【摘要】：當歸是臨床常用中藥材,是大宗出口中藥品種,但其在實際生產(chǎn)中存在嚴重的抽薹問題,而當歸直播技術(shù)成為解決此問題的重要途徑之一。有關(guān)直播當歸質(zhì)量的相關(guān)研究幾乎為零,更未對直播與移栽當歸的品質(zhì)做深入的比較研究。因此,本文從當歸的產(chǎn)量、外觀性狀、化學(xué)成分及藥理作用方面對直播與移栽當歸的質(zhì)量進行比較研究,主要從以下幾個方面展開研究:一、直播與移栽當歸的產(chǎn)量及外觀性狀的比較研究采用常規(guī)方法稱得當歸鮮重,結(jié)果表明:直播當歸藥材產(chǎn)量為1576.5 kg/畝,移栽當歸藥材為679.78 kg/畝,直播當歸的畝產(chǎn)量較移栽當歸增加896.72 kg/畝,增加幅度達2倍。直播與移栽當歸的外觀都略呈圓柱形,且下部有支根,外表面都具縱皺紋和橫長皮孔樣的突起,香氣濃郁,味甘、辛、微苦。總體上,直播與移栽當歸藥材的外觀性狀差異較小,直播當歸藥材的個頭較移栽當歸小,單株重量也有所降低,可能是由于直播當歸生長年限較短(一年生)的原因,但由于單位種植面積上有足夠的株數(shù),故能保證直播當歸的畝產(chǎn)量,甚至較移栽當歸高,直播當歸雖主根較短,但側(cè)根數(shù)少,較為符合當歸“直根系植物”的特點。二、直播與移栽當歸中藥典指標成分及其他成分的比較研究按2015版中國藥典規(guī)定的方法測定直播與移栽當歸中總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物及揮發(fā)油的含量,采用70%甲醇水超聲提取,并采用HPLC法測定阿魏酸的含量。結(jié)果:直播當歸總灰分含量在4.39%~5.06%之間,平均含量4.85%;酸不溶性灰分含量在0.42%~0.56%之間,平均含量0.48%;醇溶性浸出物含量在62.90%~64.80%之間,平均含量為63.93%;揮發(fā)油含量在0.53%~0.65%之間,平均含量0.57%;阿魏酸的平均含量為0.54 mg/g;移栽當歸總灰分含量在5.32%~5.46%之間,平均含量5.40%,酸不溶性灰分含量在0.58%~0.67%之間,平均含量為0.62%,醇溶性浸出物含量在59.66%~60.94%之間,平均含量60.41%;揮發(fā)油含量在0.43%~0.46%之間,平均含量0.44%;阿魏酸的平均含量為1.34 mg/g,均符合藥典要求,除阿魏酸,直播當歸的其他指標均優(yōu)于移栽當歸。同阿魏酸的測定方法一樣,采用HPLC法測定當歸中的Z-藁本內(nèi)酯、正丁基苯酞及正丁烯基苯酞的含量;并采用0.1 mol/L鹽酸提取當歸中的氨基酸,經(jīng)異硫氰酸苯酯衍生后,HPLC法檢測氨基酸的含量;然后采用紫外可見分光光度計測定直播與移栽當歸中多糖的含量,采用GC-MS檢測當歸揮發(fā)油中的化學(xué)成分,結(jié)合NIST庫和保留指數(shù)定性定量。結(jié)果:(1)直播當歸中Z-藁本內(nèi)酯、正丁基苯酞及正丁烯基苯酞的平均含量分別為22.12 mg/g,0.2791 mg/g,0.0275 mg/g,移栽當歸中相應(yīng)成分的平均含量分別為17.53mg/g,0.2869 mg/g,0.0248 mg/g。除正丁基苯酞,其他2種成分的含量在直播當歸中較高。(2)除甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸及異亮氨酸的含量在直播當歸較高,其他已檢測到的11種氨基酸的含量均較移栽當歸低。(3)直播當歸中多糖的平均含量為0.466 mg/mL,而移栽當歸中的含量為0.376 mg/mL,較直播當歸低。(4)直播當歸揮發(fā)油中正丁烯基苯酞的相對含量為5.93%,較移栽當歸(相對含量為4.31%)高出1.62%,Z-藁本內(nèi)酯的相對含量為72.38%,較移栽當歸(相對含量為60.95%)高出11.43%,而其他成分如(1S)-(-)-α-蒎稀、β-蒎稀、β-羅勒稀、(E)-β-法呢烯、6-十一酮等的相對含量則較低。因此,正丁烯基苯酞和Z-藁本內(nèi)酯可能是影響直播當歸與移栽當歸揮發(fā)油質(zhì)量差異的主要原因。三、直播與移栽當歸質(zhì)量綜合評價比較采用熵權(quán)TOPSIS法綜合評價直播與移栽當歸藥材的質(zhì)量,結(jié)果表明:移栽當歸排前5名,直播當歸排后5名。并利用SPSS軟件分析直播與移栽當歸中各指標成分的差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn),直播與移栽當歸中浸出物、揮發(fā)油、阿魏酸及Z-藁本內(nèi)酯的含量呈極顯著差異,總灰分和酸不溶性灰分的含量呈顯著性差異,而多糖、正丁基苯酞及正丁烯基苯酞的含量無顯著性差異。綜上,除阿魏酸及正丁基苯酞外,直播當歸中其他指標成分含量都優(yōu)于移栽當歸(總灰分、酸不溶性灰分含量低于移栽當歸),因此,阿魏酸與正丁基苯酞含量較低是導(dǎo)致直播當歸質(zhì)量排名低的主要原因。四、直播與移栽當歸藥理作用的比較研究通過培養(yǎng)骨髓造血祖細胞CFU-GM和BFU-E集落及脾淋巴細胞,測定當歸水煎液抗DPPH自由基及羥自由基的能力,比較直播與移栽當歸的藥理作用。結(jié)果:直播當歸水煎液可明顯促進環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的小鼠血虛模型骨髓造血祖細胞CFU-GM和BFU-E集落形成,與移栽當歸相比,兩者促進骨髓造血祖細胞CFU-GM與BFU-E集落形成的能力沒有顯著性差異。由環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的免疫缺陷小鼠脾淋巴細胞經(jīng)ConA刺激后,計算脾淋巴細胞增值率,直播當歸組脾淋巴細胞增值率達到34.4%,移栽當歸組脾淋巴細胞增值率達35.7%,直播當歸水煎液對脾淋巴細胞的增值作用較移栽當歸稍低。另外直播當歸水煎液在0.1~3.2 mg/m L濃度范圍內(nèi)對DPPH自由基的清除能力較移栽當歸高,但對羥自由基的清除能力卻較低。
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1;S567.239
【圖文】：

（B）圖 1-1 直播與移栽當歸樣品（A）與混合對照品（B）的 HPLC 圖1.阿魏酸 2.正丁基苯酞 3.Z-藁本內(nèi)酯 4.正丁烯基苯酞.2.4 方法學(xué)考察.2.4.1 線性關(guān)系考察取已配制好的混合對照品溶液 0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，按照“3.2.3”的色譜條件測定各峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標（X），以峰面積為縱坐標（行線性回歸，4 種成分在檢測濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性范圍性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見表 1-5。表 1-5 線性關(guān)系考察結(jié)果指標成分 回歸方程 r 線性范圍（μg）阿魏酸 Y=753.67X+106.94 0.9999 0.021 ~ 1.470

23（B）圖 1-2 直播與移栽當歸樣品（A）與混合對照品（B）的 HPLC 圖.天冬氨酸（Asp） 2.谷氨酸（Glu） 3.絲氨酸（Ser） 4.甘氨酸（Gly） 5.組氨酸（H酸（Arg） 7.蘇氨酸（Thr） 8.丙氨酸（Ala） 9.脯氨酸（Pro） 10.酪氨酸（Tyr） （Val） 12.蛋氨酸（Met） 13.胱氨酸（Cys-Cys） 14.異亮氨酸（Ile） 15.亮氨酸（L16.苯丙氨酸（Phe） 17.賴氨酸（Lys）

培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h，測定前 4 h 加入 5 mg/mL 的 MTT10 μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng) 4 h，小心吸取上清液，加入 DMSO150 μL/孔，避光搖勻10min，在490nm下用酶標儀測定OD值，計算每組脾淋巴細胞增值率，結(jié)果如圖2-1。淋巴細胞增殖率=（ConA的平均OD值-對照組的平均OD值）/對照組的平均值×100%

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本文編號：2793378