目的:通過體外和體內(nèi)實驗觀察天麻酚性成分3#、4#、8#對腦缺血再灌注損傷(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)后7d、14d大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子-A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)的表達及神經(jīng)修復(fù)的影響,闡明天麻酚性成分促血管新生及神經(jīng)修復(fù)的作用。方法:1.采用牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)梯度離心的方法分離培養(yǎng)大鼠原代腦微血管內(nèi)皮細胞(Brain microvascular endothelial cells,BMECs),以Matrigel為細胞支架,進行體外成環(huán)實驗,考察3#、4#、8#對體外小管形成的影響,初步篩選具有促血管新生作用的天麻酚性成分。2.復(fù)制大鼠腦缺血再灌注損傷(Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,灌胃給予相應(yīng)受試物,每天一次,連續(xù)給藥7d和14d(下同),并于再灌注2h、給予受試物7d、14d采用Longa 5分法進行神經(jīng)功能學(xué)評分;并于給受試物7d、14d后心臟取血,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)檢測3#、4#、8#對大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌的影響;制作冰凍切片或提取蛋白,采用免疫熒光法和Western Blot法檢測3#、4#、8#對MCAO/R大鼠大腦皮層及海馬VEGF-A、神經(jīng)核(Neuron nucleu,NeuN)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain derived nerve growth factor,BDNF)表達及神經(jīng)功能的影響。結(jié)果:1.3#、4#、8#對大鼠原代BMECs體外成環(huán)的影響3#、8#能明顯促進內(nèi)皮細胞體外成環(huán)(P0.01);4#組管腔個數(shù)有增加趨勢,但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.3#、4#、8#對再灌注2h、給予3#、4#、8#7d、14d大鼠神經(jīng)功能的影響再灌注2h各組模型大鼠均出現(xiàn)神經(jīng)功能缺失癥,組間無差異。給予天麻酚性成分3#、4#、8#7d大鼠神經(jīng)功能缺失癥狀有改善的趨勢,給予受試物14d大鼠神經(jīng)功能缺失癥狀有明顯改善。3.3#、4#、8#對大鼠腦皮層及海馬VEGF-A表達的影響(免疫熒光法)給予天麻酚性成分3#、4#、8#7d大鼠大腦皮層VEGF-A陽性細胞明顯增多,海馬VEGF-A陽性細胞有增多的趨勢;給予受試物14d大鼠大腦皮層、海馬VEGF-A陽性細胞均明顯增多。4.3#、4#、8#對大鼠大腦VEGF-A表達的影響(Western Blot)給予天麻酚性成分3#、4#、8#7d的4#、8#組,14d的8#組大鼠大腦VEGF-A表達明顯升高。給予受試物7d的3#組、14d 3的#、4#組大鼠大腦VEGF-A表達有升高的趨勢。5.3#、4#、8#對大鼠外周血VEGF分泌的影響給予天麻酚性成分3#、4#、8#7d的8#組大鼠VEGF含量增加,給予受試物7d的4#組、14d的4#組、8#組大鼠VEGF的含量有升高的趨勢。6.3#、4#、8#對大鼠腦皮層及海馬NeuN表達的影響(免疫熒光)給予天麻酚性成分3#、4#、8#7d大鼠大腦皮層NeuN陽性細胞明顯增多,各組海馬NeuN陽性細胞有增多的趨勢。給予受試物14d 3#、4#、8#組大鼠大腦皮層、海馬NeuN陽性細胞均明顯增多。7.3#、4#、8#對大鼠大腦Neu N和BDNF表達的影響(Western Blot)給予天麻酚性成分3#、4#、8#7d、14d大腦NeuN表達有升高的趨勢,給予受試物7d的3#、4#組,14d的3#、4#、8#組大鼠大腦BDNF表達明顯升高。結(jié)論:3#、8#能促進BMECs體外成環(huán),具有促體外血管新生作用。天麻酚性成分3#、4#、8#能促進MCAO/R大鼠血管新生和神經(jīng)修復(fù)。
【學(xué)位單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 文歡;天麻素對氧糖剝奪再復(fù)供損傷大鼠皮層神經(jīng)細胞保護作用的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2018年

2 常銳碧;天麻酚性成分促MCAO/R大鼠血管新生的作用及機制研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2018年

本文編號：2818461