目的:觀察大黃素衍生物HXX-37對腫瘤細胞的體外增殖、凋亡相關(guān)蛋白和細胞ROS含量及相關(guān)蛋白水平的影響。探討活性氧(ROS)是否參與HXX-37誘導(dǎo)細胞凋亡的過程。方法:1采用磺酰羅丹明B(Sμlforhodamine B,SRB)比色法,檢測大黃素原藥和大黃素衍生物(HXX-37)對不同貼壁腫瘤細胞的抗腫瘤活性以及對正常細胞的抑制作用。2采用流式細胞術(shù)檢測不同濃度的大黃素衍生物HXX-37誘導(dǎo)肝癌細胞(Hep G2)、急性T細胞白血病細胞株(jurkat)的凋亡情況。3用ROS試劑盒檢測不同濃度的大黃素衍生物HXX-37及同一濃度不同時間作用后的腫瘤細胞內(nèi)ROS水平。4提取Hep G2細胞的蛋白質(zhì),用Western blot印跡法檢測大黃素衍生物HXX-37對凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、PI3K、Akt、m TOR、P70S6K、Caspase3、Caspase 9蛋白表達水平的影響。結(jié)果:1體外增殖抑制實驗結(jié)果表明,大黃素衍生物HXX-37對腫瘤細胞系(Hep G2、A549)增殖抑制作用最顯著,大黃素對上述細胞也有一定的增殖抑制作用,作用于Hep G2細胞72h后的IC50為26.38±1.1921μmol/L;大黃素衍生物HXX-37對Hep G2和A549的增殖抑制作用明顯,且呈濃度依賴性和時間依賴性,作用72h的IC50分別為0.2864±0.0004μmol/L、0.2335±0.001μmol/L。2與作用于Hep G2的IC50相比,大黃素作用于293細胞比作用于Hep G2細胞的IC50小,而HXX-37作用于293細胞的IC50為作用于Hep G2細胞IC50的兩倍。3 ROS檢測實驗顯示大黃素衍生物HXX-37作用后Hep G2細胞和jurkat細胞內(nèi)ROS含量顯著增多,HXX-37終濃度為0.2μmol/L作用于上述細胞1h、3h、6h、12h后,ROS的含量隨著作用時間的延長而增加;HXX-37終濃度分別為0.8、0.4、0.2、0.1μmol/L,作用于上述腫瘤細胞3小時后,隨著濃度的增加,活性氧濃度顯著增加,在一定的濃度范圍內(nèi)呈濃度和時間依賴性。4流式細胞術(shù)顯示,大黃素衍生物HXX-37可誘導(dǎo)Hep G2和jurkat凋亡,0.4μmol/L HXX-37誘導(dǎo)Hep G2的凋亡率為28.61%,0.4μmol/LHXX-37誘導(dǎo)jurkat細胞的凋亡率為50.5%。呈現(xiàn)出濃度依賴性。5 Western blot法檢測結(jié)果顯示,不同濃度的大黃素衍生物HXX-37作用于Hep G2細胞,細胞PI3K、Akt、m TOR、P70S6K、Bcl-2蛋白表達逐漸減弱,Bax、Caspase 3、Caspase 9蛋白表達逐漸增強,呈明顯的濃度依賴性。結(jié)論:1大黃素季擕鹽衍生物HXX-37抑制腫瘤增殖作用比大黃素更顯著。2 HXX-37誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡呈現(xiàn)時間依賴性和濃度依賴性。3大黃素季擕鹽衍生物HXX-37可明顯增加細胞內(nèi)ROS水平,呈時間依賴性和濃度依賴性,ROS在大黃素衍生物誘導(dǎo)的細胞凋亡中起到重要作用。4大黃素衍生物HXX-37誘導(dǎo)Hep G2細胞凋亡的機制可能與下調(diào)PI3K、Akt、m TOR、P70S6K、Bcl-2蛋白水平的表達,進而激活caspase9,并最終激活下游的caspase3有關(guān)。
【學位單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

pase -3 的活化也代表細胞凋亡是不可逆轉(zhuǎn)的[黃素治療結(jié)腸癌，會導(dǎo)致細胞的線粒體功能 增 加[8]，表明了 ROS的積累對于大黃素誘導(dǎo)瘤細胞凋亡，主要通過死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑的多藥耐藥，抑制腫瘤血管生成及腫瘤的侵襲，抑菌、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，對肝細胞的用[11]，對心腦血管病的作用，抑制腫瘤生長, 改療作用[12]。改造勢在必行

素誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，主要通過死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑和 線粒體凋亡制腫瘤細胞的多藥耐藥，抑制腫瘤血管生成及腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移[10]，增加療的敏感度，抑菌、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，對肝細胞的保護及抗纖維化腸道的作用[11]，對心腦血管病的作用，抑制腫瘤生長, 改善腫瘤的耐藥性胰腺炎的治療作用[12]。大黃素的改造勢在必行圖 1 大黃素結(jié)構(gòu)式

圖 3 大黃素作用于 HepG2 細胞 72 h 的量效曲線圖 HepG2 癌細胞 48 h、72 h、96 h 的 IC50分別為0.30.24±0.09 μmol/L。差異無統(tǒng)計學差異（P＞0.0作用時間延長，IC50減小，抑制作用增強。XX-37 對 HepG2 細胞的增殖抑制作用（46h、72h、96onInhibitory rate (%）HXX-37(48h） HXX-37(72h） HXX-3779.23±0.61 89.12±0.36 98.28± 70.72±0.79 79.59±0.61 90.60± 33.44±1.03 38.00±0.55 42.75±5 9.04±0.25 12.75±0.61 13.75±5 4.07±0.37 6.16±0.12 7.8±25 2.12±0.28 3.47±0.49 7.2±25 1.03±0.67 1.14±0.36 3.7±

【參考文獻】

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本文編號：2833620