研究不同提取方法對(duì)山楂葉多糖提取率和抗氧化活性的影響,為進(jìn)一步開發(fā)利用山楂葉多糖提供技術(shù)依據(jù).分別采用熱水浸提法、超聲波輔助水提法、微波輔助水提法提取山楂葉多糖.試驗(yàn)結(jié)果表明:熱水浸提法提取山楂葉多糖的最適條件為料液比1∶30(m∶V)、提取溫度90℃,多糖提取率為5.45%;超聲波輔助水提法提取山楂葉多糖最適條件為料液比1∶30(m∶V)、超聲波功率100 W,多糖提取率為6.82%;微波輔助水提法提取山楂葉多糖的最適條件為料液比1∶30(m∶V)、微波功率300 W,多糖提取率為7.68%.微波輔助水提法提取山楂葉多糖的效果最好,明顯優(yōu)于超聲波輔助水提法和熱水浸提法.同時(shí)以DPPH自由基清除能力,·OH自由基清除能力,Fe~(3+)還原力為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究不同提取方法對(duì)山楂葉多糖體外抗氧化活性的影響.結(jié)果表明:3種方法提取的粗多糖均具有一定的抗氧化能力,超聲波輔助法提取的山楂葉多糖的體外抗氧化活性最高,明顯優(yōu)于微波輔助水提法和熱水浸提法.
【部分圖文】：

抗氧化活性與還原力之間存在直接的關(guān)系,若抗氧化物質(zhì)的還原力越強(qiáng),則該抗氧化物質(zhì)的抗氧化活性越強(qiáng).因此,測(cè)定抗氧化物質(zhì)的還原力,可以間接便顯出抗氧化物質(zhì)的抗氧化活性.通常向抗氧化物質(zhì)的溶液中添加鐵氰化鉀來表現(xiàn)還原力,體系中的Fe3+在抗氧化劑的作用下生成Fe2+,Fe2+在700 nm處有吸收峰,可通過分光光度計(jì)測(cè)出.當(dāng)吸光度越大,則表明該體系中的Fe2+越多,還原力越強(qiáng)[26-27]不同方式提取山楂葉多糖的總還原能力結(jié)果見圖1.由圖1可知,超聲波提取山楂葉多糖,微波提取多糖和水提取多糖的總還原能力與質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈正比關(guān)系,隨著質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,不同方式提取山楂葉多糖的總還原能力也隨之增加,同時(shí)任何一種提取多糖方式的總還原能力也顯著性增加（P<0.05）.超聲波提取山楂葉多糖的總還原能力強(qiáng)于微波提取和熱水提取,當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于0.12%時(shí),超聲波提取多糖的總還原能力上升幅度明顯高于微波提取和熱水提取綜上所述,不同方式提取山楂葉多糖的總還原能力：超聲波提取>微波提取>熱水提取.分析原因可能是：超聲波提取時(shí)間大大縮短,對(duì)多糖生物活性損傷小,同時(shí)也避免了多余的氧化化學(xué)反應(yīng)；總還原能力的差異還可能與不同提取山楂葉多糖方式對(duì)多糖分子的單糖組成和糖苷鍵型的不同有很大關(guān)系[28].

測(cè)定抗氧化性的方法中,DPPH法是較常用的一種檢測(cè)方法.DPPH自由基在有機(jī)溶劑中較穩(wěn)定,其DPPH乙醇溶液呈深紫色,位于517 nm處有吸收峰.抗氧化物質(zhì)可直接與DPPH自由基發(fā)生反應(yīng),生成穩(wěn)定的抗磁分子,DPPH乙醇溶液顏色也隨之變淺.根據(jù)吸光度變化可測(cè)定抗氧化物質(zhì)的抗氧化活性.通過測(cè)定超聲波提取、微波提取及熱水提取山楂葉多糖對(duì)DPPH自由基的清除率,以此分析對(duì)比不同提取方式對(duì)DPPH自由基的清除能力[29].不同方式提取山楂葉多糖對(duì)DPPH自由基的清除效果結(jié)果見圖2.由圖2可知,隨著質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,不同方式提取山楂葉多糖對(duì)DPPH自由基的清除率也呈正比增加,同時(shí)任何一種提取多糖方式對(duì)自由基清除率均顯著性增加.當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.06%～0.09%時(shí),超聲波提取多糖方式對(duì)DPPH自由基清除率增長(zhǎng)幅度明顯高于微波提取和熱水提取多糖對(duì)自由基的清除率.當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.15%時(shí),超聲波提取多糖對(duì)DPPH自由基清除率為57.47%,而微波提取多糖和熱水提取多糖對(duì)其自由基的清除率僅為41.23%和35.20%.綜上所述,相同質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí),超聲波提取山楂葉多糖對(duì)DPPH自由基清除率優(yōu)于微波提取和熱水提取對(duì)其清除率,且超聲波提取和微波提取山楂葉多糖對(duì)DPPH的清除率均大于熱水提取對(duì)自由基的清除率.

羥自由基是目前已知的最強(qiáng)氧化劑,可以通過H2O2與Fe2+反應(yīng)生成·OH,水楊酸可與·OH發(fā)生反應(yīng),并產(chǎn)生能在510 nm處有強(qiáng)烈吸收峰的有色物質(zhì).由于多糖分子具有還原性的半縮醛羥基,可以與·OH發(fā)生反應(yīng),使水楊酸競(jìng)爭(zhēng)的·OH減少,從而產(chǎn)生的有色物質(zhì)減少[30].不同方式提取山楂葉多糖對(duì)·OH的清除效果結(jié)果見圖3.由圖3可知,山楂葉多糖對(duì)·OH清除能力與質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈正相關(guān).表明不同方式提取山楂葉多糖對(duì)·OH清除效果與質(zhì)量分?jǐn)?shù)有較大的依賴關(guān)系,隨著粗山楂葉多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,對(duì)·OH清除效果也隨著增加.3種提取方式所得的山楂葉多糖對(duì)·OH的清除能力增長(zhǎng)趨勢(shì)大致一致,超聲波提取山楂葉多糖在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.15%時(shí)對(duì)·OH清除率高達(dá)51.43%,表明高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的山楂葉多糖對(duì)·OH也能達(dá)到較高的清除效果,能夠有效的抗氧化.相同質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí),對(duì)·OH清除率最高的為超聲波提取,其次為微波提取和熱水提取.綜上所述,不同方式提取山楂葉多糖對(duì)·OH清除效果：超聲波提取>微波提取>熱水提取.
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