發(fā)布時(shí)間：2020-10-09 06:37

　　 背景:宮頸癌在全世界女性癌癥相關(guān)死亡的疾病中排第四位。目前,化療仍是晚期及復(fù)發(fā)性宮頸癌患者的主要治療手段,但大劑量化療藥物引起的毒副反應(yīng)以及長(zhǎng)期使用化療藥物引起的耐藥現(xiàn)象,使其在臨床應(yīng)用中受到一定的限制,因此尋找新的、低毒高效的治療藥物是當(dāng)前亟待解決的問(wèn)題。JNK和p38 MAPK信號(hào)通路參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和細(xì)胞周期阻滯等生理過(guò)程。藍(lán)萼乙素的抗腫瘤作用與JNK和p38 MAPK信號(hào)通路的關(guān)系及其具體的分子作用機(jī)制目前尚不清楚。目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究藍(lán)萼乙素對(duì)宮頸癌HeLa、SiHa細(xì)胞毒性作用與JNK和p38MAPK信號(hào)通路的關(guān)系,進(jìn)一步闡明藍(lán)萼乙素抗宮頸癌作用的相關(guān)分子機(jī)制,為藍(lán)萼乙素治療宮頸癌奠定理論基礎(chǔ)。方法:1.MTT法測(cè)定不同處理組HeLa、SiHa細(xì)胞增殖活性的變化。2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同處理組HeLa、SiHa細(xì)胞凋亡的改變和細(xì)胞周期分布的變化。3.Western blot法檢測(cè)相關(guān)分子蛋白表達(dá)水平的變化。4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測(cè)相關(guān)分子mRNA表達(dá)水平的變化。結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示:藍(lán)萼乙素以劑量依賴的方式抑制HeLa、SiHa細(xì)胞增殖,而用SB203580(p38 MAPK通路特異性抑制劑)或SP600125(JNK通路特異性抑制劑)預(yù)處理1 h后,再用相同濃度的藍(lán)萼乙素處理相同時(shí)間,細(xì)胞活性顯著增加,與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:8μM藍(lán)萼乙素可明顯誘導(dǎo)HeLa、SiHa細(xì)胞凋亡,而用SB203580或SP600125預(yù)處理1 h后,再用8μM藍(lán)萼乙素處理相同時(shí)間,HeLa、SiHa細(xì)胞凋亡率明顯下降,與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。藍(lán)萼乙素以劑量依賴的方式誘導(dǎo)HeLa、SiHa細(xì)胞周期阻滯在G2/M期,而用SB203580或SP600125預(yù)處理1 h后,再用相同濃度的藍(lán)萼乙素處理相同時(shí)間,阻滯在G2/M期的HeLa、SiHa細(xì)胞明顯減少。與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.Western-blot結(jié)果顯示:藍(lán)萼乙素處理宮頸癌HeLa、SiHa細(xì)胞24 h后,與對(duì)照組相比,P-JNK,P-p38,Bax,p21蛋白的表達(dá)增高,Bcl-2,cyclin D1蛋白表達(dá)降低,T-JNK,T-p38蛋白表達(dá)沒(méi)有變化,而用SB203580或SP600125預(yù)處理1 h后,再用相同濃度的藍(lán)萼乙素處理相同時(shí)間,P-JNK,P-p38,Bax,p21蛋白的表達(dá)降低,Bcl-2,cyclin D1蛋白表達(dá)升高。與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.qRT-PCR結(jié)果顯示:藍(lán)萼乙素處理宮頸癌HeLa、SiHa細(xì)胞24 h后,與對(duì)照組相比,Fas,FasL,Bax,p21 mRNA的表達(dá)增高,Bcl-2,cyclinD1 mRNA表達(dá)降低,而用SB203580或SP600125預(yù)處理1 h后,再用相同濃度的藍(lán)萼乙素處理相同時(shí)間,Fas,FasL,Bax,p21 mRNA的表達(dá)降低,Bcl-2,cyclinD1 mRNA的表達(dá)升高。與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.藍(lán)萼乙素通過(guò)活化JNK和p38 MAPK信號(hào)通路抑制宮頸癌HeLa、SiHa細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡。2.藍(lán)萼乙素可能通過(guò)JNK和p38 MAPK信號(hào)通路上調(diào)p21、下調(diào)cyclinD1的表達(dá),進(jìn)而誘導(dǎo)宮頸癌HeLa、SiHa細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。
【學(xué)位單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

分組 n 抑制率（%）對(duì)照組 3 04 μM GLB 組 3 26.09±4.32**8 μM GLB 組 3 39.80±5.59**16 μM GLB 組 3 50.73±5.34**4 μM GLB+10 μM SB 組 3 15.74±5.72#4 μM GLB+10μM SP 組 3 16.17±4.63#8 μM GLB+10 μM SB 組 3 24.08±3.58##8 μM GLB+10 μM SP 組 3 29.60±5.09#16 μM GLB+10 μM SB組 3 39.12±5.79##16 μM GLB+10 μM SP 組 3 40.76±4.19#10 μM SB 組 3 5.29±4.03**10 μM SP 組 3 4.62±3.39**P 值 0.000F 30.248注：*P<0.05,**P<0.01，與對(duì)照組相比，#P<0.05,##P<0.01，與不同濃度藍(lán)萼乙素單用組比較

注：*P<0.05,**P<0.01，與對(duì)照組相比；#P<0.05,##P<0.01，與單用藍(lán)萼乙素組比較圖 4A、B 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)藍(lán)萼乙素及相關(guān)抑制劑對(duì)宮頸癌 HeLa、SiHa 細(xì)胞周期的影響；C、D HeLa、SiHa 細(xì)胞周期分布的統(tǒng)計(jì)圖表；E、F Western blot 法檢測(cè)不同處理組 p21 和 cyclinD1蛋白水平表達(dá)的變化；G、H qRT-PCR 法檢測(cè)不同處理組 p21 和 cyclinD1 mRNA 水平表達(dá)的變化表 12 流式細(xì)胞術(shù)分析不同處理組對(duì) SiHa 細(xì)胞周期分布的影響分組 n G0/G1 S G2/M空白對(duì)照組 3 62.94±1.14 23.19±0.92 13.87±1.964 μM GLB 組 3 67.35±0.78 15.27±0.47 17.38±1.07**8 μM GLB 組 3 66.79±1.14 7.85±0.23 25.36±1.31**16 μM GLB 組 3 51.98±1.64 16.22±0.44 31.98±1.63**8 μM GLB+10 μM SB組 3 64.59±2.26 21.38±0.91 14.03±1.36##8 μM GLB+10 μM SP 組 3 53.93±1.73 23.82±0.46 22.25±1.42

【參考文獻(xiàn)】

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