【摘要】：目的探討補(bǔ)青顆粒對(duì)紫外線照射所致的大鼠晶狀體氧化應(yīng)激平衡狀態(tài)、對(duì)VEGF-VEGFR2-SRC信號(hào)通路表達(dá)的影響,為補(bǔ)青顆粒用于臨床治療年齡相關(guān)性白內(nèi)障(ARC)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法(1)SPF級(jí)雄性SD大鼠,經(jīng)裂隙燈顯微鏡檢查排除雙眼晶狀體疾病及其他眼部疾病。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為六組:空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、杞菊地黃丸組、補(bǔ)青顆粒高、中、低劑量組,除空白對(duì)照組外,其余各組分別采用中波紫外線照射復(fù)制SD大鼠晶狀體氧化應(yīng)激模型,造模期間同時(shí)給予相應(yīng)水溶液灌胃。陽(yáng)性對(duì)照組選用杞菊地黃丸1g/ml水溶液灌胃;補(bǔ)青顆粒高、中、低劑量組分別給予4g/ml、2g/ml、1g/ml的水溶液灌胃;模型組、空白組均用生理鹽水(10ml/kg)代替藥物灌胃。實(shí)驗(yàn)期間對(duì)大鼠精神狀況、視物情況、二便等一般情況進(jìn)行每日觀察及記錄;對(duì)紫外線照射期間晶狀體的混濁程度進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察。造模成功指標(biāo):裂隙燈下觀察大鼠晶狀體周邊皮質(zhì),可見空泡。(2)灌胃結(jié)束后,選用HE染色法觀察晶狀體上皮細(xì)胞病理學(xué)組織情況;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)血清中SOD、GSH-PX活性變化以及MDA含量改變。取空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、補(bǔ)青顆粒高劑量組各組晶狀體,采用實(shí)時(shí)定量聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)(Real Time-PCR法)檢測(cè)晶狀體上皮細(xì)胞中VEGF、VEGF-R2以及SRC在RNA水平的表達(dá);免疫組織化學(xué)法檢測(cè)晶狀體上皮細(xì)胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的表達(dá)情況;免疫蛋白印跡法(Western Blot法)測(cè)定晶狀體上皮細(xì)胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果(1)紫外線照射前期,各組大鼠無(wú)明顯盲目表現(xiàn),行動(dòng)自如,生長(zhǎng)狀況良好,個(gè)別大鼠精神萎靡不振,偶見鼻衄等現(xiàn)象;后期各組大鼠均有精神不振、眼神迷離、嗜睡,明亮光線下,瞳孔縮小等白內(nèi)障表現(xiàn)。裂隙燈下見空白對(duì)照組晶狀體無(wú)混濁,始終保持透明;紫外線照射第5天,晶狀體混濁不明顯;照射第10天,晶狀體纖維結(jié)構(gòu)紊亂,水腫明顯,大部分晶狀體皮質(zhì)區(qū)見密集中等空泡,屬于Ⅱ期白內(nèi)障;第15天晶狀體混濁程度加深,白內(nèi)障不斷發(fā)展。(2)造模期間,裂隙燈觀察結(jié)果示:在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行開始階段,模型組在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第三天時(shí),Ⅰ期白內(nèi)障發(fā)病率為57%,與空白對(duì)照組相比,差異具有顯著性(P0.05);隨著紫外線照射時(shí)間的延長(zhǎng),模型組SD大鼠處于Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期例數(shù)以及百分比逐漸增高,與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P0.05)。由結(jié)果可知,陽(yáng)性對(duì)照組與補(bǔ)青顆粒各治療組均可以延緩白內(nèi)障發(fā)展,與模型組比較差異顯著(P0.05);補(bǔ)青顆粒高劑量組效果最明顯(P0.05)。(3)HE染色示:空白對(duì)照組晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells,LECs)為單層立方上皮細(xì)胞,鏡下觀察,細(xì)胞形態(tài)整齊規(guī)則,纖維排列緊密;模型組LECs形態(tài)不規(guī)則,染色深淺不一,晶狀體纖維結(jié)構(gòu)紊亂;陽(yáng)性對(duì)照杞菊地黃丸組晶狀體組織損傷減輕,LECs排列較規(guī)則,染色淡,晶狀體纖維排列較完整;補(bǔ)青顆粒組晶狀體組織損傷減輕,LECs排列致密工整,晶狀體纖維排列較杞菊地黃丸組完整,尤以補(bǔ)青高劑量組最明顯。(4)免疫組化結(jié)果示:模型組SD大鼠晶狀體上皮細(xì)胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的陽(yáng)性表達(dá)較空白對(duì)照組均明顯升高,差異具有顯著性(P0.05);藥物干預(yù)后,補(bǔ)青顆粒組、杞菊地黃丸組VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC陽(yáng)性表達(dá)明顯降低,差異具有顯著性(P0.05);各治療組之間相比結(jié)果顯示,補(bǔ)青顆粒高劑量組VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC陽(yáng)性表達(dá)較杞菊地黃丸組減少,差異具有顯著性(P0.05)。(5)血清結(jié)果示:相比于空白對(duì)照組,模型組SOD、GSH-PX活性明顯降低,而MDA含量明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);藥物干預(yù)后,補(bǔ)青顆粒各治療組與杞菊地黃丸組比較結(jié)果顯示,隨著補(bǔ)青顆粒濃度的逐漸增高,SD大鼠血清中SOD、GSH-PX活性增加越顯著,MDA含量降低越明顯,且兩者的變化具有計(jì)量依賴性,差異顯著(P0.05)。(6)Real Time-PCR結(jié)果顯示:模型組與空白對(duì)照組相比,氧化應(yīng)激狀態(tài)下,大鼠晶狀體組織中VEGF、VEGF-R2、SRC在RNA水平表達(dá)顯著升高,差異顯著性非常高(P0.01);中藥干預(yù)后,補(bǔ)青顆粒組與模型組比較,VEGF、VEGF-R2、SRC在RNA水平表達(dá)有了顯著降低(P0.01);而杞菊地黃丸組與模型組比較,VEGF m RNA、SRC m RNA表達(dá)差異不具有顯著性(P0.05);補(bǔ)青顆粒高劑量組與空白對(duì)照組比較,三種因子在RNA表達(dá)差異具有顯著性(P0.05)。(7)Western Blot:紫外線照射之后,模型組與空白對(duì)照組相比,大鼠晶狀體中VEGF、VEGF-R2、SRC和R-SRC蛋白表達(dá)水平均有明顯升高,差異非常具有顯著性(P0.01);而藥物干預(yù)后,各藥物治療組與模型對(duì)照組相比,VEGF、VEGF-R2和SRC蛋白表達(dá)水平,均有下降,差異具有顯著性(P0.01),而杞菊地黃丸治療組R-SRC蛋白表達(dá)水平,與模型組比較,差異不具顯著性(P0.05);補(bǔ)青顆粒高劑量組R-SRC蛋白表達(dá)水平,與空白對(duì)照組相比,差異顯著性不明顯(P0.05);補(bǔ)青顆粒高劑量組與杞菊地黃丸組比較,具有明顯的差異性(P0.01)。結(jié)論1、氧化應(yīng)激可能是白內(nèi)障發(fā)生的主要作用機(jī)制之一;2、補(bǔ)青顆粒可能通過(guò)調(diào)節(jié)晶狀體中VEGF-VEGFR2-SRC等相關(guān)基因的表達(dá),對(duì)紫外線照射所致大鼠晶狀體混濁的發(fā)生和發(fā)展起到防止、延緩、保護(hù)的目的。
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

SRC免疫組化表達(dá)情況：

P-SRC免疫組化表達(dá)情況：

a：空白對(duì)照組；b：模型對(duì)照組；c：杞菊地黃丸組；d：補(bǔ)青高劑量組）

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 范博妍;補(bǔ)青顆粒對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的大鼠晶狀體抗氧化應(yīng)激的作用及機(jī)制研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2786698