研究背景增生性瘢痕(Hypertrophic Scars,HS)是一類特發(fā)于人類的難治性皮膚疾病,由于發(fā)病因素多樣和缺乏理想動物模型,一直是困擾創(chuàng)傷修復(fù)領(lǐng)域的難題。中醫(yī)學(xué)認為HS屬于疽證,治則軟堅散結(jié)、活血化瘀,應(yīng)防治結(jié)合。本課題將生物黏附材料——蝸牛黏液設(shè)計成給藥載體,傳輸中藥牡丹皮活性成分-丹皮酚,以期發(fā)揮協(xié)同抑瘢性能,制備一種新型的納米凝膠制劑,進行安全性、釋藥性能和藥效學(xué)研究,為防治增生性瘢痕提供一種皮膚藥物治療途徑。目的研制蝸牛黏液-丹皮酚復(fù)合凝膠劑,優(yōu)化蝸牛黏液-丹皮酚納米粒的處方和制備工藝,考察其體外透皮性能及真皮滯留效應(yīng),并進行新西蘭兔的皮膚刺激性及抑瘢效果考察,為該制劑進一步研究增生性瘢痕的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。研究方法(1)對蝸牛黏液的成分尿囊素和羥基乙酸進行定量測定,考察其理化性質(zhì)及生物相容性。(2)蝸牛黏液-丹皮酚納米粒的制備及其質(zhì)量考察。以包封率為評價指標(biāo),單因素試驗篩選出顯著因素,采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)選納米粒的制備工藝,透射電鏡觀察納米粒形態(tài),激光粒度儀測定粒徑及Zeta電位。制備蝸牛黏液-丹皮酚復(fù)合凝膠劑。(3)蝸牛黏液-丹皮酚凝膠劑的質(zhì)量考察。考察質(zhì)量性質(zhì),包括外觀性狀、黏度、離心試驗及含量測定;考察真皮滯留量,比較蝸牛黏液-丹皮酚凝膠劑及丹皮酚普通凝膠在三種不同動物離體皮膚中丹皮酚的皮膚滯留量及透皮速率,并繪制體外滲透曲線;考察皮膚刺激性,采用左右對比法觀察皮膚有無紅斑及水腫現(xiàn)象,并對給藥部位的皮膚進行組織切片HE染色觀察成纖維細胞的生長形態(tài)變化。(4)抑瘢性能藥效學(xué)試驗初步考察。建立兔耳增生性瘢痕模型,將新西蘭兔隨機分為模型組、空白組、陽性藥物組、蝸牛黏液凝膠組(HAM-Gels)與蝸牛黏液-丹皮酚復(fù)合凝膠劑組(PAE-HAM-Gels),涂藥28天后計算各組的瘢痕增生率,測量各組瘢痕增生指數(shù)(SEI),光鏡下觀察瘢痕組織塊的HE染色與Masson染色后組織增生情況,酶聯(lián)免疫吸附實驗法(ELISA)檢測各組TGF-β1的表達水平。結(jié)果(1)得到一種蝸牛黏液的定性定量檢測方法,能同時測定有效成分尿囊素和羥基乙酸的含量。本實驗所用蝸牛黏液的生物相容性良好,對SD大鼠無皮膚刺激性。(2)蝸牛黏液-丹皮酚納米粒最優(yōu)制備工藝為:稱取丹皮酚26 mg加入無水乙醇2 m L溶解,超聲混勻,400 r·min-1磁力攪拌30℃下以6.5%V/min的注入速度勻速注入至0.6g蝸牛黏液(5 m L p H7.4PBS緩沖液溶解)中;滴完后繼續(xù)攪拌20 min,揮去乙醇,將得到的溶液用超聲波破碎儀在冰水浴條件下超聲10 min(120 W,超聲2 s,間歇2s),得到納米粒測的包封率值為(81.64±2.44)%,平均粒徑(182.43±16.8)nm,Zeta電位(8.33±0.90)m V。(3)蝸牛黏液-丹皮酚復(fù)合凝膠劑粘度在6.6~7.4 Pa·S之間,p H值在7.0~7.5之間,含量為(3.04±0.08)mg·g~(-1);蝸牛黏液-丹皮酚復(fù)合凝膠劑體外釋藥曲線符合Higuchi方程,皮膚滯留效果顯著。對于新西蘭兔無皮膚刺激性。(4)蝸牛黏液-丹皮酚復(fù)合凝膠劑組的瘢痕增生率為62.50%,低于其他各組;SEI為(2.17±0.33),TGF-β_1為(815.4±34.69)ng·L~(-1),與模型組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與模型組比,蝸牛黏液-丹皮酚復(fù)合凝膠劑組成纖維細胞排列雜亂無序,軟骨細胞排列疏松,較規(guī)則,炎癥細胞較少。結(jié)論本課題建立的質(zhì)量控制方法,符合藥典要求;通過BoxBehnken效應(yīng)面法優(yōu)化丹皮酚納米粒的制備工藝,處方工藝合理可行;蝸牛黏液-丹皮酚凝膠劑具有緩釋作用,真皮滯留量較顯著;蝸牛黏液-丹皮酚復(fù)合凝膠劑安全性高,無皮膚刺激性,對兔耳增生性瘢痕有一定的治療效果,具有良好的應(yīng)用前景。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R283.6;R285
【部分圖文】：

液中含有一種 achasin 活性化合物，作為一種受體，與細菌酶結(jié)合干擾酶活性以防止細菌分裂，可抑制細菌的形成[50]。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，在傷口愈合過程中，蝸牛黏液可抑制炎癥反應(yīng)，加速創(chuàng)口處的修復(fù)，因此蝸牛黏液在皮膚修復(fù)領(lǐng)域正得到應(yīng)用，并有潛力成為一種置于傷口的生物制劑[51]。1.5 課題研究的意義和創(chuàng)新點對于 HS 應(yīng)防治結(jié)合，在創(chuàng)口愈合早期采取措施，抑制 HS 形成。成纖維細胞增殖主要發(fā)生在真皮層部位，因此抑瘢性能發(fā)揮的關(guān)鍵在于真皮層滯留藥物濃度大小。本課題根據(jù)蝸牛黏液的良好生物相容性和生物載體特性，包載抑瘢藥物丹皮酚，制備的蝸牛黏液-丹皮酚納米粒及其凝膠劑型，使得蝸牛黏液附于皮膚外表以促進傷口愈合，丹皮酚可進入受損皮膚真皮層，進而抑制增生性瘢痕的形成�？茖W(xué)假說見圖 1。通過制備蝸牛黏液-丹皮酚凝膠（PAE - HAM - Gels），考察其應(yīng)用的安全性和穩(wěn)定性，進一步通過藥效學(xué)試驗驗證其抑制 HS 的作用。

2-1 空白對照品(A)、混合對照品（B）和供試品溶液（C）的 HPL（1.羥基乙酸；2.尿囊素）-1 Chromatograms of the mixed standards（A）and the testing sampl曲線繪制取 2.1.2 項下不同濃度的混合對照品溶液，經(jīng) 0.22 μm 微0μL 注入高效液相色譜儀，測定各色譜峰峰面積，以對照品色譜峰峰面積 A 為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，得出回歸方程表 2-1 羥基乙酸和尿囊素的線性關(guān)系Tab. 2-1 Linearity relationship of Glycolic acid andAllantoin分 回歸方程 r 線性乙酸 A = 17.267ρ + 3.2684 0.9994 0

0.0058 0.0053 0.0108 95.70 0.0111 100.600.0109 96.960.0058 0.0079 0.0138 101.27 0.0136 99.050.0135 98.09檢測限測定取 20.6 mg·mL-1羥基乙酸對照品溶液和 5.7 mg· 至 10 mL 容量瓶中，用 1 mg/mL 的磷酸鹽緩沖液g·mL-1羥基乙酸對照品溶液和 0.57 mg·mL-1尿囊述對照品溶液 1 mL 至 10 mL 容量瓶中，得 0.206 0.057mg·mL-1尿囊素對照品溶液，測試色譜圖 3.206 mg·mL-1，尿囊素對照品定量限為 0.057mg1A

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本文編號：2807909