目的:通過體內(nèi)裸鼠移植瘤試驗(yàn)和免疫低下小鼠試驗(yàn)研究,探究復(fù)方淫羊藿制劑(Compound of epimedium preparation,CEP)對(duì)人肺癌細(xì)胞和對(duì)免疫低下小鼠的作用。方法:1、建立NCI-H460肺癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,按模型組,環(huán)磷酰胺(CTX)陽性組,CEP高中低劑量組進(jìn)行分組(各5只)。另取5只未接種細(xì)胞的裸鼠作為空白組,空白組和模型組灌胃等體積的蒸餾水,CTX組以0.025 g/kg的劑量腹腔注射,CEP組分別以生藥量濃度9.6 g/kg、4.8 g/kg、2.4 g/kg的劑量灌胃。陽性組隔天給藥一次,其他組每天一次,持續(xù)給藥13天;在給藥期間,隔天測量一次瘤體積,停藥次日,先將裸鼠稱重,測量移植瘤體積,再處死裸鼠,剝離瘤體待用;2、ELISA法測裸鼠血清中白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量;羥胺法測定腫瘤組織中超氧化物歧化酶(SOD)含量;硫代巴比妥酸法測定腫瘤組織中丙二醛(MDA)的含量;3、HE染色法觀察各組瘤組織的病理形態(tài)學(xué)變化;免疫組化法觀察CEP對(duì)裸鼠h植瘤瘤組織中Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、p53蛋白表達(dá)的影響;4、采用RT-PCR檢測CEP對(duì)裸鼠移植瘤組織中的Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、p53以及VEGF基因表達(dá)的影響。5、建立小鼠免疫低下模型,按模型組,CEP高中低劑量組進(jìn)行分組(各8只)。另取8只正常小鼠作為空白對(duì)照組,空白對(duì)照組和模型組灌胃等體積的蒸餾水,CEP組分別以生藥量濃度9.6 g/kg、4.8 g/kg、2.4 g/kg的劑量灌胃,每天給藥一次,持續(xù)給藥兩周;6、分別測定各組小鼠的肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)等,通過碳廓清試驗(yàn)來檢測小鼠的單核-巨噬細(xì)胞功能,通過足趾增厚法來檢測試驗(yàn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力,以及通過溶血素測定來檢測試驗(yàn)小鼠的體液免疫功能;7、測定試驗(yàn)小鼠血清的免疫球蛋白(IgG)的含量;ELISA法測小鼠血清中白細(xì)胞介素-2(IL-2)和γ-干擾素(IFN-γ)的含量。結(jié)果:1、成功建立NCI-H460肺癌細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率100%。2、CTX組和CEP高、中劑量組裸鼠移植瘤的體積和瘤重均明顯比模型組小(p0.05或p0.01);CTX組和高中低3個(gè)劑量的CEP組的抑瘤率分別達(dá)到59.77%、58.12%、48.21%、40.56%。3、CTX組和CEP各給藥組荷瘤裸鼠血清中的TNF-α含量顯著比模型組高(p0.05或p0.01),IL-6水平明顯比模型組高(p0.01)。4、各給藥組的瘤組織中MDA含量與模型組相比顯著降低(p0.01或p0.05);SOD活力比模型組顯著增高(p0.05或p0.01)。5、免疫組化結(jié)果顯示:相比模型組,CTX組和CEP高、中劑量組均能明顯提高瘤組織中的Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白的表達(dá)(p0.01),且能能明顯降低Bcl-2蛋白在瘤組織中的表達(dá)(p0.05或p0.01),并且存在劑量依賴型關(guān)系;CTX組的p53蛋白表達(dá)量較模型組有顯著的提高(p0.01),CEP各給藥組與模型組相比均沒有明顯差異(p0.05)。6、RT-PCR結(jié)果顯示:CTX組和CEP高、中劑量組的Caspase-3基因、Caspase-9、Bax基因的表達(dá)較模型組均有明顯上調(diào)(p0.05或p0.01),并且對(duì)Bcl-2、VEGF的表達(dá)具有明顯下調(diào)的作用(p0.05或p0.01)。低劑量組p53、VEGF基因的表達(dá)量較模型組有明顯的下調(diào)(p0.05或p0.01)。7、CEP低劑量組對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)、遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)、單核-巨噬細(xì)胞功能、血清溶血素水平和細(xì)胞因子的作用無明顯影響;中劑量組對(duì)小鼠的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)和血清溶血素水平有明顯影響(p0.01或p0.05);高劑量組對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)、遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)、單核-巨噬細(xì)胞功能、血清溶血素水平均有顯著影響(p0.05或p0.01),也可以顯著提高免疫低下小鼠的IgG、IL-2水平(p0.05或p0.01)。結(jié)論:CEP能抑制NCI-H460細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長,其機(jī)制可能與清除自由基、提高TNF-α和IL-6的分泌、并通過上調(diào)Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因的表達(dá),下調(diào)Bcl-2和VEGF的表達(dá)來誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。CEP具有提高免疫低下小鼠免疫力的作用,其抗腫瘤作用可能與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和提高機(jī)體免疫功能有關(guān)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

復(fù)方淫羊藿制劑對(duì) NCI-H460 細(xì)胞裸鼠移植瘤的抑制作用和對(duì)免瘤模型建立的情況右后肢皮下部位，即接種 NCI-H460 細(xì)胞懸液的在第 4 天后看到結(jié)節(jié)狀。在第 10 天時(shí)，用游標(biāo)，通過腫瘤體積計(jì)算公式： V=ab2/2（a 為長只裸小鼠的瘤體積約為 90-120 mm3左右，成瘤鼠的觀察情況各組裸鼠狀態(tài)正常。給藥后，與模型組相比，行為活動(dòng)均無明顯異常，瘤體生長相對(duì)緩慢。模型組小。裸鼠生長及瘤體情況見圖 1-1。

4.8 151.67±170.39 1566.06±897.180.75±02.4 109.03±63.13 1663.37±803.99 0.86±0模型組比較，*p < 0.05，**p < 0.01。Note:*p < 0.05 or**p 表 1-5 CEP 對(duì)裸鼠體重的影響（ x ± s，n = 5）Tab.1-5 Effects of CEP upon weight of nude mice（ x ± s， 劑量（g/kg）體重（g）給藥前 給組 — 22.55±0.92 23.3組 — 21.35±1.05 20.76 組 0.025 21.39±1.18 19.88組 9.6 20.39±1.26#19.28組 4.8 21.72±1.25 21.3組 2.4 20.14±1.52##19.05模型組比較，*p < 0.05，**p < 0.01；與空白組比較，#p < p < 0.05 or**p < 0.01 vs model group,#p < 0.05 or##p < 0.0

24圖 1-4 CEP 對(duì)裸鼠移植瘤體積的影響Fig.1-4 Effects of CEP on tumor volume in nude mice模型組比較，*p < 0.05，**p < 0.01。Note:*p < 0.05 or**p < 0.0荷瘤裸鼠血清IL-6、TNF-α含量的影響 1-6 得出，與模型組相比，各給藥組荷瘤裸鼠血清，其中除了 CEP 低劑量組的提高不具有顯著差異性均具有顯著差異性（p < 0.01）。各給藥組荷瘤裸鼠血比模型組高（p < 0.05 或 p < 0.01）。 CEP 對(duì)裸鼠血清響分別見圖 1-5 以及圖 1-6。

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1 沈璽;楊路;;重視免疫低下患者眼部病變[J];現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué);2011年12期

2 李麗琴,于維琴;30例免疫低下與肺結(jié)核[J];臨床肺科雜志;2002年03期

3 江志生,江千里;免疫低下患者感染的防治研究近況[J];人民軍醫(yī);1999年10期

4 郭履鋼;免疫力檢測試驗(yàn)的臨床意義與評(píng)價(jià)[J];實(shí)用兒科雜志;1988年02期

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本文編號(hào)：2811135