應(yīng)激是由心理,環(huán)境或生理壓力因素引起的不穩(wěn)定狀態(tài)或干擾體內(nèi)平衡的狀態(tài)。適度“喚醒”交感神經(jīng)系統(tǒng)(sympathetic nerve system,SNS)和丘腦-垂體-腎上腺軸(The hypothalamic pituitary adrenal axis,HPA)釋放化學(xué)介質(zhì)保護(hù)機(jī)體免受傷害。慢性應(yīng)激使HPA持續(xù)處于激活狀態(tài),使得體內(nèi)激素分泌紊亂引發(fā)疾病,如心血管疾病、抑郁、糖尿病、自身免疫性疾病、癌癥等。大麻二酚具有抗炎、抗癌、抗神經(jīng)退行性疾病等藥理活性,有著很好的開發(fā)應(yīng)用前景。Nrf2通路在許多疾病中發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用。本文通過以下方面對大麻二酚的抗應(yīng)激活性進(jìn)行研究。第一部分:大麻二酚抗慢性應(yīng)激致腎損傷的保護(hù)作用研究采用水浸束縛法建立慢性應(yīng)激模型并觀測大麻二酚的抗應(yīng)激效應(yīng)。將30只雌性SD大鼠隨機(jī)分為如下5組:正常對照組、模型組、CBD低劑量(5 mg/kg)、CBD高劑量(10 mg/kg)和溶媒對照組(1%吐溫80生理鹽水)。除了空白對照組外,其余各組動物均通過水浸束縛8小時/天,連續(xù)21天不間斷造模。通過觀察正常對照組與模型組大鼠腎組織HE染色、血清皮質(zhì)酮和腎小球濾過損傷標(biāo)志物胱抑素C(Cys C)水平,成功建立慢性應(yīng)激性腎損傷的大鼠動物模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn),5mg/kg的大麻二酚對慢性應(yīng)激性腎損傷具有較好的保護(hù)作用。大麻二酚給藥組的大鼠血清中Cys C、尿蛋白、丙二醛(MDA)水平降低均比模型組(p0.05)。通過腎臟臟器系數(shù)可以看出大麻二酚對腎臟的毒性小、安全性高。大麻二酚減輕慢性應(yīng)激造成的腎損害與降低血清和組織中的MDA含量、增加腎組織中還原性谷胱甘肽(GSH)含量有關(guān)。第二部分:大麻二酚的體外抗氧化應(yīng)激損傷研究通過MTT法觀察大麻二酚對叔丁基過氧化氫(t-BHP)誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的影響。大麻二酚濃度為5μM以下時,對HMC細(xì)胞活力沒有明顯影響。用t-BHP作造模劑模擬慢性應(yīng)激導(dǎo)致體內(nèi)增加的活性氧。實驗證明大麻二酚可以預(yù)防t-BHP誘導(dǎo)HMC細(xì)胞活力的下降,提示大麻二酚有抗氧化作用。第三部分:大麻二酚抗t-BHP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡機(jī)制研究分析0.63μM、1.25μM、2.50μM不同劑量的大麻二酚對t-BHP致?lián)p的HMC的保護(hù)作用。通過Annexin-FITC/PI雙染實驗、Hoechest33258染色、分光光度法檢測caspase-3活性觀測HMC細(xì)胞凋亡情況,發(fā)現(xiàn)大麻二酚能抑制t-BHP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、降低caspase-3活性,并具有劑量依賴性。大麻二酚能明顯抑制t-BHP誘導(dǎo)的活性氧增加和線粒體膜電位下降(p0.05)。同時通過乳酸脫氫酶(LDH)含量分析,大麻二酚能減少LDH泄漏,保護(hù)細(xì)胞完整性。發(fā)現(xiàn)大麻二酚能提高HMC細(xì)胞GSH含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。通過Western Blot分析發(fā)現(xiàn)大麻二酚下調(diào)BAX和Cleaved-caspase3蛋白的表達(dá)(P0.05)。第四部分:大麻二酚上調(diào)Nrf2抗氧化通路減輕t-BHP誘導(dǎo)的凋亡采用Western Blot檢測抗氧化蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)大麻二酚上調(diào)Nrf2、HO-1、NQO1、SOD和Gpx等蛋白的表達(dá)(P0.05),同時下調(diào)Keap1蛋白的表達(dá)(P0.05)。CBD能夠促進(jìn)Nrf2的核轉(zhuǎn)位而發(fā)揮抗氧化作用,提示CBD可以通過提高抗氧化因子水平而發(fā)揮抗氧化應(yīng)激導(dǎo)致的腎小球系膜細(xì)胞HMC損傷的作用。綜上所述,大麻二酚通過Nrf2通路發(fā)揮抗氧化、抗凋亡活性,為其應(yīng)用于精神、情緒障礙導(dǎo)致的內(nèi)臟損傷的防治提供一定的科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文1.2 大麻與大麻二酚大麻（Cannabis sativa）是桑科大麻屬植物，作為藥物已有千余年歷史。在中國其稱為 “火麻”，其果實稱為 “火麻仁”（Cannabis Fructus）,具有潤腸通便的作用，用于血虛津虧，腸燥便秘[45]。在古印度，大麻被用于治療焦慮、躁狂癥和癔病。在西亞，亞述人吸入大麻減輕抑郁癥癥狀。20 世紀(jì)初，大麻提取物被用作鎮(zhèn)靜催眠藥，由于大麻提取物的有效成分尚未清楚，提取物的組成和效力不同導(dǎo)致許多不良反應(yīng)如焦慮、抑郁、神志混亂、產(chǎn)生幻覺等，到 20 世紀(jì) 30 年代之后，大麻的醫(yī)療作用下降。隨著大麻的濫用，其副作用進(jìn)一步強(qiáng)化。20 世紀(jì)初，美國加利福利亞洲對大麻進(jìn)行管制。20 世紀(jì) 60 年代，大麻的主要成分--Δ9-四氫大麻酚（THC）被分離出來。近 20 年研究大麻的其他成分（如大麻酚、大麻二酚）及藥理活性（抗腫瘤、抗神經(jīng)退行性疾�。┍话l(fā)現(xiàn)，大麻又開始流行起來，甚至“合法化”如烏拉圭、加拿大、荷蘭等國家。

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.4 結(jié)果2.4.1 CBD 對水浸束縛雌性大鼠腎組織形態(tài)學(xué)影響由圖 2-1 看出，正常對照組腎小球結(jié)構(gòu)完好，腎小囊清規(guī)則。模型組與溶劑組腎小球體積明顯增大和細(xì)胞增多，構(gòu)模糊，腎小管上皮細(xì)胞壞死脫落。經(jīng) CBD 干預(yù)后，低腎組織病理結(jié)構(gòu)有明顯改善，腎小管壞死明顯減少。由此模型建立成功，同時 CBD 對應(yīng)激性腎損傷有較明顯的治

d.小心吸棄上層培養(yǎng)基，加入 100μL DMSO，搖床震蕩 20 分鐘，570nm 波長測度。e.細(xì)胞活力（%）=（各給藥組 OD 值-調(diào)零 OD 值）/（正常對照組 OD-調(diào)零 OD×100% 統(tǒng)計分析同方法“2.3.10”果 CBD 給藥范圍的確定由圖 2-1 可知，不同濃度 CBD 孵育 HMC 細(xì)胞 24 小時后，與正常對照組相比BD 濃度為 5μM 以下時，HMC 細(xì)胞活力沒有明顯降低(p>0.05)，當(dāng) CBD 濃度 10μM，HMC 細(xì)胞活力降至 74.50%±1.97（p<0.01）。因此實驗選取 CBD 的給度為: CBD≤5μM。

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本文編號：2810291