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酶輔助鹽析萃取萬(wàn)壽菊花中的葉黃素和酚類物質(zhì)

發(fā)布時(shí)間：2020-10-12 05:50

　　萬(wàn)壽菊(Tagetes erecta L.),又叫臭芙蓉,金菊花等,屬于菊科萬(wàn)壽菊屬。萬(wàn)壽菊花具有抗氧化,抗菌,抗糖尿病,抗肥胖,抗炎,以及降低患心臟病,癌癥和與年齡有關(guān)的眼病等慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn),已被廣泛應(yīng)用于食品、化妝品和制藥行業(yè)等領(lǐng)域。目前,文獻(xiàn)對(duì)萬(wàn)壽菊花中葉黃素的報(bào)道比較多,但對(duì)于其他活性成分如酚類物質(zhì)、多糖及果膠等的報(bào)道較少。本研究采用酶輔助鹽析萃取技術(shù)從萬(wàn)壽菊花中提取葉黃素和酚類物質(zhì),并對(duì)酶輔助鹽析萃取萬(wàn)壽菊花粗提物進(jìn)行初步純化,實(shí)現(xiàn)了多種有效成份的一步提取與粗分離。首先,研究了酶輔助兩相鹽析萃取萬(wàn)壽菊花中的葉黃素和多酚。考察了兩相鹽析體系中乙醇、硫酸銨用量以及酶解因素等對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物得率的影響;在此基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)化酶輔助兩相鹽析萃取萬(wàn)壽菊花中葉黃素、多酚的提取工藝。結(jié)果顯示,當(dāng)雙水相體系組成為30%(w/w)乙醇/19%(w/w)硫酸銨,粉碎目數(shù)為120目,料液比為1:45 g/mL,果膠酶量為4.2 U/g,在pH 4.00,37~oC條件下酶解117 min時(shí),葉黃素和多酚得率達(dá)到最大,分別為5.59±0.13 mg/g和83.56±0.69mg/g,回收率分別為99.81%和95.45%。此外,DPPH和ABTS法測(cè)得酶輔助雙水相提取物IC_(50)分別為49.16μg/mL和45.97μg/mL,抗氧化活性優(yōu)于雙水相萃取和索氏萃取法。其次,研究了微波-酶輔助兩相鹽析萃取萬(wàn)壽菊花中葉黃素和多酚�？疾炝宋⒉ㄗ饔孟聝上帑}析萃取的影響因素以及酶解條件的影響因素。結(jié)果表明,微波-酶輔助雙水相萃取萬(wàn)壽菊花中葉黃素與多酚的最佳工藝為:28%(w/w)乙醇/20%(w/w)硫酸銨,粉碎目數(shù)160目,料液比1:45 g/mL,果膠酶用量為4.5 U/g,pH 5.00,45 ~oC時(shí)酶解150 min,微波功率270 w,微波時(shí)間120 s;該方法得到葉黃素和多酚得率均高于微波輔助雙水相、酶輔助雙水相和索氏提取法。此外,采用掃描電鏡法觀察了不同提取方法提取前后萬(wàn)壽菊花粉末的表面形態(tài)。再次,研究了酶輔助三液相萃取萬(wàn)壽菊花中葉黃素和多酚�？疾炝巳合噍腿∮绊懸蛩匾约懊附鈼l件對(duì)提取的影響。結(jié)果表明,當(dāng)體系組成為12%(w/w)正己烷/26%(w/w)乙醇/14%(w/w)硫酸銨,粉碎目數(shù)160目,料液比1:45 g/mL,7.5 U/g的果膠酶,pH 4.50,35 ~oC下酶解150 min時(shí),葉黃素和多酚的最大得率為16.67±0.09 mg/g和87.71±0.37 mg/g;DPPH測(cè)試表明,富集于中相的多酚類物質(zhì)(IC_(50)為45.36μg/mL)比富集于上相的葉黃素(IC_(50)為54.28μg/mL)具有更高的抗氧化活性;中相萃取物經(jīng)HLB固相萃取小柱純化后分析表明,其主要成份為沒(méi)食子酸、丁香酸、蘆丁和槲皮素。最后,采用大孔樹脂對(duì)酶輔助三液相的中相粗提物進(jìn)行純化。通過(guò)靜態(tài)吸附與解析附實(shí)驗(yàn)探究了AB-8、D101、NKA-9、X-5四種大孔吸附樹脂對(duì)酚類物質(zhì)粗提液的吸附與解析附能力,并考察了提取樣液濃度、洗脫流速以及洗脫劑濃度對(duì)吸附與解析附效果的影響。結(jié)果表明,D101型大孔樹脂對(duì)酚類物質(zhì)的吸附與解析附性能最好,乙醇被選為多酚的吸附溶劑。用于分離和純化酚類物質(zhì)的最佳工藝參數(shù)是:6 mg/mL的多酚上樣濃度,1.3 mL/min的洗脫流速以及80%的甲醇為洗脫溶劑,該純化條件下得到萬(wàn)壽菊花中多酚類物質(zhì)主要為沒(méi)食子酸、丁香酸以及槲皮素。
【學(xué)位單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284.2
【部分圖文】：