【摘要】：向日葵(Helianthus annuus L.)別名葵花,據(jù)文獻(xiàn)記載向日葵的莖、葉、籽、盤、根均有較高的藥用價(jià)值。特別是,向日葵莖芯的水提液在臨床上有抗腫瘤的作用。在尋找向日葵莖芯中具有抗腫瘤活性的物質(zhì)過(guò)程中,多糖被篩選了出來(lái)。本文首次對(duì)其抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用機(jī)制進(jìn)行了研究,并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步解析。主要研究結(jié)果如下:1.采用水提醇沉法對(duì)向日葵莖芯多糖進(jìn)行了提取,利用單因素實(shí)驗(yàn)得到最佳提取條件為:浸提次數(shù)為2次,原料顆粒的大小(目數(shù))為60~80目,料液比為1:50,浸提時(shí)間為3.0 h,浸提溫度為90 ~oC,在該條件下,向日葵莖芯多糖的提取得率為6.56%,多糖的含量為266.03 mg/g。2.提取所得粗多糖利用Sevag法除去蛋白、活性炭法除去色素后,利用DEAE纖維素DE-52離子交換柱層析法進(jìn)行分離純化,得到四個(gè)多糖組分分別為HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3和HALWP-4,其得率分別為3.03%、4.19%、1.82%和0.96%。經(jīng)紫外光譜全波長(zhǎng)掃描分析顯示HALWP-1、HALWP-2和HALWP-3幾乎不含有核酸和蛋白質(zhì),HALWP-4可能含有少量蛋白或有蛋白結(jié)構(gòu),可能為糖蛋白或氨基糖。經(jīng)紅外光譜檢測(cè)顯示這四種組分均有多糖的特征性基團(tuán),推測(cè)有O-H、C-H、C=O、C-O和糖醛酸,推測(cè)這四種多糖組分可能為β-構(gòu)型的吡喃糖。經(jīng)高效凝膠排阻色譜檢測(cè),HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3和HALWP-4的平均分子量分別為3.82×10~5,2.98×10~5,3.36×10~5,4.72×10~5 Da。3.采用MTT法研究向日葵莖芯多糖的體外抗腫瘤活性:向日葵莖芯多糖對(duì)人類胃癌細(xì)胞SGC-7901的IC_(50)值為4.201±0.083 mg/mL;對(duì)人類結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8的IC_(50)值為5.843±0.069 mg/m L;對(duì)人類口腔上皮癌細(xì)胞KB的IC_(50)值為3.016±0.078 mg/mL,這些數(shù)據(jù)表明向日葵莖芯多糖體外抗腫瘤活性較弱,不足以解釋其臨床上較強(qiáng)的抗腫瘤活性。4.采用昆明小鼠建立S180原位腫瘤模型對(duì)向日葵莖芯多糖的體內(nèi)抗原位腫瘤活性進(jìn)行研究,研究結(jié)果表明空白組(生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺:25 mg/kg)和多糖給藥組(向日葵莖芯多糖:250 mg/kg)小鼠的平均體重分別為36.17±1.26 g、33.42±1.33 g和35.06±1.19 g;陽(yáng)性對(duì)照組的抑瘤率為63.73%,多糖給藥組的抑瘤率為51.16%;三組的平均生存時(shí)間分別為49.58 d、54.0 d和57.83 d,表明向日葵莖芯多糖的毒副作用較小,能夠明顯延長(zhǎng)小鼠的生存時(shí)間,具有較強(qiáng)的抗S180腫瘤的活性。5.采用C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌腫瘤轉(zhuǎn)移模型,對(duì)向日葵莖芯多糖及其不同組分的體內(nèi)抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性進(jìn)行研究。研究結(jié)果表明,空白組(生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺:25 mg/kg)、向日葵莖芯多糖及其各組分(HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3、HALWP-4)給藥組(給藥劑量均為250 mg/kg)小鼠的平均體重依次為22.57±1.08 g、20.94±1.22 g、21.32±1.36 g、21.78±2.02 g、21.12±1.85 g、21.67±0.98 g、22.23±1.34 g;抑瘤率分別為61.32%、52.17%、48.45%、45.12%、56.86%、58.61%;各組平均生存時(shí)間分別為38.7 d、40.8 d、47.3 d、43.1 d、46.2 d、47.7 d、50.5d,表明向日葵莖芯多糖及其各組分的抗腫瘤效果與臨床藥物環(huán)磷酰胺較為相似,且毒副作用較小,能夠明顯延長(zhǎng)C57BL/6小鼠的生存時(shí)間,具有較強(qiáng)的抗Lewis肺癌腫瘤轉(zhuǎn)移的活性。6.采用C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌腫瘤轉(zhuǎn)移模型,對(duì)向日葵莖芯多糖及其組分的免疫增強(qiáng)活性進(jìn)行研究。研究結(jié)果表明,空白組(生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺組:25 mg/kg)、向日葵莖芯多糖及其各組分(HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3、HALWP-4)給藥組(給藥劑量均為250 mg/kg)小鼠的脾指數(shù)分別為6.53±0.52 mg/g、6.07±0.49 mg/g、7.08±0.38 mg/g、6.91±0.56 mg/g、7.04±0.67 mg/g、7.13±0.52mg/g、7.33±0.43 mg/g;胸腺指數(shù)分別為1.28±0.33 mg/g、1.19±0.29 mg/g、1.42±0.42 mg/g、1.39±0.37 mg/g、1.35±0.42 mg/g、1.46±0.38 mg/g、1.52±0.42 mg/g。以上數(shù)據(jù)表明向日葵莖芯多糖及其不同組分能夠刺激宿主免疫系統(tǒng),通過(guò)促進(jìn)脾和胸腺細(xì)胞的增殖來(lái)提高宿主免疫功能,進(jìn)而達(dá)到抗腫瘤的作用。7.采用ELISA試劑盒檢測(cè)向日葵莖芯多糖及其不同組分對(duì)巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子α(TNF-α)的量的影響。研究結(jié)果顯示空白組、向日葵莖芯多糖及其不同組分(HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3、HALWP-4)給藥組(50μg/m L)處理后的RAW264.7巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的量依次為179.26±10.52 pg/mL、166.70±9.78pg/m L、170.79±10.36 pg/mL、175.06±10.56 pg/mL、173.51±9.33 pg/mL、168.24±9.82 pg/mL;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明Lewis肺癌荷瘤C57BL/6小鼠血清中TNF-α的量依次為163.23±8.26 pg/m L、149.53±9.12 pg/m L、143.18±8.52 pg/mL、148.08±9.23 pg/m L、155.94±8.97 pg/mL、148.25±7.98 pg/mL。以上研究結(jié)果表明向日葵莖芯多糖及其不同組分均能不同程度抑制巨噬細(xì)胞釋放TNF-α。其抗腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制可能是向日葵莖芯多糖及其不同組分能夠與腫瘤細(xì)胞釋放的多功能糖蛋白競(jìng)爭(zhēng)和巨噬細(xì)胞的TLR2受體結(jié)合,從而干擾了巨噬細(xì)胞釋放TNF-α,進(jìn)而抑制了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。以上研究結(jié)果為向日葵莖芯開發(fā)為低毒的抗腫瘤藥物奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.2
【圖文】：

圖 2-1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 2-1 Standard curve of polysaccharide提取條件的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果莖芯多糖含量的影響

圖 2-2 浸提次數(shù)對(duì)向日葵莖芯多糖含量的影響igure 2-2 Effect of number of times on Polysaccharide extraction ra大�。繑�(shù)）對(duì)向日葵莖芯多糖含量的影響 2-3。由圖 2-3 可知，隨著目數(shù)的增加，向日葵莖芯多

圖 2-3 原料顆粒的大小對(duì)向日葵莖芯多糖含量的影響Figure 2-3 Effect of mesh number on Polysaccharide extraction rate日葵莖芯多含量的影響 2-4。由圖 2-4 可知，當(dāng)料液比低于 1:50 時(shí)，多糖的含

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本文編號(hào)：2799747