目的本研究的主要目的是探討枸杞多糖(LBP)對氧化應激致大鼠主動脈血管內皮細胞(RAEC)損傷的抗凋亡及抗氧化的保護作用,為進一步開發(fā)LBP的藥用價值提供實驗及理論依據。方法培養(yǎng)RAEC,采用CCK-8法篩選建立H2O2缺氧模型和給藥LBP濃度。然后將RAEC隨機分為5組:正常對照組、H2O2組、H2O2+LBP110μg/ml(low-LBPs treated,LT)組、H2O2+LBP220μg/ml(medium-LBPs treated,MT)組、H2O2+LBP440μg/ml(high-LBPs treated,HT)組;采用比色法檢測培養(yǎng)細胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)水平,一氧化氮(NO)水平;Western-blot法檢測細胞Bcl-2及Bax的表達及其兩者的比值;倒置顯微鏡觀察各組細胞的形態(tài)學變化。使用PI3K/Akt通路的特異性抑制劑渥曼青霉素(Wortmannin,W)對培養(yǎng)細胞進行干預,將細胞分為7組:正常對照組、H2O2組、H2O2+LBP440μg/ml組、H2O2+LBP440μg/ml+W組、W組、H2O2+W組、LBP440μg/ml組,采用Western-blot法檢測各組細胞Bcl-2及Bax的表達及其兩者的比值。結果1、LBP可以增加SOD活力與NO生成,同時降低MDA含量:與正常對照組比較,H2O2、LT、MT、HT組SOD活力及NO含量明顯降低,MDA含量升高(P0.05);與H2O2組比較,LT、MT、HT組SOD活力及NO含量均升高(P0.05),MDA含量均降低(P0.05)。2、LBP可以上調Bcl-2表達并下調Bax表達:與正常對照組比較,H2O2、LT、MT、HT組Bcl-2表達量降低(P0.05),Bax表達量升高(P0.05);與H2O2組比較,LT、MT、HT組的Bcl-2表達量升高(P0.05),MT、HT組Bax的表達量下降(P0.05)。3、形態(tài)學表達:倒置顯微鏡觀察,正常對照組細胞呈梭形,大小一致,邊緣光滑清楚,核清晰,細胞核大小一致,呈圓形或橢圓形,核染色質均勻,細胞相互嵌合,呈鋪路石狀排列,僅見個別死細胞;H2O2組細胞皺縮,間隙變大,出現灶性細胞死亡;HT組細胞可逐漸重新貼壁,與正常細胞狀態(tài)基本一致。4、渥曼青霉素可逆轉Bcl-2及Bax的表達:給予渥曼青霉素干預后,與正常對照組比較,H2O2、H2O2+W組Bcl-2表達量下降,Bax表達量升高(P0.05);與H2O2組比較,H2O2+LBP、H2O2+LBP+W、W、LBP組Bcl-2表達量上升,H2O2+LBP、W、LBP組Bax表達下降,而H2O2+W組Bax表達量升高(P0.05);與H2O2+LBP組比較,H2O2+W組Bcl-2表達量下降,H2O2+W、LBP組Bax表達量上升(P0.05);與H2O2+LBP+W組相比,H2O2+W組Bcl-2表達量下降,LBP組Bcl-2升高,H2O2+W組Bax表達量升高(P0.05);與W組比較,H2O2+W組Bcl-2表達量下降,LBP組Bcl-2表達量上升,H2O2+W組Bax的表達量上升(P0.05);與H2O2+W組比較,LBP組Bcl-2表達量上升,Bax表達量下降(P0.05)。與正常對照組比較,H2O2、W、H2O2+W和LBP組Bcl-2/Bax比值下降(P0.05);與H2O2組比較,H2O2+LBP、H2O2+LBP+W、W和LBP組Bcl-2/Bax比值上升(P0.05);與H2O2+LBP組比較,H2O2+LBP+W、W和H2O2+W組Bcl-2/Bax比值下降(P0.05);與H2O2+LBP+W組相比,H2O2+W組Bcl-2/Bax比值下降,而LBP組Bcl-2/Bax比值上升(P0.05);與W組比較,H2O2+W組Bcl-2/Bax比值下降(P0.05);與H2O2+W組比較,LBP組Bcl-2/Bax比值上升(P0.05)。結論枸杞多糖可能通過抗氧化和抗凋亡作用發(fā)揮對過氧化氫致主動脈血管內皮細胞損傷的保護作用,且枸杞多糖可能通過PI3K/AKT通路發(fā)揮其抗凋亡的保護作用。
【學位單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

注：A：正常對照組，B：H2O2組，C：LBP 干預組圖 1 大鼠主動脈內皮細胞形態(tài)學改變（200×）5.各組細胞培養(yǎng)液中 SOD 的活力及 MDA、NO 的含量與正常對照組比較，H2O2組 SOD 活力與 NO 含量明顯下降，MDA 明顯上升（P＜0.05）；與 H2O2組比較，MT、HT 組 SOD 活力升高，LT、MT、HT 組 NO 含量上升，LT、MT、HT 組 MDA 含量下降（P＜0.05），結果見表 4。表 4 不同劑量 LPB 對 H2O2誘導細胞的 SOD 活力、NO 及 MDA 的含量（x s）組別 重復次數 SOD 活力 MDA 含量 NO 含量正常對照組 3 15.891±2.320 3.664±0.264 4.876±0.171H2O2311.260±0.928*8.796±0.493*2.534±0.167*LT 312.403±1.194*7.090±0.394*#3.114±0.169*#MT 313.18±1.414*#5.266±0.284*#3.850±0.309*#HT 3 13.96±1.476#4.338±0.202*#4.272±0.370*#

大學碩士學位論文 5 不同劑量 LPB 對 H2O2誘導細胞的 Bcl-2、Bax 及 Bcl-2/Bax 表達（別 重復次數 Bcl-2 Bax trol 5 1.552±0.076 0.601±0.260 2O25 0.952±0.071*1.748±0.689*0T 5 1.155±0.034*#1.628±0.431*0T 5 1.200±0.050*#0.817±0.161#1.T 5 1.284±0.037*#0.700±0.287#2ol 組相比，*P<0.05；與 H2O2組相比，#P<0.05。

Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax表達

【參考文獻】

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本文編號：2828709