【摘要】：近二十年來,人參皂苷在癌癥治療中的應(yīng)用吸引了國內(nèi)外研究學(xué)者們的強烈關(guān)注和廣泛研究。人參皂苷是人參、三七和西洋參等人參屬植物的主要活性成分。人參皂苷Rh4,是從人參、三七和西洋參等植物的根、葉中經(jīng)過高溫蒸煮、酶轉(zhuǎn)化等方法提取得到的稀有人參皂苷。相比總皂苷,人參皂苷Rh4具有更好的水溶性,從藥劑學(xué)角度考慮,該藥物更容易被開發(fā)應(yīng)用。然而,由于其在人參屬植物中的含量甚少以及提取制備的復(fù)雜性,人參皂苷Rh4的抗腫瘤作用研究的很少,尤其是結(jié)腸癌。在這里,我們研究人參皂苷Rh4對結(jié)腸癌細(xì)胞的抗增殖作用及其可能的機制。1.在體外抗腫瘤作用研究中,通過CCK-8細(xì)胞毒性實驗研究了人參皂苷Rh4對結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2和HCT-116以及正常結(jié)腸上皮細(xì)胞CCD-18Co的抑制作用,并觀察了人參皂苷Rh4對Caco-2,HCT-116和CCD-18Co細(xì)胞克隆形成能力的影響。在體內(nèi)抗腫瘤作用研究中,通過建立結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞異種移植瘤模型,腹腔注射給藥,檢測荷瘤裸鼠的體重、腫瘤體積,分析腎臟、肝臟、心和肺組織病理等相關(guān)指標(biāo),考察了人參皂苷Rh4對該腫瘤模型的體內(nèi)抑制作用。體內(nèi)外實驗結(jié)果表明,人參皂苷Rh4能顯著抑制結(jié)腸癌的生長并呈現(xiàn)低毒性的特點,對其進一步研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh4能夠抑制Caco-2和HCT-116細(xì)胞的克隆形成,但對CCD-18Co細(xì)胞幾乎沒有影響。2.通過細(xì)胞周期分析、Hoechst 33342染色、透射電鏡分析、Annexin V/PI染色、蛋白印跡及免疫組化分析考察了人參皂苷Rh4對Caco-2和HCT-116結(jié)腸癌細(xì)胞周期捕獲、凋亡和自噬的誘導(dǎo)作用。結(jié)果表明,人參皂苷Rh4能夠?qū)aco-2和HCT-116細(xì)胞周期阻斷于G0/G1期并誘導(dǎo)依賴Caspase途徑的細(xì)胞凋亡和自噬性細(xì)胞死亡。進一步研究表明,Caspase廣譜抑制劑Z-VAD-FMK阻斷細(xì)胞死亡的程度大于自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA),因此,在人參皂苷Rh4誘導(dǎo)細(xì)胞死亡過程中,凋亡比自噬發(fā)揮了更主要的作用。3.通過DCFH-DA染色、蛋白印跡及免疫組化分析考察了人參皂苷Rh4對活性氧(ROS)和MAPK-p53信號通路的影響。實驗結(jié)果表明,人參皂苷Rh4增加了細(xì)胞內(nèi)ROS水平同時激活了JNK-p53信號通路。對其進一步研究發(fā)現(xiàn),活性氧清除劑,JNK和p53抑制劑都可以減弱人參皂苷Rh4誘導(dǎo)的凋亡和自噬。綜上所述,本研究首次闡明了人參皂苷Rh4誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡和自噬通過激活ROS/JNK/p53信號通路,為人參皂苷Rh4成為一種潛在的抗腫瘤藥物及開發(fā)應(yīng)用提供了基礎(chǔ)實驗依據(jù)和參考。
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285
【圖文】：

圖 1.1 20(S)-和 20(R)-原人參二醇型人參皂苷Fig 1.1 20(S)- and 20(R)-protopanaxadiol ginsenosides

圖 1.2 20(S)-和 20(R)-原人參三醇型人參皂苷Fig 1.2 20(S)- and 20(R)-protopanaxatriol ginsenosides

人參皂苷Rh4的化學(xué)分子結(jié)構(gòu)

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 房智慧;馬會芳;張凱;張偉杰;王留興;;貝伐單抗聯(lián)合XELOX方案治療晚期結(jié)直腸癌的臨床觀察[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2013年23期

2 ;Ginsenoside Rg_3 inhibit hepatocellular carcinoma growth via intrinsic apoptotic pathway[J];World Journal of Gastroenterology;2011年31期

3 ;Two new acetylated ginsenosides from the roots of Panax quinquefolium[J];Chinese Chemical Letters;2008年09期

4 邱輝忠;林國樂;;開普拓在直腸癌新輔助治療中的應(yīng)用[J];中華腫瘤雜志;2006年08期

5 姚智東,吳洪斌;奧沙利鉑的安全性評價[J];中國新藥雜志;2003年07期

6 陳燕萍,孟勤,宋長春,馬興元,王廣樹,徐景達;20(S)-原人參二醇組皂苷的制備及其轉(zhuǎn)化制取人參皂苷Rh2[J];中國藥學(xué)雜志;1997年05期

本文編號：2805915