目的觀察右旋葡聚糖硫酸鈉(Dextran Sodium Sulfate,DSS)誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)小鼠結(jié)腸組織中自噬蛋白Beclin1、LC3II/I的表達(dá)變化,以及姜黃素調(diào)控自噬蛋白Beclin1、LC3促進(jìn)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜修復(fù)的可能作用機(jī)制。方法選取60只SPF級(jí)、雄性BALB/C小鼠,體質(zhì)量為(18±2.5)g,鼠齡6-8周,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、姜黃素灌胃組、美沙拉嗪灌胃組4組,每組15只,隨機(jī)分組后各組小鼠體質(zhì)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后,除正常對(duì)照組外,模型對(duì)照組、姜黃素灌胃組、美沙拉嗪灌胃組均采用DSS法制造UC模型;自造模第1天起,姜黃素灌胃組小鼠給予姜黃素灌胃,美沙拉嗪灌胃組小鼠給予美沙拉嗪混懸液500mg/kg灌胃,模型對(duì)照組、正常對(duì)照組兩組小鼠均給予生理鹽水灌胃。造模之日起,依據(jù)Cooper方法評(píng)價(jià)小鼠模型的建模情況,每天觀察小鼠大便的性狀、便血情況、精神和體重的變化等,記錄并計(jì)算四組小鼠的疾病活動(dòng)指數(shù)(Disease Activity Index,DAI),各組小鼠連續(xù)處理21天,第22天處死小鼠,并留取結(jié)腸組織標(biāo)本待檢測(cè)。采用HE染色觀察結(jié)腸病理損傷情況、免疫熒光及Western Blot法檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織Beclin1、LC3II/I的表達(dá)。結(jié)果(1)模型制備后,模型對(duì)照組小鼠活動(dòng)少、精神差、體重下降、大便不成形,肉眼可見黏液膿血便;姜黃素灌胃組小鼠大便性狀及便血情況相較模型對(duì)照組較輕,但仍可見少量膿血便及黑便;美沙拉嗪灌胃組見有少量腹瀉、黏液便、以及少量黑便、血便。DAI評(píng)分顯示模型對(duì)照組于第2天開始出現(xiàn)結(jié)腸炎癥狀并逐漸開始加重,提示DSS小鼠造模成功;(2)造模成功后,經(jīng)HE染色表明,小鼠組織病理損傷評(píng)分在姜黃素灌胃組(2.23±0.10)較正常對(duì)照組(0.07±0.05)顯著升高(P0.01),較模型對(duì)照組(3.90±0.07)顯著降低(P0.01);(3)免疫熒光染色顯示,Beclin1、LC3在姜黃素灌胃組表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(0.74±0.02比0.17±0.11,P0.01;0.77±0.06比0.26±0.02,P0.01),但低于模型對(duì)照組(0.74±0.02比0.89±0.02,P0.05;0.77±0.06比1.06±0.02,P0.05);(4)Western Bolt提示,Beclin1、LC3II/I在姜黃素灌胃組表達(dá)高于正常對(duì)照組(0.27±0.02比0.11±0.01,P0.01;1.64±0.05比0.55±0.07,P0.01),但低于模型對(duì)照組(0.27±0.02比0.36±0.01,P0.05;1.64±0.05比1.87±0.04,P0.05)。結(jié)論(1)Beclin 1、LC3在結(jié)腸炎黏膜中過度表達(dá)可能導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病;(2)姜黃素可通過下調(diào)相關(guān)自噬基因表達(dá),改善和修復(fù)腸黏膜損傷。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5

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本文編號(hào)：2820157