目的:探討平喘寧調(diào)節(jié)肺組織中PI3K-Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白治療寒性哮喘大鼠的作用機(jī)制。通過免疫組化、RT-qPCR等方法來檢測(cè)平喘寧干預(yù)后PI3K-Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路中P21CIP1、P27KIP1、Bad、FKHR、PKC的表達(dá)水平的變化,來研究平喘寧對(duì)寒性哮喘大鼠的影響及作用機(jī)制。方法:把105只健康的SD雄性大鼠(6-8周,180-230g重)隨機(jī)分為7組,15只一組。七組為正常組、模型組、平喘寧高劑量組、平喘寧中劑量組、平喘寧低劑量組、桂龍咳喘寧組以及地塞米松組。適應(yīng)性飼養(yǎng)后,除正常組外,其余各組在第1天和第8天進(jìn)行致敏,以卵蛋白和生理鹽水配制成10%卵蛋白溶液,對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射,每只1ml,正常組的大鼠注射1ml生理鹽水。第15天,對(duì)正常組外的各組以1%的卵蛋白溶液進(jìn)行霧化,同時(shí)給予寒冷刺激,每天1次,每次30分鐘,連續(xù)一周。第22天,對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃治療,各藥物組給予相應(yīng)藥物,模型組和正常組給予同容量的生理鹽水,連續(xù)四周。灌胃結(jié)束后,再進(jìn)行一次1%卵蛋白超聲霧化及寒冷刺激,在2小時(shí)內(nèi),對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉解剖,取肺組織,左肺置于福爾馬林中固定,右肺放入凍存管中放進(jìn)-80℃冰箱保存。用HE染色法檢測(cè)大鼠肺組織的病理改變,用RT-qPCR法檢測(cè)肺組織中Bad、FKHR、PKCmRNNA的表達(dá)水平,用免疫組化法檢測(cè)肺組織中P21CIP1、P27KIP1的表達(dá)水平。結(jié)果:病理檢測(cè)結(jié)果顯示,相較于正常組,模型組大鼠支氣管結(jié)構(gòu)明顯紊亂,氣道上皮細(xì)胞脫落,管壁明顯增厚,黏膜充血,有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象,各治療組皆有不同程度的病理變化;和模型組相比,各治療組肺組織的病理變化程度得到改善。免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常組相比,其他各組大鼠肺組織P21CIP1、P27KIP1表達(dá)水平均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);與模型組相比,各給藥組大鼠肺組織P21CIP1、P27KIP1表達(dá)皆有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。其中平喘寧高劑量組對(duì)于P21CIP1、P27KIP1的作用效果相較于其他組較佳。RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示,與正常組相比,其他各組大鼠肺組織PKCmRNA、FKHRmRNA、BadmRNA表達(dá)水平均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);與模型組相比,各給藥組大鼠肺組織PKCmRNA、FKHRmRNA、BadmRNA表達(dá)皆有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。其中平喘寧高劑量組對(duì)于PKC、FKHR作用效果優(yōu)于其他治療組(P0.01),平喘寧高劑量組和地塞米松組對(duì)于Bad作用效果優(yōu)于其他治療組(P0.01)。結(jié)論:平喘寧能夠升高信號(hào)通路PI3K-Akt中P21CIP1、P27KIP1蛋白表達(dá)水平以及Bad、FKHRmRNA表達(dá)水平,降低PKCmRNA表達(dá)水平,減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn),減輕炎癥反應(yīng),抑制寒哮大鼠肺組織氣道平滑肌增殖,從而減緩氣道重塑,治療哮喘。
【學(xué)位單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

桂龍咳喘寧組圖 1 各組大鼠肺組Fig 1 HE staining of lung tiss從上圖可以看出 HE 染色后，正常組細(xì)胞浸潤(rùn)，管壁無(wú)明顯增厚。與正常組相紊亂，氣道上皮細(xì)胞脫落，管壁明顯增給藥組皆有不同程度的病理變化。與模塞米松組、桂龍咳喘寧組大鼠肺組織的藥物都有不同程度的改善，其中地塞米物，兩組的病理表現(xiàn)皆有明顯改善，黏相對(duì)完整；平喘寧組也都有顯著改善，平度要高于平喘寧低劑量組。

免疫組化檢測(cè)各組大鼠

圖 3 各組大鼠肺組織 P27KIP1 蛋白表達(dá)量比較Fig 3 Comparison of P27KIP1 protein expression in lung tissue of rats in each group由表2中各組數(shù)據(jù)以及圖2、圖3可以看出：與正常組相比，其他各組P27KIP1蛋白表達(dá)水平均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）；與模型組相比，各給藥組 P27KIP1表達(dá)皆有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。平喘寧高劑量組 P27KIP1 表達(dá)水平高于桂龍咳喘寧組、地塞米松組和平喘寧中、低劑量組（P<0.01）。結(jié)果表明，各藥物組對(duì)于大鼠肺組織 P27KIP1 蛋白表達(dá)有影響，其中平喘寧高劑量組的效果更佳。

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1 曾建興;林利平;李國(guó)花;黃世杰;蔡明雅;蘇銀鳳;;外周血T淋巴細(xì)胞亞群在不同致敏原因哮喘兒童中的表達(dá)研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2019年12期

2 王寧;王立軍;任筱

本文編號(hào)：2819138