目的:探討脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human coronary artery endothelial cell,HCAEC)損傷后縫隙連接蛋白43(Connexin43,Cx43)和小窩蛋白1(caveolin1,Cav-1)表達(dá)的影響。觀察過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(PPARγ)激動(dòng)劑羅格列酮(Rosiglitazone,RSG)對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞縫隙連接蛋白43和小窩蛋白1的影響,探討羅格列酮對(duì)血管內(nèi)皮損傷的改善作用。方法:培養(yǎng)人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,用不同濃度的脂多糖(0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L、10mg/L)和過氧化物酶體增殖物激活受體-γ激動(dòng)劑羅格列酮(1、10、50、100μmol/L)分別刺激細(xì)胞24小時(shí),同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)不同濃度藥物對(duì)細(xì)胞活力的影響并選則用于本研究的最適藥物濃度。將HCAEC隨機(jī)分為四組,空白對(duì)照組、脂多糖組(0.1mg/L)、羅格列酮組(10μmol/L)及脂多糖+羅格列酮組(10μmol/L羅格列酮預(yù)處理1小時(shí)后加入脂多糖共同作用24小時(shí)),分別采用蛋白免疫印跡法(Western blot,WB)和實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法測(cè)定脂多糖誘導(dǎo)的人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中Cx43,Cav-1的蛋白和mRNA的表達(dá)變化。結(jié)果:(1)MTT法檢測(cè)四組LPS及RSG濃度對(duì)細(xì)胞活力影響的結(jié)果顯示:LPS濃度≥1mg/L(0.287±0.06)時(shí),較對(duì)照組(0.59±0.13)細(xì)胞活力降低(P0.05),且隨著LPS濃度升高,對(duì)HCAEC活性的抑制作用增強(qiáng),LPS濃度在0.1mg/L(0.487±0.09)以下時(shí)對(duì)細(xì)胞活力無抑制作用(P0.05)。RSG濃度≥50μmol/L(0.252±0.011)時(shí),較對(duì)照組(0.310±0.014)HCAEC活力降低(P0.05),同樣隨著RSG濃度升高,對(duì)HCAEC活性的抑制作用增強(qiáng),RSG濃度在10μmol/L(0.297±0.011)以下時(shí)對(duì)細(xì)胞活力無影響(P0.05)。(2)由Western blot結(jié)果表明,與對(duì)照組中Cx43(0.45±0.015)及Cav-1(2.04±0.14)的蛋白表達(dá)水平及羅格列酮組中Cx43(0.40±0.013)及Cav-1(1.91±0.16)蛋白表達(dá)水平相比,脂多糖組中Cx43(0.57±0.024)及Cav-1(2.91±0.15)蛋白表達(dá)水平升高(P均0.01)。與脂多糖組比較,羅格列酮預(yù)處理1小時(shí)后加入脂多糖共培養(yǎng)組中Cx43(0.32±0.025)及Cav-1(1.90±0.18)兩種蛋白水平下降(P均0.01)。(3)根據(jù)RT-PCR結(jié)果顯示,與對(duì)照組中Cx43(1.00±0.04)及Cav-1(1.00±0.02)的mRNA表達(dá)水平及羅格列酮組中Cx43(0.93±0.02)及Cav-1(0.94±0.02)的mRNA表達(dá)水平相比,脂多糖組中Cx43(1.69±0.02)及Cav-1(1.82±0.05)的mRNA表達(dá)水平升高(P均0.01)。與脂多糖組比較,羅格列酮預(yù)處理1小時(shí)后加入脂多糖共培養(yǎng)組中Cx43(0.91±0.01)及Cav-1(0.92±0.03)兩種mRNA水平下降(P均0.01)。結(jié)論:脂多糖介導(dǎo)Cx43及Cav-1表達(dá)上調(diào)發(fā)揮炎癥作用,造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷,促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成。PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮能抑制LPS誘導(dǎo)的HCAEC中Cx43和Cav-1表達(dá)的增加,減輕冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞功能損害,從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

羅格列酮對(duì)脂多糖誘導(dǎo)人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞縫隙連接蛋白 43 和小窩蛋白 1 表達(dá)的影響 2019 屆碩實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（HCAEC）經(jīng)培養(yǎng) 4 小時(shí)后細(xì)胞開始呈貼24 小時(shí)后細(xì)胞大部分貼壁，未貼壁的細(xì)胞則提示已經(jīng)死亡，最開始長(zhǎng)緩慢，分布范圍分散，形態(tài)不規(guī)則（圖 1A）。1-2 天后細(xì)胞呈對(duì)倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞生長(zhǎng)速度加快，呈長(zhǎng)梭形，核分裂相較前細(xì)胞貼壁范圍密集（圖 1B）。對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，細(xì)胞生長(zhǎng)迅速且發(fā)生鋪滿在細(xì)胞培養(yǎng)瓶底部，呈“鋪路石”樣改變（圖 1C）。

空白對(duì)照組 2.04±0.14LPS 組 2.91±0.15 RSG 組 1.91±0.16LPS+RSG 組 1.90±0.18#注：與空白對(duì)照組和羅格列酮組比較， P<0.01；與脂多糖組比較，#P<0.01。對(duì)照組LPS組RSG組LPS+RSG組0.00.20.40.60.8A*#Cx43/GAPDH蛋白表達(dá)量對(duì)照組LPS組RSG組LPS+RSG組01234*#BCav-1/GAPDH蛋白表達(dá)量

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本文編號(hào)：2820631