目的以馬齒莧多糖為研究對象,將膜分離技術(shù)與傳統(tǒng)水提醇沉相結(jié)合,優(yōu)化馬齒莧多糖提取、分離、純化工藝;通過體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn),研究馬齒莧多糖治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用效果及其分子機(jī)制,為馬齒莧的進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。方法1.采用L9(43)正交實(shí)驗(yàn)對馬齒莧多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化;將不同孔徑的膜聯(lián)用對馬齒莧多糖進(jìn)行純化,對馬齒莧粗多糖脫蛋白和脫色素工藝進(jìn)行優(yōu)化;采用Fenton反應(yīng)、鄰苯三酚自氧化反應(yīng)研究馬齒莧多糖清除羥基自由基、超氧離子自由基活性;2.采用HE染色法,觀察馬齒莧多糖高、中、低劑量組治療后,DSS誘導(dǎo)UC小鼠模型結(jié)腸黏膜層病理形狀的改變;ELISA法檢測小鼠血清中TNF-α、IL-6、NO及IL-10的含量;3.免疫組化法檢測NF-κB/P65、p-STAT3、COX-2在小鼠結(jié)腸組織黏膜層的表達(dá);Western blot法檢測TNF-α/NF-κB、IL-6/STAT3信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白NF-κB/P65、IKBα、STAT3、p-STAT3的表達(dá)水平。結(jié)果1.馬齒莧多糖最佳提取條件為100℃,3 h,4次。三氯乙酸法和過氧化氫法脫蛋白、脫色素多糖的回收率分別為9.66%、17.09%。膜分離研究表明0.8μm陶瓷膜滲透液中,純化后的馬齒莧多糖回收率為61.63%。馬齒莧多糖對羥基自由基、超氧離子自由基的清除率分別為58.89%、38.89%。2.DSS誘導(dǎo)UC小鼠模型中,馬齒莧多糖高、中、低劑量組治療后,結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞排列恢復(fù)整齊;與空白組相比,模型組小鼠血清中TNF-α、IL-6、NO含量明顯上升(p0.01、p0.05),IL-10含量降低(p0.01)。馬齒莧多糖灌胃治療組,TNF-α、IL-6、NO含量下降,IL-10表達(dá)升高。且TNF-α、NO和IL-10在馬齒莧多糖高、中劑量組的表達(dá)與陽性藥相比無顯著性差異(p0.05)。IL-6在馬齒莧多糖中劑量組的表達(dá)與陽性藥相比無顯著性差異(p0.05)。3.免疫組化結(jié)果表明,與空白組相比模型組中NF-κB/P65、p-STAT3、COX-2三種炎癥信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)量顯著升高(p0.01)。多糖中劑量灌胃給藥后陽性表達(dá)降低,與模型組相比NF-κB/P65、p-STAT3、COX-2表達(dá)有極顯著性差異(p0.01),且NF-κB/P65、p-STAT3的陽性表達(dá)率與陽性藥組無顯著性差異(p0.05);Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在TNF-ɑ/NF-κB信號(hào)通路中,與空白組相比模型組抑制蛋白IKBα表達(dá)降低,細(xì)胞質(zhì)中NF-κB/P65表達(dá)降低(p0.01),而細(xì)胞核NF-κB/P65表達(dá)升高(p0.01)。多糖中劑量灌胃治療后,抑制蛋白IKBα表達(dá)升高,細(xì)胞核中NF-κB/P65表達(dá)降低。在IL-6/JAK/STAT3通路中,模型組p-STAT3、STAT3的表達(dá)明顯上升(p0.01),馬齒莧多糖中劑量灌胃給藥組,表達(dá)降低且p-STAT3的表達(dá)與陽性藥比無顯著性差異(p0.05)。結(jié)論本論文將傳統(tǒng)工藝與膜分離技術(shù)相結(jié)合優(yōu)化馬齒莧多糖提取、分離、純化工藝,探討馬齒莧多糖治療潰瘍性結(jié)腸炎作用機(jī)制。研究結(jié)果表明馬齒莧多糖通過調(diào)控TNF-α/NF-κB和IL-6/STAT3信號(hào)通路,調(diào)控相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),降低炎癥反應(yīng),減少黏膜損傷,達(dá)到治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用。但是中藥治療疾病是從多途徑、多方位、多靶點(diǎn)發(fā)揮作用,馬齒莧多糖治療潰瘍性結(jié)腸炎作用機(jī)理還需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位單位】：陜西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284;R285.5
【部分圖文】：

購自陜西省藥材市場，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室主任王高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為馬齒莧科馬齒莧屬植物馬齒莧 Portulaca oleracea L.的全-無水葡萄糖(批號(hào)：110833-201205，質(zhì)量分?jǐn)?shù) 95%～99%)由中國食品藥品檢究院提供，其它試劑均為分析純，活性炭。VaCo5 型低溫冷凍干燥儀(Zirbus Technology)，TGL-20B 離心機(jī)(上海安亭儀器)，LNG-CM-101 實(shí)驗(yàn)室膜分離設(shè)備(上海朗級(jí)膜分離設(shè)備工程有限公司實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用雙蒸水配置濃度為 0.2 mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品液，稀釋成 0.025、0.075、0.1、0.15 mg/mL，吸取 0.6 mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，加入 4 mL 濃 H2S2 mL 新制 5% C6H5OH 溶液，100℃水浴 30 分鐘后在 490 nm 處測定吸光度制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 Y=5.9589X+0.0735，r2=0.9957 線性范圍025~0.150 mg/mL 結(jié)果見圖 2-2。2 多糖的提取2.1 工藝流程

圖 2-2 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線及單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.4 正交實(shí)驗(yàn)L9(43)正交實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表 2-4、2-5。表 2-4 馬齒莧多糖提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果序號(hào) A 溫度(℃) B 時(shí)間(h) C 次數(shù)(次) 提取率(%)1 80 2 2 7.472 80 3 3 9.693 80 4 4 12.414 90 2 3 8.785 90 3 4 12.246 90 4 2 8.327 100 2 4 13.758 100 3 2 13.029 100 4 3 11.88K1 9.86 10.00 9.60

馬齒莧多糖的提取分離及其抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用機(jī)理研究A2/t 為加入樣品溶液后鄰苯三酚自氧化反應(yīng)速率參照 2.2.1 工藝流程取馬齒莧精制多糖，測定馬齒莧多糖對超氧離子自由基的清除活性。結(jié)果見表 2-10。表 2-10 馬齒莧多糖清除超氧離子自由基活性多糖質(zhì)量濃度(mg/mL) 2 4 8 12 16清除率(%) 7.78 6.67 15.56 24.44 38.89由表 2-10、圖 2-3 可知，馬齒莧多糖具有清除超氧離子自由基的作用，在 2~16mg/mL 多糖質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著多糖質(zhì)量濃度的升高清除率增高。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2813228