背景與目的:人參是全球最受歡迎的中草藥藥物之一,人參主要包括三個(gè)關(guān)鍵成分,即皂苷、多糖和酚類化合物,其中,人參皂苷在腫瘤化學(xué)預(yù)防和治療中研究的最為廣泛,被認(rèn)為是人參中最有效的抗腫瘤成分之一。根據(jù)人參皂苷構(gòu)效關(guān)系分析和已有的研究結(jié)果,人參皂苷Rh2推測(cè)可能在人參皂苷中具有非常強(qiáng)的抗腫瘤活性。但人參皂苷Rh2口服制劑生物利用度低,存在首過效應(yīng)在開發(fā)過程中受到限制。因此,山東綠葉制藥有限公司開發(fā)人參次苷H乳注射液,其主成分為20(S)-人參皂苷Rh2。人參次苷H乳注射液通過制劑的改進(jìn)可增加藥物在體內(nèi)的暴露量,克服Rh2藥物生物利用度低的缺點(diǎn)。本研究對(duì)人參次苷H乳注射液的體內(nèi)外藥效學(xué)進(jìn)行了研究探索,并考察了其對(duì)免疫系統(tǒng)的影響,最后通過生物信息學(xué)的手段探討人參次苷H的作用機(jī)制。方法:1.采用MTT法檢測(cè)人參次苷H對(duì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株A549、Bel-7402、BGC-823、CaEs-17、HCT-8、HO8910、MCF-7、PC-3M、SMMC-7721和U251的增殖抑制作用。2.采用小鼠宮頸癌U14動(dòng)物模型對(duì)人參次苷H乳注射液?jiǎn)嗡庴w內(nèi)抗腫瘤活性和藥物起效劑量范圍進(jìn)行探索。人參次苷H乳注射液以40,20和10 mg/kg劑量靜脈給藥,每日給藥一次,連續(xù)10天。3.采用小鼠宮頸癌U14動(dòng)物模型探索人參次苷H乳注射液與化療藥物環(huán)磷酰胺聯(lián)用的協(xié)同抗腫瘤藥效作用以及聯(lián)合用藥降低白細(xì)胞減少的毒性作用。4.采用小鼠宮頸癌U14動(dòng)物模型探索人參次苷H乳注射液對(duì)免疫系統(tǒng)的影響。5.采用生物信息學(xué)手段探索人參次苷H乳注射液活性成分人參次苷Rh2的藥理學(xué)作用機(jī)制。結(jié)果:1.增殖抑制實(shí)驗(yàn)證明,人參次苷H對(duì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株A549、Bel-7402、BGC-823、CaEs-17、HCT-8、HO8910、MCF-7、PC-3M、SMMC-7721和U251均有明顯的抑制作用,半數(shù)抑制濃度分別為37.18 mg/mL、33.15 mg/mL、31.02 mg/mL、30.17 mg/mL、30.14 mg/mL、31.27 mg/mL、35.21 mg/mL、32.47 mg/mL、33.93 mg/mL和26.57 mg/mL。對(duì)肝癌、胃癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、食管癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種腫瘤細(xì)胞增殖的半抑制濃度均在同一數(shù)量級(jí),未表現(xiàn)出明顯差異。2.小鼠宮頸癌U14動(dòng)物模型結(jié)果表明,人參次苷H乳注射液在20 mg/kg及以上劑量組可顯著抑制小鼠宮頸癌生長(zhǎng)。3.在2.5~10 mg/kg雖表現(xiàn)出一定的抑瘤作用,但效果不明顯,但與40 mg/kg劑量環(huán)磷酰胺聯(lián)合應(yīng)用時(shí),抑瘤活性具有明顯協(xié)同作用。而且人參次苷H乳注射液還顯示出對(duì)環(huán)磷酰胺引起的白細(xì)胞降低的改善作用。4.在小鼠U14動(dòng)物模型中還發(fā)現(xiàn),人參次苷H乳注射液還可促進(jìn)機(jī)體分泌IL-2,從而激活NK細(xì)胞,促進(jìn)T細(xì)胞增殖等,提高免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的殺傷作用。與化療藥物聯(lián)用時(shí),還可糾正化療藥物引起的免疫抑制作用,達(dá)到協(xié)同增效的效果。5.結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道,人參皂苷Rh2的作用靶點(diǎn)為Annexin A2。Annexin A2與Fibronectin Type III Domain Containing 3B(FNDC3B)存在相互作用。我們通過生物信息學(xué)數(shù)據(jù)挖掘,發(fā)現(xiàn)FNDC3B與宮頸癌預(yù)后顯著負(fù)相關(guān)。再通過共表達(dá)基因分析FNDC3B可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)。結(jié)論:結(jié)合開展的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,生物信息學(xué)數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果和已有的文獻(xiàn)資料,我們證實(shí)了人參次苷H乳注射液的藥效學(xué)作用,提出了人參次苷H可能發(fā)揮的新的作用機(jī)制,我們分析認(rèn)為人參皂苷Rh2可與Annexin A2直接結(jié)合,然后影響了Annexin A2與FNDC3B的相關(guān)作用,進(jìn)而破壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài),引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,從而影響腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲以及免疫系統(tǒng)而發(fā)揮抗腫瘤作用。創(chuàng)新點(diǎn):1.通過本實(shí)驗(yàn)研究,我們首次證實(shí)了20(S)-人參皂苷Rh2新制劑人參次苷H乳注射液的體內(nèi)外藥效。2.我們還通過生物信息學(xué)對(duì)人參皂苷Rh2的作用機(jī)制進(jìn)行了分析探討,我們首次提出了人參皂苷Rh2的新機(jī)制可能是與Annexin A2直接結(jié)合后,影響了Annexin A2與FNDC3B的相關(guān)作用,進(jìn)而破壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài),引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,提出了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在人參皂苷Rh2抗腫瘤中的作用。
【學(xué)位單位】：煙臺(tái)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說明
1 前言
    1.1 人參成分組成
    1.2 人參皂苷構(gòu)效關(guān)系
    1.3 人參皂苷Rh2 研究進(jìn)展
    1.4 生物信息學(xué)在腫瘤研究中的作用
2 人參次苷H對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器和耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 藥物配制
        2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代與凍存
        2.2.3 細(xì)胞給藥處理
        2.2.4 MTT法測(cè)定藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3 人參次苷H乳注射液?jiǎn)斡玫捏w內(nèi)抑瘤藥效研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株、動(dòng)物與試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 藥物配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 建立U14 宮頸癌荷瘤小鼠動(dòng)物模型
        3.2.2 動(dòng)物分組給藥
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)
    3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4 人參次苷H乳注射液與環(huán)磷酰胺聯(lián)用協(xié)同作用研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株、動(dòng)物與試劑
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 藥物配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 建立U14 宮頸癌荷瘤小鼠動(dòng)物模型
        4.2.2 動(dòng)物分組給藥
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)
    4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
5 人參次苷H乳注射液與環(huán)磷酰胺聯(lián)用減毒作用研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株、動(dòng)物與試劑
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.3 藥物配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 建立U14 宮頸癌荷瘤小鼠動(dòng)物模型
        5.2.2 動(dòng)物分組給藥
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)
    5.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
6 人參次苷H乳注射液對(duì)荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)的影響
    6.1 人參次苷H乳注射液對(duì)荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        6.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.2 人參次苷H乳注射液對(duì)荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性的影響
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        6.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.3 人參次苷H乳注射液對(duì)荷瘤小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響
        6.3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        6.3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.4 人參次苷H乳注射液對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2 的影響
        6.4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        6.4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.5 人參次苷H乳注射液對(duì)環(huán)磷酰胺所致荷瘤小鼠免疫功能降低的影響
        6.5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.5.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        6.5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
7 生物信息學(xué)探討人參皂苷Rh2 在宮頸癌中的作用機(jī)制
    7.1 FNDC3B在宮頸癌中的表達(dá)分析
        7.1.1 材料和方法
        7.1.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        7.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    7.2 生存分析
        7.2.1 材料和方法
        7.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        7.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    7.3 FNDC3B共表達(dá)基因網(wǎng)絡(luò)分析
        7.3.1 材料和方法
        7.3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        7.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
8 討論
9 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
致謝

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本文編號(hào)：2839617