目的:研究黃芪甲苷對心肌成纖維細胞CTGF、FN表達的影響,探究黃芪甲苷抑制心肌纖維化的分子機制,為黃芪甲苷的臨床應用提供理論依據(jù)。方法:新生Wistar大鼠若干只,取心臟,采用差速貼壁法提取心肌成纖維細胞,將第二代心肌成纖維細胞進行后續(xù)實驗。MTT法選出最佳藥物干預濃度;根據(jù)實驗分組的不同進行對應干預,空白組:不添加任何干預;空載體組:為空質(zhì)粒載體;sh-CTGF組;黃芪甲苷組;TGF-β1組、sh-CTGF+TGF-β1組、TGF-β1+黃芪甲苷組、sh-CTGF+黃芪甲苷組。根據(jù)心肌成纖維細胞表面特異性抗原Vimtin進行免疫熒光鑒定,將干預后的細胞提取RNA和蛋白分別行RT-PCR、Western blot檢測CTGF及FN mRNA及蛋白的表達情況。結(jié)果:1.提取的心肌成纖維細胞呈梭形、菱形、多邊形等不同形狀,細胞陽性率95%。2.空白組與空載體組mRNA的表達無統(tǒng)計學意義,提示空載體對基因的表達無影響。3.空載體組、sh-CTGF組CTGF、FN mRNA的表達有統(tǒng)計學意義,提示轉(zhuǎn)染成功,干預有效。4.空白組、TGF-β1組CTGF、FN mRNA的表達有統(tǒng)計學意義,TGF-β1可刺激心肌成纖維細胞CTGF、FN mRNA的表達。5.sh-CTGF組、sh-CTGF+TGF-β1組CTGF、FN mRNA表達有統(tǒng)計學意義,提示TGF-β1可刺激sh-CTGF干預后心肌成纖維細胞CTGF、FN mRNA的表達。6.空白組、黃芪甲苷組CTGF、FN mRNA表達有統(tǒng)計學意義,提示黃芪甲苷抑制心肌成纖維細胞CTGF、FN mRNA的表達。7.通過對sh-CTGF組、sh-CTGF+黃芪甲苷組CTGF、FN mRNA表達有統(tǒng)計學意義,提示黃芪甲苷進一步抑制sh-CTGF干預后的心肌成纖維細胞CTGF、FN mRNA的表達。結(jié)論:1.黃芪甲苷可降低心肌成纖維細胞CTGF、FN的表達。2.TGF-β1可刺激心肌成纖維細胞CTGF、FN的表達。3.心肌成纖維細胞CTGF與FN的表達呈正相關。4.黃芪甲苷可能是通過抑制TGF-β-smads而對下游因子CTGF、FN的表達起到抑制作用。5.黃芪甲苷可能是通過降低心肌成纖維細胞CTGF表達而降低心肌成纖維細胞FN的表達,抑制心肌纖維化,改善心肌重塑,發(fā)揮心臟保護作用。
【學位單位】：濟寧醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

55圖 1 光學顯微鏡心肌成纖維細胞 差速貼壁法分離的見細胞于 90min 開始貼壁生長，12 小時后長至 30-40%，20 小時后細胞長至 50-80%。

細胞免疫熒光第一代心肌成纖維細胞陽性率>95%,第二代心肌成纖維細胞陽性率達100%，可見細胞呈梭形、菱形、多邊形等不規(guī)則形狀

MTT細胞增殖實驗可見黃芪甲苷濃度為20mg/L時，心肌成纖維細胞的存活率最低，故選擇20mg/L為最佳藥物干預濃度

【參考文獻】

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本文編號：2813261