目的:糖尿病腎損傷是糖尿病(Diabetes mellitus,DM)患者最常見、也是最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。為觀察富硒木耳水提物(aqueous extract of Se-enriched A.Auricularia,AESAA)對糖尿病小鼠腎損傷的影響,并探討AESAA對糖尿病腎損傷保護作用的機制,以普通木耳水提物(aqueous extract of A.Auricularia,AEAA)做對照,進行了本項研究。方法:(1)水提取、冷凍干燥法制備AESAA和AEAA凍干粉,采用電感耦合等離子質(zhì)譜法(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)對AESAA和AEAA中硒含量進行測定。(2)采用1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)清除試驗、羥自由基清除試驗、超氧自由基清除試驗和還原力試驗共同評價AESAA的體外抗氧化能力。(3)試驗選取60只B57C/6J小鼠,采用高脂飼料飼喂并聯(lián)合單次劑量注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方式構(gòu)建Ⅱ型糖尿病小鼠模型,根據(jù)人體對硒的最大耐受量設(shè)計小鼠給藥劑量。(4)灌胃給藥8周后,處死小鼠。觀察AESAA對糖尿病小鼠口服糖耐量及血脂的影響;觀察AESAA對糖尿病小鼠血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)含量的影響;病理切片評價AESAA對小鼠腎臟病理變化的影響。(5)試劑盒檢測糖尿病小鼠血清及腎組織中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性、過氧化氫酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)的水平變化,觀察AESAA對糖尿病小鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響。(6)酶聯(lián)免疫法檢測糖尿病小鼠血清及腎組織中的炎癥因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的含量變化,觀察AESAA對糖尿病小鼠體內(nèi)炎癥因子的影響。(7)采用Western blot法研究AESAA對糖尿病小鼠腎組織中RAGE、p-Erk、p-JNK、p-P38、p-NF-κB蛋白表達的影響,并經(jīng)免疫組化法對腎組織中RAGE的表達進行驗證,確定AESAA對糖尿病腎損傷保護作用的機制。結(jié)果:(1)成功制備AESAA和AEAA凍干粉,AESAA中的硒含量為31.79 mg/kg,AEAA中的硒含量為4.4 mg/kg。(2)在4種抗氧化體系中,AESAA的抗氧化能力均明顯高于相同濃度的AEAA。其中,AESAA對DPPH自由基和羥自由基具有較強的清除能力,清除率分別為66.85%和64.69%。(3)成功建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型。(4)AESAA低劑量能降低糖尿病小鼠血糖水平(P0.05),改善糖尿病小鼠口服糖耐量;AESAA低、高劑量能夠顯著降低糖尿病小鼠血清中膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平(P0.01),增加高密度脂蛋白(HDL-C)水平(P0.01),有效改善糖尿病小鼠脂質(zhì)紊亂;AESAA低、高劑量降低糖尿病小鼠腎小球系膜基質(zhì)和空泡,且血清中腎功能指標(biāo)BUN、Cr(P0.01)和UA的水平(P0.05)較模型組小鼠明顯降低。(5)AESAA低、高劑量能升高糖尿病小鼠血清及腎組織中GSH-Px(P0.05,P0.01)、CAT(P0.05,P0.01)的活性并降低MDA(P0.05,P0.01)的含量,改善糖尿病小鼠高糖引起的氧化應(yīng)激狀態(tài)。(6)AESAA低、高劑量能降低糖尿病小鼠血清及腎組織中炎癥因子TNF-α(P0.01)、IL-1β(P0.05,P0.01)和IL-6(P0.01)的水平。(7)Western blot和免疫組化結(jié)果顯示:AESAA能降低糖尿病小鼠腎組織中RAGE、p-JNK、p-Erk、p-P38、p-NF-κB蛋白的表達(P0.05,P0.01)。結(jié)論:AESAA通過改善氧化應(yīng)激和減少炎癥減輕糖尿病小鼠的腎損傷,其機制可能是抑制RAGE/MAPK/NF-κB信號通路反應(yīng)實現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

將升溫至 160 ℃繼續(xù)消解直至觀察到消解瓶中剩余 0.5 mL 溶液左右，恢復(fù)室溫后加超純，每個樣品重復(fù)三次。ICP-MS 儀器工作條件表 1-1 ICP-MS 儀器工作條件Tab.1-1 The operating conditions of ICP-MS設(shè)定條件 工作參數(shù) 1500 W 數(shù)據(jù)采集次數(shù) 0.9 L/min 進樣深度 0.25L /min 蠕動泵速 0.8 L/min S/C 溫度 圖 1.1）計算 AESAA 及普通木耳水提物中的硒含量為 31.79 mg/kg，AEAA 中的總硒含量Y=1.370E-0.004*X+3.805E-0.05）

圖 2.1 AESAA、AEAA 及 Vc 對 DPPH 自由基的清除能力ure 2.1 the DPPH scavenging ability of AESAA, AEAA an能力 及 Vc 對羥自由基清除能力的結(jié)果見圖 2.2。在上升。AESAA 對 OH·清除能力高于 AEAA，在 OH·清除率分別為 64.69%、47.97%。IC50 分別圖 2.2 AESAA、AEAA 及 Vc 對羥自由基的清除能力re 2.2 the hydroxyl scavenging ability of AESAA, AEAA

17圖 2.2 AESAA、AEAA 及 Vc 對羥自由基的清除能力ure 2.2 the hydroxyl scavenging ability of AESAA, AEAA 除能力測定A 及 Vc 對超氧自由基清除能力的結(jié)果見圖 2.3。超氧自由基的清除率很低。當(dāng)濃度在 3.0 mg/m 48.3%，尚未達到理想水平。圖 2.3 AESAA、AEAA 及 Vc 對 DPPH 自由基的清除能力.3 the Superoxide Free radical scavenging ability of AESAA
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本文編號：2839827