【摘要】：目的虎眼萬年青是一種天然中草藥植物,其多種化學(xué)成分已被證實(shí)具有強(qiáng)效抗癌活性,探討虎眼萬年青鱗莖及葉醇提物對人非小細(xì)胞肺癌H1299細(xì)胞增殖抑制、凋亡作用及機(jī)制。方法應(yīng)用MTT法測定不同濃度、不同時間段虎眼萬年青鱗莖及葉醇提物對人肺腺癌H1299細(xì)胞株的增殖抑制作用;倒置顯微鏡觀察肺癌H1299細(xì)胞形態(tài)變化,熒光顯微鏡觀察H1299細(xì)胞凋亡變化;流式細(xì)胞術(shù)觀察虎眼萬年青醇提物對H1299細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用;Western Blot檢測經(jīng)虎眼萬年青醇提物處理后H1299細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2、Bax、Bad蛋白)的表達(dá)情況;實(shí)時熒光定量法(RT-PCR)檢測經(jīng)虎眼萬年青醇提物處理后H1299細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(Bcl-2、Bax、Bad)的表達(dá)情況。結(jié)果MTT結(jié)果顯示,虎眼萬年青鱗莖及葉醇提物作用于人肺腺癌H1299細(xì)胞后,48h及72h濃度為0.5、1、2、5、10mg/mL時細(xì)胞活性與空白對照組相比明顯降低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05、P0.01);溶媒組(DMSO0.1%)與空白對照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。倒置顯微鏡顯示加藥組細(xì)胞生長明顯受抑制,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變;熒光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)顯示,虎眼萬年青鱗莖及葉醇提物正丁醇相可促進(jìn)H1299細(xì)胞凋亡;Western Blot結(jié)果顯示經(jīng)虎眼萬年青醇提物處理后H1299細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)下降、Bax蛋白無明顯變化、Bad蛋白表達(dá)升高,Bax/Bcl-2比值升高;實(shí)時熒光定量法(RT-PCR)檢測結(jié)果顯示經(jīng)虎眼萬年青處理后H1299細(xì)胞中Bcl-2 mRNA表達(dá)下降、Bax mRNA無明顯變化、Bad mRNA表達(dá)升高,Bax/Bcl-2比值升高。結(jié)論1.體外實(shí)驗(yàn)表明,虎眼萬年青葉及鱗莖醇提物均可抑制人非小細(xì)胞肺癌H1299細(xì)胞增殖及促進(jìn)凋亡,且具有濃度依賴性;2.Bcl-2家族部分基因及蛋白共同參與虎眼萬年青葉及鱗莖醇提物誘導(dǎo)H1299細(xì)胞凋亡的過程。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285
【圖文】：

延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)碩士學(xué)泣論文邐材料與方法逡逑５）向各孔加入２００｜ｉＬ混合好的ＢＣＡ工作液，并在３７°Ｃ水浴箱中靜置逡逑２８ｍｉｎ；逡逑６）用酶標(biāo)儀在波長５６２ｎｍ下讀取各孔的光密度（０Ｄ）值；逡逑７）制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖２－６－１，并將待測樣品的光密度值代入公式計(jì)逡逑算樣品的蛋白濃度；逡逑８）加入ＰＢＳ，將待測樣品稀釋至相同濃度；逡逑９）向上述蛋白樣品中加入１／４樣品體積的５ｘ邋ｌｏａｄｉｎｇ邋ｂｕｆｆｅｒ邋（ＰＨ６．８），逡逑混勻，１００°Ｃ，煮沸６ｍｉｎ，并放入－２０°Ｃ冰箱中備用。逡逑

為０．５ｍｇ／ｎｉＬ、ｌｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。由此可見加藥組對逡逑Ｈ１２９９肺癌細(xì)胞的增殖抑制作用，且具有明顯的量效關(guān)系，結(jié)果見圖３、逡逑圖４。逡逑９０邋Ｔ邋｜邋—邋２４ｈ｜邐邐邐逡逑蹋桑″義希板澹模齲櫻襄危埃玻靛澹埃靛澹卞危插澹靛危保板義希常板聞ǘ儒澹祝恚蹋╁義賢跡沖澹埃靡洞嘉鋃苑偉齲保玻梗瓜赴翟鮒車撓跋戾義希徨澹蹋

本文編號：2805662