目的:研究黃芪甲苷對(duì)心肌成纖維細(xì)胞CTGF、FN表達(dá)的影響,探究黃芪甲苷抑制心肌纖維化的分子機(jī)制,為黃芪甲苷的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:新生Wistar大鼠若干只,取心臟,采用差速貼壁法提取心肌成纖維細(xì)胞,將第二代心肌成纖維細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。MTT法選出最佳藥物干預(yù)濃度;根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組的不同進(jìn)行對(duì)應(yīng)干預(yù),空白組:不添加任何干預(yù);空載體組:為空質(zhì)粒載體;sh-CTGF組;黃芪甲苷組;TGF-β1組、sh-CTGF+TGF-β1組、TGF-β1+黃芪甲苷組、sh-CTGF+黃芪甲苷組。根據(jù)心肌成纖維細(xì)胞表面特異性抗原Vimtin進(jìn)行免疫熒光鑒定,將干預(yù)后的細(xì)胞提取RNA和蛋白分別行RT-PCR、Western blot檢測(cè)CTGF及FN mRNA及蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.提取的心肌成纖維細(xì)胞呈梭形、菱形、多邊形等不同形狀,細(xì)胞陽性率95%。2.空白組與空載體組mRNA的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示空載體對(duì)基因的表達(dá)無影響。3.空載體組、sh-CTGF組CTGF、FN mRNA的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示轉(zhuǎn)染成功,干預(yù)有效。4.空白組、TGF-β1組CTGF、FN mRNA的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,TGF-β1可刺激心肌成纖維細(xì)胞CTGF、FN mRNA的表達(dá)。5.sh-CTGF組、sh-CTGF+TGF-β1組CTGF、FN mRNA表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示TGF-β1可刺激sh-CTGF干預(yù)后心肌成纖維細(xì)胞CTGF、FN mRNA的表達(dá)。6.空白組、黃芪甲苷組CTGF、FN mRNA表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示黃芪甲苷抑制心肌成纖維細(xì)胞CTGF、FN mRNA的表達(dá)。7.通過對(duì)sh-CTGF組、sh-CTGF+黃芪甲苷組CTGF、FN mRNA表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示黃芪甲苷進(jìn)一步抑制sh-CTGF干預(yù)后的心肌成纖維細(xì)胞CTGF、FN mRNA的表達(dá)。結(jié)論:1.黃芪甲苷可降低心肌成纖維細(xì)胞CTGF、FN的表達(dá)。2.TGF-β1可刺激心肌成纖維細(xì)胞CTGF、FN的表達(dá)。3.心肌成纖維細(xì)胞CTGF與FN的表達(dá)呈正相關(guān)。4.黃芪甲苷可能是通過抑制TGF-β-smads而對(duì)下游因子CTGF、FN的表達(dá)起到抑制作用。5.黃芪甲苷可能是通過降低心肌成纖維細(xì)胞CTGF表達(dá)而降低心肌成纖維細(xì)胞FN的表達(dá),抑制心肌纖維化,改善心肌重塑,發(fā)揮心臟保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

55圖 1 光學(xué)顯微鏡心肌成纖維細(xì)胞 差速貼壁法分離的見細(xì)胞于 90min 開始貼壁生長，12 小時(shí)后長至 30-40%，20 小時(shí)后細(xì)胞長至 50-80%。

細(xì)胞免疫熒光第一代心肌成纖維細(xì)胞陽性率>95%,第二代心肌成纖維細(xì)胞陽性率達(dá)100%，可見細(xì)胞呈梭形、菱形、多邊形等不規(guī)則形狀

MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)可見黃芪甲苷濃度為20mg/L時(shí)，心肌成纖維細(xì)胞的存活率最低，故選擇20mg/L為最佳藥物干預(yù)濃度

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2813261