探究黃芪-丹參配伍改善RIF的作用機制。方法:(1)45只16周齡SHR作為實驗組,9只同周齡WKY大鼠作為對照組,飼養(yǎng)至24周齡,使用隨機數(shù)字表法分組,實驗組每組9只,共分為5組:H組(黃芪組)、D組(丹參組)、HD組(黃芪-丹參組)、X組(纈沙坦組)、M組(SHR模型組),對照組為W組(9只WKY)。(2)每組大鼠相應藥物灌胃干預(每只2ml/日),持續(xù)4周。(3)干預療程結束后,大鼠麻醉,主動脈取血,ELISA測血清AngⅡ、β2-MG等影響腎間質纖維化標志物的濃度。(4)提取大鼠腎臟標本,行HE染色與透射電鏡觀察腎臟形態(tài)、結構及組織病理變化。(5)免疫組化觀察腎臟組織中促纖維化細胞因子表達;(6)RT-PCR測試腎臟內PI3K、AKT的mRNA水平變化,WB測試腎臟內PI3K、AKT的蛋白質水平變化。結果:(1)各用藥組較M組相比,大鼠血清β2-MG含量均有降低,差異明顯(P0.05),其中以HD組血清指標含量最低,與其他用藥組比較有統(tǒng)計學意義(P0.01);與M組對比,其余5組大鼠血清AngⅡ檢驗結果顯著下降(P0.05),其中以HD組效果最為明顯,與其他用藥組比較有統(tǒng)計學意義(P0.01)。(2)HE示:WKY組腎臟組織形態(tài)正常,無明顯病理表現(xiàn),其余各用藥組少見腎間質小灶纖維化,發(fā)現(xiàn)輕度增生的系膜,每系膜區(qū)細胞數(shù)量減少,少見炎性浸潤,可見少量蛋白管型,以HD組腎臟組織結構及形態(tài)最為正常,趨近于WKY組。(3)TEM示:各用藥組與M組對比,少量成纖維細胞聚集,細胞形態(tài)較正常,炎癥浸潤減輕,各細胞器較豐富,基底膜基本正常,偶見輕度增厚,其中HD組腎臟組織病理表現(xiàn)最優(yōu)。(4)IHC示:各組TGF-β1、CTGF受體表達存在明顯差異,其中以M組TGF-β1、CTGF陽性表達率最高,HD組及WKY組陽性表達率最低,其余用藥組較M組陽性表達率均有不同程度降低。(5)RT-PCR示:M組PI3K、AKT的mRNA表達與其余5組對比明顯增多(P0.05),其中以HD組抑制作用最為顯著;Western Blotting結果提示其余組別PI3K、AKT的蛋白表達量均較M組明顯抑制,以HD組抑制效果最為顯著。結論:(1)HD相伍可顯著改善SHR大鼠RIF的輕重,藥效學比較優(yōu)于H組、D組、X組;(2)黃芪-丹參藥對改善腎間質纖維化的藥理機制與其抑制SHR腎臟PI3K、AKT表達,阻斷PI3K/AKT通路激活密切相關。
【學位單位】：山東中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1 血清β2 微球蛋白標志物含量鼠血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）的含量發(fā)現(xiàn)，模型組與各用藥組相比差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0及纈沙坦組、WKY 對照組與模型組比較差異具有顯著性意義

但黃芪-丹參藥對效果好于單味中藥，且優(yōu)于纈沙坦組，詳見表 4、圖2。表 4 血清 AngⅡ標志物的含量 （X±S）注：*P＜0.05 示與 SHR 模型組比較差異存在顯著性，**P＜0.01 表示與 SHR 模型組比較具有極顯著性差異，ΔP＜0.01 表示與黃芪-丹參組比較具有極顯著性差異。圖 2 血清 AngⅡ標志物含量1.4.3 HE 染色WKY 腎小球大小正常，系膜區(qū)未見明顯增生，腎小管上皮細胞形態(tài)正常，無腎小球硬化。SHR 模型組可見腎小球體積增大，系膜區(qū)增生，每系膜細胞數(shù)量 3～5 個，系膜基質擴大，少量腎小球局灶階段硬化，球囊黏連，毛細血管管腔擴張充血，腎小管上皮細胞腫脹，空泡變性，可見蛋白管型，腎間質小灶纖維化，炎細胞灶性浸潤，間質內小動脈肌層明顯增厚。黃芪組、丹參組、纈沙坦組可見腎小球體積稍增大，系膜區(qū)可見輕度增生，每系膜細胞數(shù)量 2～3 個，系膜基質輕度擴大，個別腎小球從局灶階段硬化，毛細血管輕度擴張，腎小球上皮細胞輕度腫脹，可見少量蛋白管型，炎細胞灶性浸潤；黃芪-丹參組組織較其他用藥組腎小球體積較正常，系膜區(qū)增生較輕，每系膜細胞數(shù)量 1～2 個

1.4.4 透射電鏡觀察腎臟組織如圖 4 所示，WKY 組細胞質豐富，細胞結構正常，基底膜結構正常，足突排列規(guī)則，無小管間質纖維化表現(xiàn)，無炎癥浸潤；M 組細胞結構、形態(tài)不規(guī)則，可見明顯的足突融合，細胞質明顯減少，足突寬大，腎間質明顯水腫和細胞數(shù)增多，
【參考文獻】

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1 于方;姜紅;;腎小管上皮間質轉化的研究進展[J];國際兒科學雜志;2017年04期

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3 李金霞;馬曉燕;;辨證論治高血壓腎損害[J];實用中醫(yī)內科雜志;2015年07期

4 劉尚建;劉玉寧;沈存;柳紅芳;孫魯英;王世東;孫衛(wèi)衛(wèi);劉忠杰;王耀獻;;腎絡癥瘕聚散理論的三態(tài)四期初探[J];中國中西醫(yī)結合腎病雜志;2015年04期

5 馮昱斌;方祝元;;高血壓腎損害的中醫(yī)藥治療與研究[J];安徽醫(yī)藥;2014年12期

6 許云;;阿托伐他汀對腎間質纖維化的作用及機制[J];青島大學醫(yī)學院學報;2014年01期

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本文編號：2847914