目的通過體內(nèi)研究探討胃腸安方及其不同功效組成藥物拆方對胃癌裸鼠原位移植瘤生長及轉移作用效果及其配伍規(guī)律。方法將胃腸安方按其功效拆分為健脾理氣、清熱解毒、軟堅散結三大組成部分,采用2×2×2析因?qū)嶒炘O計方案,建立裸小鼠人胃癌原位移植模型。觀察胃腸安方不同功效組成藥物抑制胃癌生長及轉移作用效果及其之間是否存在交互作用。結果①胃腸安方全方組及健脾理氣組、軟堅散結組、健脾清熱組的抑瘤率分別為28.5%、24.6%、28.8%及30.2%,與模型組瘤重比較明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);軟堅散結因素在抑制瘤重方面具有主效應,健脾理氣及軟堅散結因素存在交互作用。②胃腸安全方組、清熱解毒組、健脾清熱組的轉移率分別為22.22%、10.00%、18.18%,與模型組75.00%比較,能明顯降低裸鼠胃腫瘤的轉移率(P0.05)。③胃腸安全方組及其不同治則拆方配伍各組中除軟堅散結組外,均能抑制MMP-2蛋白表達,尤其以健脾理氣組及全方組作用最為明顯(P0.05);健脾組、健脾清熱組及全方組對MMP-9蛋白表達抑制作用最為明顯(P0.05)。析因分析結果顯示,在軟堅散結因素存在時,健脾理氣因素與清熱解毒因素在下調(diào)MMP-2蛋白表達方面具有協(xié)同作用。胃腸安方及其拆方對裸鼠胃腫瘤組織MMP-2基因表達具有不同程度的抑制作用,以全方組、健脾軟堅組、清熱軟堅組作用最為明顯(P0.01)。析因分析結果顯示,健脾理氣與清熱解毒及清熱解毒與軟堅散結組之間對MMP-2的基因表達抑制具有相互交互作用。全方組、健脾軟堅組對裸鼠胃腫瘤組織MMP-9 mRNA表達抑制作用明顯(P0.01),健脾理氣與清熱解毒及健脾理氣與軟堅散結組對MMP-9 mRNA表達抑制具有相互交互作用。胃腸安方全方組及健脾理氣組明顯抑制裸鼠胃腫瘤組織MMP-2及MMP-9的活性(P0.01),析因分析結果顯示,在清熱解毒因素存在時,健脾理氣與軟堅散結因素在抑制MMP-2及MMP-9活性方面具有協(xié)同作用,而在缺乏清熱解毒因素時,健脾理氣與軟堅散結因素在抑制MMP-2及MMP-9活性方面存在拮抗作用。結論胃腸安方全方組、清熱解毒組、健脾清熱組能明顯抑制胃癌的生長和轉移,清熱解毒組抑制胃癌轉移效果最為明顯,健脾理氣因素抑制瘤重主效應具有顯著性,健脾理氣及軟堅散結因素在抑制瘤重方面存在交互作用;析因分析結果顯示,在軟堅散結因素存在的情況下,健脾理氣和清熱解毒因素對下調(diào)MMP-2蛋白表達具有協(xié)同作用,在軟堅散結因素缺乏時,健脾理氣和清熱解毒因素對下調(diào)MMP-2蛋白表達具有拮抗作用。在清熱解毒因素存在的情況下,健脾理氣和軟堅因素對抑制MMP-2和MMP-9活性具有協(xié)同作用,在清熱解毒因素缺乏時,健脾理氣和軟堅因素對抑制MMP-2和MMP-9活性存在拮抗作用。
【部分圖文】：

免疫組織化學染色觀察MMP-2蛋白表達,MMP-2陽性染色在腫瘤細胞中主要位于胞漿,并且MMP-2的陽性表達主要見于癌旁組織。見圖1。與模型組相比,胃腸安全方組及其不同治則拆方組MMP-2陽性表達均較弱(P<0.01),尤其以健脾理氣組及全方組作用最為明顯。見表5。

析因分析結果顯示,健脾理氣、清熱解毒、軟堅散結因素在抑制MMP-2、MMP-9蛋白表達方面均具有主效應,在軟堅散結因素存在的情況下,健脾理氣藥物與清熱解毒藥物對MMP-2蛋白表達的抑制具有協(xié)同作用,在軟堅散結因素不存在的情況下,健脾理氣藥物與清熱解毒藥物對MMP-2蛋白表達的抑制具有拮抗作用,而無論軟堅散結因素存在與否,健脾理氣藥物與清熱解毒藥物對MMP-9蛋白表達的抑制均具有協(xié)同作用。見表6。表5 各組胃腫瘤組織MMP-2、MMP-9蛋白表達比較 ( x ˉ ±s ) 組別 n MMP-2 MMP-9 模型組 8 10.82±1.70 16.33±2.50 全方組 9 0.33±0.13** 0.30±0.12** 健脾理氣組 10 0.67±0.19** 1.98±0.81** 清熱解毒組 10 3.50±0.76** 7.00±1.74** 軟堅散結組 10 6.00±0.18** 4.18±0.80** 健脾清熱組 11 5.53±1.09** 1.04±0.39** 健脾軟堅組 9 0.95±0.31** 1.96±0.39** 清熱軟堅組 10 0.95±0.31** 1.18±0.30** 注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

mRNA、MMP-9 mRNA表達的影響 與模型組比較,胃腸安全方及其拆方對裸鼠胃腫瘤組織MMP-2 mRNA表達的影響均有不同程度的抑制作用,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。以全方組、健脾軟堅組、清熱軟堅組作用最為明顯(P<0.01)。見圖3。胃腸安全方及其拆方對裸鼠胃腫瘤組織MMP-9 mRNA表達的影響據(jù)有不同程度的抑制作用,與模型組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。以全方組、健脾軟堅組作用最為明顯(P<0.01)。見圖4。
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