藥物納米晶自穩(wěn)定Pickering乳液(nanocrystals self-stabilized Pickering emulsions,NSSPE)是課題組首創(chuàng)的一種新型乳液,可提高難溶性成分的口服生物利用度。課題組前期分別以水飛薊賓和葛根素為模型藥,成功構(gòu)建了NSSPE。但尚未深入研究影響NSSPE制備的主要因素。本課題以通脈方中三種難溶性有效成分葛根素、丹參酮ⅡA和阿魏酸為模型藥,研究藥物-油相性質(zhì)、水相pH、藥物濃度(即在體系中固體微粒的濃度)、水油體積比等因素對NSSPE成型與穩(wěn)定的影響,分析其原因,揭示影響NSSPE制備的重要因素。同時,通過藥物分布、FIM、CLSM、SEM、DSC等研究對三種難溶性成分的NSSPE進行表征,揭示NSSPE的微觀結(jié)構(gòu)。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:(1)NSSPE的評價方法從以下4個方面對NSSPE進行評價:(1)外觀:觀察室溫靜置過程中乳液的外觀變化,計算穩(wěn)定指數(shù);(2)離心穩(wěn)定性:觀察4000×g離心15 min后乳液的外觀變化,測定乳液層在500 nm處的吸光度;(3)乳滴粒徑:光學(xué)顯微鏡觀察乳滴形態(tài),拍攝照片,計數(shù)200個乳滴的粒徑;(4)乳液層藥物含量:HPLC測定新制備、放置14 d及離心后的乳液層藥物含量,計算含量下降率。(2)藥物-油相性質(zhì)對NSSPE制備的影響選用Campul C8、Fabrafil M 1944 CS、肉豆蔻酸異丙酯、川芎油和橄欖油為油相,分別以葛根素、丹參酮ⅡA和阿魏酸為固體微粒,高壓均質(zhì)法制備NSSPE,并進行評價。同時測定油相黏度、表面張力,藥物的表面能,藥物固體微粒的粒徑、Zeta電位,藥物在不同油相中的溶解度和logP,三相接觸角等油-水性質(zhì),探尋藥物-油相性質(zhì)對制備的影響。研究發(fā)現(xiàn),油相黏度、藥物固體微粒的粒徑和電荷對NSSPE的制備有重要影響:油相黏度過低,如肉豆蔻酸異丙酯的黏度接近于水,不利于成乳;固體微粒粒徑過大和電荷過低,如阿魏酸微粒的粒徑達數(shù)個微米,Zeta電位接近于0,不利于乳液的成型。此外,三相接觸角對NSSPE的穩(wěn)定也有一定影響;而溶解度、logP、油相表面張力、藥物表面能等性質(zhì)與乳液的構(gòu)建可能無關(guān)。在此基礎(chǔ)上,優(yōu)選出川芎油:Fabrafil M 1944 CS=9:1(v/v)作為油相,進行后續(xù)實驗。(3)水相pH對NSSPE制備的影響設(shè)置水相pH為5.0、7.0、9.0、11.0、11.5、12.0和13.0,分別制備葛根素、丹參酮ⅡA和阿魏酸的NSSPE,并進行評價。同時測定了各pH條件下三種藥物固體微粒的粒徑、Zeta電位和混懸液的pH,探究水相pH對NSSPE制備的影響及原因。研究發(fā)現(xiàn),水相pH是影響NSSPE成型與穩(wěn)定的又一個重要因素:三種藥物的NSSPE均是在較強的堿性條件下更穩(wěn)定。同時,三種微粒在堿性條件下所帶電荷顯著增多;阿魏酸和葛根素微粒在堿性條件下粒徑更小,丹參酮ⅡA微粒的粒徑變化不大。此外,堿性條件下油相的自乳化能力顯著增強。由此推測,水相pH能通過影響固體微粒的粒徑、電荷,以及油相的自乳化能力而影響NSSPE的構(gòu)建。(4)藥物濃度對NSSPE制備的影響分別設(shè)置不同的藥物濃度,制備葛根素、丹參酮ⅡA和阿魏酸的NSSPE,并進行評價。同時測定不同濃度下固體微粒的粒徑、Zeta電位和混懸液的pH,探究藥物濃度對NSSPE制備的影響及原因。結(jié)果顯示,濃度較大時,Pu-NSSPE會出現(xiàn)絮凝現(xiàn)象,FA-NSSPE分層加劇,乳層吸光度顯著減弱,但TanⅡA-NSSPE受濃度影響較小。同時,增大濃度后,弱酸性的葛根素和阿魏酸微粒粒徑增大、電荷減少,混懸液的pH也降低;但濃度對丹參酮ⅡA微粒的影響較小。由此推測,藥物濃度能通過影響固體微粒的粒徑、電荷和混懸液的pH而影響NSSPE的成乳及穩(wěn)定性,且這種影響對具有一定酸堿性的藥物可能更明顯。(5)水油體積比對NSSPE制備的影響設(shè)置水油體積比為95:5,90:10,85:15,80:20和70:30,分別制備葛根素、丹參酮ⅡA和阿魏酸的NSSPE,探究水油體積比對NSSPE制備的影響。結(jié)果顯示,隨著油相比例的增大,三種藥物NSSPE乳液層吸光度先增大再減小;析出的油相逐漸增多。說明,油相比例過大或過小,不利于乳液的構(gòu)建與穩(wěn)定。(6)三種難溶性成分NSSPE的制備和表征根據(jù)上述制備條件的考察結(jié)果,選擇水相pH(水平為11.5和12.0)和水油體積比(水平為90:10和85:15),按照析因設(shè)計制備了4種工藝條件的葛根素、丹參酮ⅡA和阿魏酸的NSSPE,比較了乳液的穩(wěn)定性和藥物分布,并用FIM、CLSM、SEM和DSC對優(yōu)選的NSSPE進行結(jié)構(gòu)表征。在4種工藝中,工藝A(水相pH為11.5,水油體積比為90:10)制得的Pu-NSSPE,工藝D(水相pH為12.0,水油體積比為85:15)制得的TanⅡA-NSSPE,工藝C(水相pH為12.0,水油體積比為90:10)制得的FA-NSSPE室溫放置90 d后仍具有很好的乳液外觀和乳滴形態(tài),粒徑無明顯變化,僅藥物含量略有下降。葛根素、丹參酮ⅡA和阿魏酸納米晶在乳滴界面的吸附率分別為29.4%、84.4%和22.1%。FIM、CLSM、SEM測定結(jié)果證實,三種藥物的納米晶均可吸附于川芎油-Fabrafil M 1944 CS的油滴表面。DSC證實,相對于原料藥,吸附于乳滴界面的藥物納米晶,晶型可能發(fā)生了變化。本課題通過比較各種因素對葛根素、丹參酮ⅡA和阿魏酸NSSPE成型與穩(wěn)定的影響,初步揭示了影響NSSPE制備的重要因素及其機制,可為其他中藥難溶性成分的NSSPE的制備提供參考。
【學(xué)位單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R283.6
【部分圖文】：

圖 1-2 葛根素的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 1-2 The standard curve of puerarinSSPE 樣品，按 2.4.1（2） 項下的方法制備 6 （1） 項下的色譜條件進樣分析，分別測定葛葛根素含量見表 1-2�？梢姡�6 次測定的 RSD 值求。表 1-2 重復(fù)性試驗結(jié)果Table 1-2 The results of repeatability test5.0 和 125.0 μg·mL-1對照品溶液，每天進樣三次1 2 3 4 5 6 L-13.88 3.90 3.97 3.91 3.85 4.02

圖 1-3 丹參酮ⅡA 的色譜圖. a.對照品溶液；b.陰性樣品溶液；c.供試品溶液.Fig. 1-3 Chromatograms of tanshinoneⅡA. a. standard solution；b. negative solution；c. testingsolution3.2.3 線性與范圍精密吸取丹參酮ⅡA 對照品儲備液 0.01、0.05、0. 25、1.25 和 6.25 mL，甲醇定容至 10 mL，得濃度分別為 0.08、0.4、2.0、10.0 和 50.0 μg·mL-1的對照溶液。按 2.4.2（1） 項下的色譜條件進樣分析。以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)（X），丹參酮ⅡA 峰面積為縱坐標(biāo)（Y），計算線性方程。不同濃度丹參酮ⅡA 對照品溶液的色譜峰面積見表 1-5，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖 1-4�？梢�，丹參酮ⅡA 濃度在 0.08~50.0 μg·mL-1范圍內(nèi)，與色譜峰面積的線性關(guān)系良好，線性方程為：Y=61.544X +5.4842，r=1。表 1-5 丹參酮ⅡA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果Table 1-5 The data of standard curve of tanshinoneⅡA對照品溶液濃度 / μg·mL-10.08 0.4 2.0 10.0 50.0

圖 1-3 丹參酮ⅡA 的色譜圖. a.對照品溶液；b.陰性樣品溶液；c.供試品溶液.Fig. 1-3 Chromatograms of tanshinoneⅡA. a. standard solution；b. negative solution；c. testingsolution3.2.3 線性與范圍精密吸取丹參酮ⅡA 對照品儲備液 0.01、0.05、0. 25、1.25 和 6.25 mL，甲醇定容至 10 mL，得濃度分別為 0.08、0.4、2.0、10.0 和 50.0 μg·mL-1的對照溶液。按 2.4.2（1） 項下的色譜條件進樣分析。以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)（X），丹參酮ⅡA 峰面積為縱坐標(biāo)（Y），計算線性方程。不同濃度丹參酮ⅡA 對照品溶液的色譜峰面積見表 1-5，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖 1-4。可見，丹參酮ⅡA 濃度在 0.08~50.0 μg·mL-1范圍內(nèi)，與色譜峰面積的線性關(guān)系良好，線性方程為：Y=61.544X +5.4842，r=1。表 1-5 丹參酮ⅡA 的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果Table 1-5 The data of standard curve of tanshinoneⅡA對照品溶液濃度 / μg·mL-10.08 0.4 2.0 10.0 50.0

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本文編號：2814544