目的通過CCK-8實(shí)驗(yàn)篩選龍葵最佳提取分離方式,研究龍葵提取物對(duì)腸癌DLD-1的體內(nèi)、體外抗腫瘤作用機(jī)制。方法采用CCK-8法獲得的細(xì)胞抑制率為參考,對(duì)龍葵的最佳提取溶劑與方式進(jìn)行選擇;以CCK-8實(shí)驗(yàn)選擇龍葵的最佳分離方式;通過CCK8實(shí)驗(yàn),細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),AO-EB雙染色法實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞法實(shí)驗(yàn),研究實(shí)驗(yàn)所得龍葵提取物對(duì)腸癌DLD-1的增殖、遷移及凋亡的作用;通過免疫組織化學(xué)法研究龍葵提取物對(duì)裸鼠瘤體的作用。結(jié)果1.龍葵全草以80%乙醇溶液加熱回流提取時(shí),其提取物對(duì)腸癌DLD-1細(xì)胞產(chǎn)生的增殖抑制作用,在給藥范圍內(nèi),其最高抑制率可達(dá)85.5%,IC_(50)值為0.83mg/mL,因此,采用80%乙醇回流的提取方式作為最佳提取方式。當(dāng)龍葵80%醇提取物經(jīng)LSA-10大孔樹脂洗脫時(shí),50%醇洗脫物的IC_(50)值為1.056mg/mL,將LSA-10大孔樹脂洗脫時(shí),50%洗脫物作為最佳分離成分。2.龍葵提取物對(duì)結(jié)腸癌體外抗腫瘤作用研究:從CCK-8實(shí)驗(yàn)所得IC_(50)值可知,當(dāng)細(xì)胞增殖抑制率為50%時(shí),澳洲茄堿的給藥濃度為0.86mg/mL,五氟尿嘧啶的濃度為0.46mg/mL,龍葵提取物的濃度為0.94mg/mL。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)各給藥組均有抑制細(xì)胞遷移的能力。AO-EB雙染色熒光顯色法檢測(cè)給藥狀態(tài)下細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn),空白對(duì)照組的細(xì)胞,呈現(xiàn)正常的細(xì)胞狀態(tài);龍葵提取物組的細(xì)胞呈現(xiàn)形態(tài)比較飽滿,但數(shù)量有所減少的狀態(tài);澳洲茄堿組的細(xì)胞呈凋亡現(xiàn)象,且細(xì)胞數(shù)量減少;五氟尿嘧啶組的細(xì)胞,則細(xì)胞凋亡的比較嚴(yán)重,細(xì)胞數(shù)量明顯減少。流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率發(fā)現(xiàn),各給藥組均呈現(xiàn)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象。3.龍葵提取物對(duì)結(jié)腸癌體內(nèi)抗腫瘤作用研究:龍葵提取物,澳洲茄堿,聯(lián)合給藥以及五氟尿嘧啶可在一定程度上對(duì)裸鼠瘤體的質(zhì)量和體積產(chǎn)生抑制作用。以免疫組織化學(xué)法對(duì)裸鼠瘤體組織切片染色反應(yīng)后,其組織切片在光學(xué)顯微鏡下呈現(xiàn)大量的呈現(xiàn)棕色斑點(diǎn)或斑塊,這是細(xì)胞顯現(xiàn)陽性反應(yīng)的現(xiàn)象。而在使用Image-Pro Plus圖像分析軟件對(duì)切片進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn),給藥組的陽性表達(dá)率均小于空白對(duì)照組,結(jié)果表明,各給藥組均對(duì)裸鼠瘤體有抑制作用。結(jié)論結(jié)合CCK-8實(shí)驗(yàn),篩選出龍葵全草藥材抗腫瘤活性成分的最佳提取和分離方式。對(duì)提取物進(jìn)行體外抗腫瘤作用機(jī)制研究時(shí)發(fā)現(xiàn),龍葵提取物在一定程度上,對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖遷移能力有抑制作用,使細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量發(fā)生變化,同時(shí)可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。對(duì)提取物進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),龍葵提取物對(duì)裸鼠瘤體質(zhì)量和體積具有抑制作用,且其給藥組呈現(xiàn)的陽性率相對(duì)較低。
【學(xué)位單位】：山西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5;R284.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙逸斌;鄧科;楊少輝;崔

本文編號(hào)：2821052