目的:以大鼠心肌細胞H9C2細胞為研究對象,從細胞水平構建缺氧復氧損傷模型,模擬心臟MIRI。通過蔥白提取物單體硫化物二丙基二硫(S1),對缺氧復氧模型細胞進行預處理,觀察檢測內質網應激及細胞凋亡相關指標的變化,探討蔥白提取物單體硫化物S1在內質網應激誘導的H9C2細胞凋亡途徑中的作用機制。方法:培養(yǎng)大鼠H9C2心肌細胞,隨機分組為7組,采用MTT法在24h下檢測正常對照組(con組)、溶劑對照組(0.1%DMSO)、不同濃度的S1處理組(1μg/ml,10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、1000μg/ml)H9C2細胞活性;制備模型:將H9C2細胞隨機分為4組,正常對照組(con組)、缺氧4h復氧0h(4h/0h)、缺氧4h復氧4h(4h/4h)、缺氧4h復氧16h(4h/16h),通過Western blot檢測內質網應激標志蛋白GRP78表達情況,確定缺氧復氧誘導H9C2細胞發(fā)生內質網應激的時間,構建H9C2細胞缺氧復氧損傷模型;根據前期結果將H9C2心肌細胞隨機分為5組,正常對照組(con組)、不同濃度(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)S1預處理30min后的缺氧復氧組、缺氧復氧組(H/R組)。Annexin V-FITC/PI雙染色和流式細胞計數儀檢測各組H9C2細胞凋亡情況。熒光定量PCR和Western blot檢測胞內相關蛋白GRP78,CHOP,caspase-3、Bcl-2表達情況。結果:1.MTT結果顯示:蔥白提取物單體硫化物S1的濃度為10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml能促進細胞增殖(P0.01),S1濃度為1000μg/ml時對細胞有毒性作用(P0.01),低濃度溶劑(0.1%DMSO)及S1濃度為1μg/ml對細胞無明顯影響(P0.05);2.缺氧復氧H9C2細胞損傷模型條件:與con組比,細胞缺氧4h,復氧0h、16h后,GRP78的表達差異無統(tǒng)計學差異。(P0.05)。在缺氧4h復氧4h時,GRP78上調結果顯著(P0.05),由此確立誘導H9C2細胞發(fā)生內質網應激的缺氧復氧模型;10-1000μg/ml范圍內,細胞存活率明顯升高,細胞凋亡率明顯下降。3.Annexin V-FITC/PI雙染色和流式細胞計數儀檢測:經過S1預處理后,在4.熒光定量PCR和Western blot檢測:內質網應激凋亡通路相關蛋白GRP78、CHOP、caspase-3表達量較H/R組明顯下降,而抗凋亡蛋白Bcl-2明顯上調(P0.05)。結論:1.蔥白提取物單體硫化物S1在10-100μg/ml濃度范圍內可促進H9C2細胞增殖,呈濃度依賴性。2.缺氧復氧損傷能使心肌細胞存活率顯著性降低,細胞凋亡率明顯增高,經蔥白提取物單體硫化物S1預處理,可降低細胞凋亡率。3.蔥白提取物單體硫化物S1抑制內質網應激誘導的細胞凋亡,可能通過GRP78,CHOP,caspase-3蛋白上調表達、下調Bcl-2蛋白的表達有關。
【學位單位】：湖北民族大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

湖北民族大學碩士學位論文22如圖3-1所示，與正常對照組（con）對比，溶劑對照組（0.1%DMSO）與濃度為1μg/ml時，對細胞存活率沒有影響，并且無統(tǒng)計學差異，說明低濃度的溶劑與藥物對細胞無明顯毒性作用。當濃度大于10μg/ml時，細胞存活率與濃度呈正相關性，且都高于con組，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。當濃度為1000μg/ml時，與con組相比

第二章 實驗研究23圖3-2 不同復氧時間對H9C2細胞GRP78蛋白表達的影響Fig.3-2 Effects of different reoxygenation time on GRP78 protein expression in H9C2 cells注：*表示與空白對照組相比較，*：P＜0.055.3 Annexin V-FITC 法流式細胞儀檢測H9C2 心肌細胞凋亡細胞接種于培養(yǎng)皿，細胞融合度達70%時饑餓處理，分別用不同濃度S1預處理30min后通過FITC和PI相結合，其檢測結果如下圖3-3所示。本實驗主要分析早期凋亡細胞，從而計算凋亡率。如圖3-4所示，con組凋亡率為（5.13±0.42）%、H/R 組凋亡率為（22.30±2.16）%，不同濃度S1預處理組凋亡率分別為（12.0±0.10）%

24100μg/ml con圖3-3 流式細胞儀上各組細胞凋亡情況Fig. 3-3 Cell apoptosis in each group on flow cytometry圖3-4 Annexin V-FITC 流式細胞儀檢測各組凋亡率Fig. 3-4 Annexin V-FITC flow cytometry to detect apoptotic rate in each group注：*表示與空白對照組相比較，**：P＜0.01▲表示與H/R模型組相比較，▲▲：P＜0.015.4熒光定量PCR 檢測內質網應激相關蛋白GRP78、CHOP、caspase-3 、Bcl-2基因表達5.4.1 熒光定量PCR測定內質網應激標志蛋白分子GRP78 的mRNA表達本實驗以β-actin為內參，通過使用2-ΔΔCT計算結果表明，對比con組，H/R 組和SI預處理組的GRP78mRNA的表達均有明顯上調，H/R是con組的2.66±0

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本文編號：2826526