研究背景枇杷提取物作為傳統(tǒng)中藥已被廣泛用于中國和其他東亞國家的各種慢性病治療。枇杷提取物中當前已有酚類、三萜類等多種具有生物活性的化合物的發(fā)現(xiàn),具有抗炎、降血糖、抗癌和抗氧化等藥效。腸道菌群參與一系列對宿主健康至關(guān)重要的生理過程,反過來,宿主也會影響腸道菌群的分布。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腸道菌群的構(gòu)成和分布可由飲食調(diào)控,尤其是包含益生菌、益生元和合生元的食物。植物提取物經(jīng)益生菌發(fā)酵后常表現(xiàn)出該植物的相關(guān)活性,甚至產(chǎn)生比未發(fā)酵前更優(yōu)越的生物活性。同時草本植物提取物可能含益生元,而幫助益生菌定植。利用益生菌發(fā)酵枇杷提取物能否產(chǎn)生更好的傳統(tǒng)功效,是否具有潤腸通便及優(yōu)化腸道菌群的功效,這在以往的研究中并未涉及。研究目的1.探討益生菌發(fā)酵枇杷提取物的抗炎、止咳和祛痰三種枇杷傳統(tǒng)功效。2.探討益生菌發(fā)酵枇杷提取物是否具有潤腸通便的功效。3.探討益生菌發(fā)酵枇杷提取物對小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響。研究方法和結(jié)果1.益生菌發(fā)酵枇杷提取物的抗炎功效通過構(gòu)建小鼠耳腫脹炎癥模型,檢測不同類型枇杷提取物對小鼠耳腫脹程度的影響。與陰性對照組相比,益生菌發(fā)酵枇杷飲組和益生菌發(fā)酵枇杷膏組的小鼠耳腫脹有明顯的抑制,抑制率分別為23.33%和21.93%。未發(fā)酵枇杷飲組和未發(fā)酵枇杷膏組小鼠耳腫脹沒有得到抑制。2.益生菌發(fā)酵枇杷提取物的止咳功效利用濃氨水構(gòu)建小鼠咳嗽模型,檢測不同類型枇杷提取物對小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)的影響。益生菌發(fā)酵枇杷飲組的咳嗽潛伏期為57.40±5.18s,與陰性對照組相比明顯延長,并存在統(tǒng)計學差異(P=0.046)。益生菌發(fā)酵枇杷飲組和益生菌發(fā)酵枇杷膏組的咳嗽次數(shù)分別為42.80±2.85和49.10±1.58次,與陰性對照組對比明顯減少,且具有統(tǒng)計學差異(P=0.001、0.013)。未發(fā)酵枇杷飲組和未發(fā)酵枇杷膏組則未發(fā)現(xiàn)明顯抑制咳嗽的情況。3.益生菌發(fā)酵枇杷提取物的祛痰功效與陰性對照組相比,其余各實驗組的呼吸道酚紅分泌量也有不同程度的提高,其中益生菌發(fā)酵枇杷飲組、未發(fā)酵枇杷飲組及益生菌發(fā)酵枇杷膏組的呼吸道酚紅分泌量提高較明顯,分別為3.42±0.41、2.79±0.10和3.30±0.33μ g/ml,并存在顯著的統(tǒng)計學差異(P=0.003、0.001、0.001)。未發(fā)酵枇杷膏組沒有發(fā)現(xiàn)明顯變化。4.益生菌發(fā)酵枇杷提取物的潤腸通便功效利用鹽酸洛哌丁胺構(gòu)建小鼠便秘模型,檢測益生菌發(fā)酵枇杷提取物對小鼠的腸道推進率和排便情況的影響。與模型對照組相比,益生菌發(fā)酵枇杷飲高劑量組和益生菌發(fā)酵枇杷膏高劑量組的腸道推進率明顯提高,分別為87.70±5.01%和88.25±4.07%,并存在統(tǒng)計學差異(P=0.042、0.02)。益生菌發(fā)酵枇杷飲高劑量組與益生菌發(fā)酵枇杷飲低劑量組的排首粒黑便時間均顯著縮短,分別為185.60±29.08和262.80±29.52min,并具有統(tǒng)計學差異(P=0.000、0.006)。益生菌發(fā)酵枇杷飲高劑量組和益生菌發(fā)酵枇杷膏高劑量組的8h排黑便數(shù)量明顯增多,分別達到6.60±1.08個和7.50±0.69個,且存在統(tǒng)計學差異(P=0.003、0.000)。5.益生菌發(fā)酵枇杷提取物的腸道菌群調(diào)節(jié)功效分別對不同給藥組小鼠給藥前后的腸道微生物群進行16SrDNA測序,分析菌群多樣性和差異性,找到差異性菌群。研究發(fā)現(xiàn),各組樣品中占比最高的兩種菌是厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)。從Alpha多樣性指數(shù)結(jié)果來看,各組樣品差異不大。其中益生菌發(fā)酵枇杷飲組的物種豐度略高于其余組,未發(fā)酵枇杷飲組的物種多樣性略高于其余組。Beta多樣性分析顯示,各組小鼠給藥前腸道菌群結(jié)構(gòu)相似。給藥后各實驗組與陰性對照組相比出現(xiàn)不同程度差異,其中益生菌發(fā)酵枇杷膏組的差異性最明顯。給藥后各組小鼠腸道菌群LEfSe分析結(jié)果顯示,與陰性對照組相比,益生菌發(fā)酵枇杷飲組小鼠腸道的特異性菌群有:Muribaculaceae、厭氧原體屬(Anaero-plasma)、Lactobacillus gallinarum、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)等。未發(fā)酵枇杷飲組小鼠腸道中的特異性菌群最多,包括:Muribaculaceae、阿克曼菌屬(Akkermansia)、Lactobacillus gallinarum、雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、梭桿菌屬(Fusobac terium)等。益生菌發(fā)酵枇杷膏組小鼠腸道的特異性菌群包括:Muribaculaceae、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、紅蝽菌科((Coriobacteriaceae)、Helicobacter trogontum等。研究結(jié)論1.益生菌發(fā)酵枇杷飲和益生菌發(fā)酵枇杷膏具有較好的抗炎、止咳功效,益生菌發(fā)酵枇杷提取物的抗炎、止咳功效優(yōu)于未發(fā)酵枇杷提取物。2.益生菌發(fā)酵枇杷飲、未發(fā)酵枇杷飲和益生菌發(fā)酵枇杷膏具有良好的祛痰功效。3.益生菌發(fā)酵枇杷飲和益生菌發(fā)酵枇杷膏有潤腸通便的功效。4.不同枇杷提取物對小鼠腸道菌群數(shù)量影響不大,但使其結(jié)構(gòu)產(chǎn)生較大變化。益生菌發(fā)酵枇杷飲優(yōu)化腸道菌群結(jié)構(gòu)方面功效最佳。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

＊和＊＊表示。記錄數(shù)據(jù)用ＳＰＳＳ２５．?０進行處理。??３．實驗結(jié)果??從圖１與表３的咳嗽潛伏期數(shù)據(jù)來看，與陰性對照組相比，陽性對照組的咳??嗽潛伏期明顯延長，達到６６．?００±６．?６２ｓ，并存在顯著的統(tǒng)計學差異，Ｐ＝０．?００６。??其余各實驗組與陰性對照組相比，咳嗽潛伏期也存在不同程度的延長情況，其中??益生菌發(fā)酵枇杷飲組與陰性對照組間存在統(tǒng)計學差異，咳嗽潛伏期為??５７．?４０±５．１８ｓ，Ｐ＝０．?０４６。??從圖２與表３的咳嗽次數(shù)來看，陽性對照組與陰性對照組相比較，咳嗽次數(shù)??明顯減少，咳嗽次數(shù)為４１．?７３±２．?８１次，并且有顯著的統(tǒng)計學差異，Ｐ＝０．?００１。??與陰性對照組相比，其余各組咳嗽次數(shù)也有不同程度的減少，其中益生菌發(fā)酵枇??杷飲組與益生菌發(fā)酵枇杷膏組均具有統(tǒng)計學差異

益生菌發(fā)酵枇杷飲組與陰性對照組間存在統(tǒng)計學差異，咳嗽潛伏期為??５７．?４０±５．１８ｓ，Ｐ＝０．?０４６。??從圖２與表３的咳嗽次數(shù)來看，陽性對照組與陰性對照組相比較，咳嗽次數(shù)??明顯減少，咳嗽次數(shù)為４１．?７３±２．?８１次，并且有顯著的統(tǒng)計學差異，Ｐ＝０．?００１。??與陰性對照組相比，其余各組咳嗽次數(shù)也有不同程度的減少，其中益生菌發(fā)酵枇??杷飲組與益生菌發(fā)酵枇杷膏組均具有統(tǒng)計學差異，咳嗽次數(shù)分別為４２．?８０±２．?８５??次和４９．?１０±１．?５８次，Ｐ值分別為０．?００１和０．?０１３。??表３不同枇杷提取物對小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)的影響??組別?動物數(shù)（只）咳嗽潛伏期（ｓ）?咳嗽次數(shù)（次）??陰性對照?１０?４０．２０±６．?１５?５８．２０±２．?７９??陽性對照?１０?６６．００±６．６２＊＊?４１．７３±２．８廣??益生菌發(fā)酵枇杷飲?１０?５７．４０±５．?１８＊?４２．８０±２．８５＂??未發(fā)酵枇杷飲?１０?４７．?１８土５．?９７?５０．?３６±４．?１６??益生菌發(fā)酵枇杷膏?１０?４７．?００±９．?３６?４９．?１０土?１．５８＊??未發(fā)酵枇杷膏?１０

視為有統(tǒng)計學意義，分別以＊和＊＊表示。記錄數(shù)據(jù)用ＳＰＳＳ２５．０進行處理。??３？實驗結(jié)果??圖３以吸光度０Ｄ值為橫坐標，酚紅濃度為縱坐標，制作標準曲線。根據(jù)酚??紅標準曲線，得出線性回歸方程為Ｙ＝２８．２０３Ｘ＿１．２９０１，相關(guān)系數(shù)Ｒ２＝０．９９９８。由??此可知測定樣品含量在０．?２５？８?Ｐ?ｇ／ｍｌ范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。??表４與圖４可以看出，與陰性對照組相比，陽性對照組的呼吸道酚紅分泌量??明顯升高，達到３．?５７±０．?３１ｙｇ／ｍｌ，且具有顯著的統(tǒng)計學差異，Ｐ＝０．０００。與陰??性對照組相比，其余各實驗組的呼吸道酚紅分泌量也有不同程度的提高，其中益??生菌發(fā)酵枇杷飲組、未發(fā)酵枇杷飲組及益生菌發(fā)酵枇杷膏組的呼吸道酚紅分泌量??提高較明顯，呼吸道酚紅分泌量分別為３．?４２±０．?４１?ｕ?ｇ／ｍｌ、２．?７９±０．?１０?ｕ?ｇ／ｍｌ、??３．?３０±０．?３３?ｙ?ｇ／ｍｌ，并存在顯著的統(tǒng)計學差異，Ｐ值分別為０．?００３、０．?００１和０．?００１。??２２??
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本文編號：2835141