目的:糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一種代謝疾病,其特點是胰島素分泌絕對不足或者相對不足引起的高血糖癥,中醫(yī)辯證為“消渴癥”。青錢柳葉(Cyclocarya paliurus,CP)具有清熱消腫解毒的功效,近年來其降血糖、降血壓等作用引起了人們的關(guān)注。中醫(yī)辯證消渴癥一般分為陰虛燥熱、陰虛內(nèi)熱、氣陰兩虛和陰陽兩虛四種類型,其中陰虛內(nèi)熱型是最常見的一種。本論文通過高脂飼料+甲狀腺素(Thyroxin,T4)+多次小劑量注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立陰虛內(nèi)熱型糖尿病大鼠模型,并觀察青錢柳葉水提物治療陰虛內(nèi)熱型糖尿病的作用,初步探討其作用機理。為中藥青錢柳葉用于陰虛內(nèi)熱型糖尿病的治療提供更多的實驗依據(jù)。方法:一、模型制備SD大鼠,給予高脂飼料喂養(yǎng)(正常組給予普通飼料),第3周,除正常組外,每組動物均皮下注射T4 0.2 mg/kg/d,連續(xù)7天。第4周,腹腔注射25 mg/kg STZ溶液;正常組腹腔注射同等體積檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。注射STZ后第3天,動物禁食測空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG),以FBG≥7.8 mmol/L及出現(xiàn)陰虛內(nèi)熱表征作為陰虛內(nèi)熱型糖尿病大鼠模型建立標準。二、分組及給藥將造模動物隨機分為模型組,陽性組(知柏地黃丸組(1.5 g/kg/d)、二甲雙胍組(0.125 g/kg/d)),青錢柳葉水提物高(26.4 mg/kg/d)、中(13.2 mg/kg/d)、低(6.6 mg/kg/d)劑量組。灌胃給藥4周(1天/次)。正常組,模型組給予等體積的蒸餾水。給藥期間,模型組及給藥組繼續(xù)飼以高脂飼料,正常組飼以普通飼料。三、指標檢測(一)陰虛內(nèi)熱癥狀檢測1.表觀指標:每周記錄動物表征,動物行為、背部溫度、眼睛神采、舌顏色、爪色、大便干硬情況。2.對陰虛癥的改善作用:末次給藥后,測血清中三碘甲狀腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)、T4、環(huán)磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,c AMP)、環(huán)磷酸鳥苷(Cyclic guanosine monophosphate,c GMP)水平。3.對免疫功能的影響:末次給藥后,取全血測定淋巴細胞亞群CD3、CD4和CD8水平。(二)糖尿病大鼠一般情況造模成功后,每周測定動物體重、攝食量、飲水量、尿量。(三)對肝功、腎功的影響末次給藥后,測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、AST/ALT、尿素氮(Carbamide)、肌酐(Creatinine,Cre)水平。解剖取肝臟、腎臟,計算肝腎系數(shù);取肝臟組織,HE染色觀察其病理形態(tài)的改變。(四)糖脂代謝檢測1.造模成功后,每周定期測定FBG水平。2.末次給藥后,測定動物口服糖耐量(Oral glucose tolerance test,OGTT)、糖化血紅蛋白水平、取肝臟組織,檢測肝糖原含量。3.末次給藥后,放免診斷試劑盒測血清胰島素(insulin,INS)水平,并計算胰島素敏感指數(shù)(Insulin sensitivity index,ISI)及胰島素抵抗指數(shù)(Homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IRI)。4.末次給藥后,測血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、FFA的含量。(五)對Ins R、IRS-2基因表達的影響Q-PCR測定肝臟組織中胰島素受體(insulin receptor,Ins R)、胰島素受體底物(insulin receptor substrate-2,IRS-2)的基因表達。結(jié)果:一、陰虛內(nèi)熱型糖尿病模型大鼠建立造模后,大鼠出現(xiàn)明顯的陰虛內(nèi)熱表現(xiàn):活動次數(shù)增加、背部溫度增加、舌色鮮紅、爪色青紫、大便干硬、眼睛神采變暗(P0.01或P0.05);大鼠T3及c GMP水平明顯升高,免疫功能異常(淋巴細胞亞群CD3+、CD4+和CD8+水平紊亂)(P0.01或P0.05)。且模型動物體重明顯減輕,攝食量、飲水量和尿量均明顯增加(P0.01或P0.05);空腹血糖明顯升高,口服糖耐量異常,肝糖原明顯降低(P0.01或P0.05);胰島素含量明顯升高,ISI明顯降低,HOMA-IR明顯升高,表現(xiàn)為明顯的胰島素抵抗(P0.05),提示造模成功。二、青錢柳葉水提物對模型大鼠的陰虛癥狀的改善作用(一)陰虛內(nèi)熱表觀指標:與模型組相比,在給藥第四周時,青錢柳葉水提物各劑量組動物背部溫度上升程度、舌色鮮紅比率及爪色青紫程度均有所改善;活動次數(shù)有所減少、眼睛神采好轉(zhuǎn)(P0.01或P0.05)。(二)c AMP、c GMP、T3、T4:給藥各劑量組能明顯降低c AMP的含量(P0.01或P0.05),對c GMP、c AMP/c GMP比值以及T3、T4無明顯影響。(三)免疫功能指標:青錢柳葉水提物低劑量組能顯著性降低CD4+/CD8+的數(shù)值(P0.05或P0.01);CD3+、CD4+、CD8+均無明顯差異。三、青錢柳葉水提物對模型大鼠糖尿病指標改善作用(一)體重、攝食量、飲水量、尿量的變化與模型組動物相比,青錢柳葉水提物能顯著性降低動物攝食量、飲水量、尿量(P0.01或P0.05);對體重無明顯影響。(二)肝、腎功能的影響與模型組相比,青錢柳葉水提物各給藥組均能明顯降低血清中尿素氮的含量(P0.01);中、低劑量組肝臟系數(shù)顯著性增加(P0.01);其余各指標無明顯差異;各給藥組能改善肝臟的病理形態(tài)的損傷。(三)糖脂代謝方面1.給藥第二周起,青錢柳葉高、低劑量組均能顯著降低動物的FBG(P0.01或P0.05)。2.給藥第四周后,高、低劑量組均能顯著降低OGTT。3.青錢柳葉水提物中劑量組能顯著性降低INS含量(P0.05);顯著性增加ISI(P0.05)、降低HOMA-IRI(P0.05)。4.本實驗中青錢柳葉水提物對脂代謝無明顯影響。四、青錢柳葉水提物對模型大鼠肝臟組織Ins R、IRS-2基因表達的影響青錢柳葉各劑量組均能顯著性增加Ins R、IRS-2 m RNA表達水平。結(jié)論:通過高脂飼料+甲狀腺素+STZ的方法,可成功建立陰虛內(nèi)熱型糖尿病大鼠模型;青錢柳葉水提物能改善模型動物的陰虛內(nèi)熱證候、“三多一少”癥狀及肝臟的病理形態(tài)的損傷程度;空腹血糖、口服糖耐量、AUC、胰島素抵抗均有明顯改善,其作用機制可能與增加肝臟內(nèi)Ins R、IRS-2表達有關(guān)。
【學位單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1-1. 糖尿病流行病學（花費及死亡率）Fig1-1. Epidemiology of diabetes（expenditure and number of deaths）二、糖尿病的診斷目前比較廣泛的認識是 WHO 提出的統(tǒng)一診斷標準[35]，即空腹血漿葡萄糖（FPG）

圖 1-2. 胰島素信號轉(zhuǎn)導通路Fig1-2. Insulin signaling pathway）InsR、IRS-2 與 2 型糖尿病nsR 數(shù)目、親和力降低以及基因突變和缺失

圖 2-1 CP 對陰虛內(nèi)熱型糖尿病大鼠免疫功能的影響Fig 2-1 Effects of CP on model rats immune function六、小結(jié)

【參考文獻】

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1 李婷婷;石葉蓉;吳彩娥;方升佐;潘海霞;朱振基;;青錢柳茶的化學成分、農(nóng)殘及揮發(fā)性成分分析[J];食品與機械;2015年04期

2 張翔;喻嶸;曾婧;郝盼盼;曹雯;王琦威;;從“熱”論消渴[J];湖南中醫(yī)藥大學學報;2015年06期

3 鄭南;高麗娟;唐仁康;丁娜娜;劉廣周;謝寧;;古代醫(yī)籍對消渴病的認識[J];吉林中醫(yī)藥;2015年05期

4 吳晏;韓靜;黃黎明;郭淑貞;王偉;;糖尿病模型大鼠表征及其證候動態(tài)演變研究[J];遼寧中醫(yī)雜志;2011年11期

5 劉立文;;中醫(yī)治療糖尿病用藥規(guī)律及效果的分析研究[J];求醫(yī)問藥(下半月);2011年10期

6 劉婷;侯連兵;鐘延松;;因?qū)幤瑢谞钕倨T導的甲亢陰虛型大鼠的影響研究[J];醫(yī)藥導報;2009年11期

7 李威;楊寧輝;崔英;張蒙;;地黃不同炮制品對陰虛模型小鼠血漿cAMP、cGMP影響的實驗研究[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2009年09期

8 謝明勇;謝建華;;青錢柳研究進展[J];食品與生物技術(shù)學報;2008年01期

9 李敬林;王太一;王祿增;董天寶;吳憶;邱樂;郜凌學;;2型糖尿病證病結(jié)合動物模型的研究[J];中國比較醫(yī)學雜志;2007年08期

10 吳童;;消渴病名考證疏義[J];福建中醫(yī)學院學報;2007年02期

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1 栗德林;;從歷代有關(guān)消渴病名的論述談中醫(yī)(內(nèi)科)病名的規(guī)范化[A];中國中醫(yī)藥學會內(nèi)科學會第三屆學術(shù)年會論文集[C];1997年

2 毛竹君;陸灝;;糖尿病中醫(yī)證型的研究進展[A];第十次全國中醫(yī)糖尿病大會論文集[C];2007年

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1 鄒超;健脾補腎法降低Ⅱ、Ⅲ期結(jié)直腸癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的機理研究[D];中國中醫(yī)科學院;2016年

2 倫中恩;糖尿�。ㄏ什。┡R床常見慢性并發(fā)癥的中醫(yī)文獻研究[D];中國中醫(yī)科學院;2010年

3 王劍;從多個陰虛病變模型研究陰虛證機理[D];廣州中醫(yī)藥大學;2006年

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1 汪洋;從痰濕論治老年糖尿病[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2017年

2 趙爽;“頤神調(diào)氣”針刺法治療更年期焦慮癥肝腎陰虛型的研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2017年

3 于飛;基于引文分析法的古代消渴相關(guān)方劑文獻研究[D];首都醫(yī)科大學;2017年

4 王胤康;青錢柳活性成分降血糖作用研究[D];華中科技大學;2016年

5 劉之涌（Liu Chih Yung）;消渴病病因病機研究進展[D];廣州中醫(yī)藥大學;2015年

本文編號：2810643