【摘要】：本論文以仙茅(Curculigo Orchioides Gaertn)為研究對象,對其多糖進行提取、分離純化、一級結構鑒定、高級結構研究及體內(nèi)抗骨質疏松活性的研究。首先采用熱水和堿水將仙茅中的水溶性多糖和堿溶性多糖分別進行提取,水提多糖采用分級醇沉法,所得多糖和堿提醇沉多糖分別進行Sevag法脫蛋白、透析和凍干處理得到四個不同部位的仙茅粗多糖CO50、CO70、CO90和COB。將溶解性較好、糖含量較高且體內(nèi)抗骨質疏松活性最好的兩個部位CO70和CO90分別進行DEAE-Cellulose 52陰離子交換柱層析分離,將分離所得主峰樣品用Sephadex G-75凝膠柱進一步純化,得到三個多糖COP70-1、COP70-3和COP90-1。經(jīng)高效凝膠滲透色譜法驗證COP70-1、COP70-3和COP90-1為均一多糖,分子量分別為100647 Da、53399 Da和4609 Da。紫外可見光譜掃描表明COP70-1、COP70-3和COP90-1中均不含有核酸和蛋白質。采用完全酸水解-柱前PMP衍生化-HPLC分析和離子色譜分析其單糖組成,通過標準品對比確定其單糖D/L絕對構型、結合完全甲基化-GC-MS分析和核磁共振分析得到三種均一多糖的一級結構特征,結果表明COP70-3是由7種單糖組成的復雜多糖,包括(1→5)連接α-L-Araf、(1,3→5)連接α-L-Araf、(1,2→5)連接α-L-Araf、末端α-L-Araf、(1→3)連接β-L-Rhap、(1→4)連接β-D-Manp、(1,3→6)連接β-D-Manp、(1→6)連接β-D-Galp、(1,3→6)連接β-D-Galp、(1→3)連接β-D-GalpA、(1→6)連接α-D-Glcp、(1→3)連接α-D-GalpA、末端α-D-GlcpA 13種連接殘基。COP70-1和COP90-1都是由葡萄糖和甘露糖兩種單糖組成,其中COP70-1由(1→4)連接3-O-acetyl-β-DManp、(1→4)連接β-D-Glcp、(1,3→6)連接β-D-Manp和α-D-Glcp組成,COP90-1由(1→4)連接β-D-Manp、(1→4)連接3-O-acetyl-β-D-Manp、(1→4)連接β-DGlcp、(1,3→6)連接β-D-Manp、末端β-D-Manp和α-D-Glcp組成。采用剛果紅實驗、圓二色譜、掃描電鏡和原子力顯微鏡對均一多糖的高級結構進行初步研究,剛果紅實驗和圓二色譜分析表明COP70-3和COP90-1中均不含有三股螺旋結構,掃描電鏡結果表明COP70-1為分布較為均勻的球形顆粒,COP70-3為分布不均的片狀結構,COP90-1為均勻的橢球形。這三個均一多糖均未見文獻報道。本論文采用去卵巢手術建立大鼠原發(fā)性骨質疏松模型,考察仙茅多糖CO50、CO70、CO90和COB的抗骨質疏松活性。體重及各臟器系數(shù)檢測結果表明仙茅多糖能有效抑制雌性大鼠切除卵巢導致的體重增加趨勢;多糖CO70和CO90對去卵巢大鼠的子宮萎縮情況有一定的改善作用;多糖CO50、CO70、CO90、COB能在一定程度上緩解卵巢摘除對大鼠臟器的影響,結果同時說明仙茅多糖在長期給藥的情況下并未對大鼠產(chǎn)生毒副作用。骨密度及骨量檢測結果表明各部位仙茅多糖均能增加去卵巢大鼠股骨和腰椎骨的骨密度、骨礦物量,其中CO70和CO90的改善效果更好;Elisa檢測結果表明仙茅多糖能夠抑制去卵巢大鼠體內(nèi)的骨吸收和骨形成,調(diào)節(jié)血清和尿液中骨代謝生化指標,調(diào)節(jié)骨代謝趨于正常,其中CO50的效果最為顯著;三點彎曲實驗和壓縮實驗結果表明仙茅多糖顯著改善股骨和腰椎骨的生物力學性能,增加骨強度和骨韌性,降低骨折風險,各給藥組的股骨韌度均恢復到了正常范圍,其中CO70和CO90的效果與陽性藥相當;Micro-CT掃描及三維重建結果表明仙茅多糖顯著修復股骨和腰椎骨骨小梁微觀結構,增加骨小梁數(shù)量、骨小梁厚度,降低骨小梁分離度,改善結構模型指數(shù),逆轉模型大鼠骨微結構的退變,其中CO70和CO90的效果優(yōu)于雌二醇。綜合上述結果,四個仙茅多糖均具有治療去卵巢模型大鼠骨質疏松癥的作用,且CO70和CO90的效果最為顯著。
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285.5
【圖文】：

棍合單糖標準品的PMP柱前衍生化產(chǎn)物HPLC分析圖譜

CO50的PMP柱前衍生化產(chǎn)物HPLC分析圖譜

090的PMP柱前衍生化產(chǎn)物HPLC分析圖譜

【參考文獻】

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3 易曉敏;唐雪娟;王娟;;香蕉低聚糖的微波、超高壓法提取與柱層析分離純化[J];中國食品學報;2016年09期

4 陳陽;楊娟;;響應面法優(yōu)化仙茅多糖的酶解工藝及其抗氧化活性研究[J];食品科技;2016年09期

5 曾婷;彭梅;楊娟;;仙茅多糖的分離純化及結構分析[J];中國實驗方劑學雜志;2016年16期

6 汪荔;王征;張嬌;唐志書;孫曉春;宋忠興;黃文靜;劉力;;傳統(tǒng)工藝與膜分離技術聯(lián)合對馬齒莧多糖的提取分離與抗氧化活性研究[J];中草藥;2016年10期

7 黃菲;張瑞芬;劉慧娟;董麗紅;賴婷;張名位;;荔枝多糖級分的溶液性質研究[J];食品安全質量檢測學報;2015年05期

8 徐航;朱銳;劉瑋;高向東;;多糖高級結構解析方法的研究進展[J];藥學進展;2015年05期

9 陳冠;張巖;馮文茹;王文彤;陶遵威;;苦豆子多糖溶液構象的研究[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2015年03期

10 蒲忠慧;杜永華;魏琴;尹禮國;高炯;;仙茅多糖對離體蛙心生理功能的影響[J];綿陽師范學院學報;2015年02期

本文編號：2795767