【摘要】：目的探討補青顆粒對紫外線照射所致的大鼠晶狀體氧化應激平衡狀態(tài)、對VEGF-VEGFR2-SRC信號通路表達的影響,為補青顆粒用于臨床治療年齡相關性白內(nèi)障(ARC)提供實驗依據(jù)。方法(1)SPF級雄性SD大鼠,經(jīng)裂隙燈顯微鏡檢查排除雙眼晶狀體疾病及其他眼部疾病。適應性喂養(yǎng)一周后,隨機分為六組:空白對照組、模型對照組、杞菊地黃丸組、補青顆粒高、中、低劑量組,除空白對照組外,其余各組分別采用中波紫外線照射復制SD大鼠晶狀體氧化應激模型,造模期間同時給予相應水溶液灌胃。陽性對照組選用杞菊地黃丸1g/ml水溶液灌胃;補青顆粒高、中、低劑量組分別給予4g/ml、2g/ml、1g/ml的水溶液灌胃;模型組、空白組均用生理鹽水(10ml/kg)代替藥物灌胃。實驗期間對大鼠精神狀況、視物情況、二便等一般情況進行每日觀察及記錄;對紫外線照射期間晶狀體的混濁程度進行動態(tài)觀察。造模成功指標:裂隙燈下觀察大鼠晶狀體周邊皮質(zhì),可見空泡。(2)灌胃結(jié)束后,選用HE染色法觀察晶狀體上皮細胞病理學組織情況;酶聯(lián)免疫吸附試驗法測血清中SOD、GSH-PX活性變化以及MDA含量改變。取空白組、模型組、陽性對照組、補青顆粒高劑量組各組晶狀體,采用實時定量聚合酶擴增反應(Real Time-PCR法)檢測晶狀體上皮細胞中VEGF、VEGF-R2以及SRC在RNA水平的表達;免疫組織化學法檢測晶狀體上皮細胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的表達情況;免疫蛋白印跡法(Western Blot法)測定晶狀體上皮細胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的蛋白表達水平。結(jié)果(1)紫外線照射前期,各組大鼠無明顯盲目表現(xiàn),行動自如,生長狀況良好,個別大鼠精神萎靡不振,偶見鼻衄等現(xiàn)象;后期各組大鼠均有精神不振、眼神迷離、嗜睡,明亮光線下,瞳孔縮小等白內(nèi)障表現(xiàn)。裂隙燈下見空白對照組晶狀體無混濁,始終保持透明;紫外線照射第5天,晶狀體混濁不明顯;照射第10天,晶狀體纖維結(jié)構(gòu)紊亂,水腫明顯,大部分晶狀體皮質(zhì)區(qū)見密集中等空泡,屬于Ⅱ期白內(nèi)障;第15天晶狀體混濁程度加深,白內(nèi)障不斷發(fā)展。(2)造模期間,裂隙燈觀察結(jié)果示:在實驗進行開始階段,模型組在實驗進行到第三天時,Ⅰ期白內(nèi)障發(fā)病率為57%,與空白對照組相比,差異具有顯著性(P0.05);隨著紫外線照射時間的延長,模型組SD大鼠處于Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期例數(shù)以及百分比逐漸增高,與空白對照組比較有顯著性差異(P0.05)。由結(jié)果可知,陽性對照組與補青顆粒各治療組均可以延緩白內(nèi)障發(fā)展,與模型組比較差異顯著(P0.05);補青顆粒高劑量組效果最明顯(P0.05)。(3)HE染色示:空白對照組晶狀體上皮細胞(lens epithelial cells,LECs)為單層立方上皮細胞,鏡下觀察,細胞形態(tài)整齊規(guī)則,纖維排列緊密;模型組LECs形態(tài)不規(guī)則,染色深淺不一,晶狀體纖維結(jié)構(gòu)紊亂;陽性對照杞菊地黃丸組晶狀體組織損傷減輕,LECs排列較規(guī)則,染色淡,晶狀體纖維排列較完整;補青顆粒組晶狀體組織損傷減輕,LECs排列致密工整,晶狀體纖維排列較杞菊地黃丸組完整,尤以補青高劑量組最明顯。(4)免疫組化結(jié)果示:模型組SD大鼠晶狀體上皮細胞中VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC的陽性表達較空白對照組均明顯升高,差異具有顯著性(P0.05);藥物干預后,補青顆粒組、杞菊地黃丸組VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC陽性表達明顯降低,差異具有顯著性(P0.05);各治療組之間相比結(jié)果顯示,補青顆粒高劑量組VEGF、VEGF-R2、SRC以及P-SRC陽性表達較杞菊地黃丸組減少,差異具有顯著性(P0.05)。(5)血清結(jié)果示:相比于空白對照組,模型組SOD、GSH-PX活性明顯降低,而MDA含量明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);藥物干預后,補青顆粒各治療組與杞菊地黃丸組比較結(jié)果顯示,隨著補青顆粒濃度的逐漸增高,SD大鼠血清中SOD、GSH-PX活性增加越顯著,MDA含量降低越明顯,且兩者的變化具有計量依賴性,差異顯著(P0.05)。(6)Real Time-PCR結(jié)果顯示:模型組與空白對照組相比,氧化應激狀態(tài)下,大鼠晶狀體組織中VEGF、VEGF-R2、SRC在RNA水平表達顯著升高,差異顯著性非常高(P0.01);中藥干預后,補青顆粒組與模型組比較,VEGF、VEGF-R2、SRC在RNA水平表達有了顯著降低(P0.01);而杞菊地黃丸組與模型組比較,VEGF m RNA、SRC m RNA表達差異不具有顯著性(P0.05);補青顆粒高劑量組與空白對照組比較,三種因子在RNA表達差異具有顯著性(P0.05)。(7)Western Blot:紫外線照射之后,模型組與空白對照組相比,大鼠晶狀體中VEGF、VEGF-R2、SRC和R-SRC蛋白表達水平均有明顯升高,差異非常具有顯著性(P0.01);而藥物干預后,各藥物治療組與模型對照組相比,VEGF、VEGF-R2和SRC蛋白表達水平,均有下降,差異具有顯著性(P0.01),而杞菊地黃丸治療組R-SRC蛋白表達水平,與模型組比較,差異不具顯著性(P0.05);補青顆粒高劑量組R-SRC蛋白表達水平,與空白對照組相比,差異顯著性不明顯(P0.05);補青顆粒高劑量組與杞菊地黃丸組比較,具有明顯的差異性(P0.01)。結(jié)論1、氧化應激可能是白內(nèi)障發(fā)生的主要作用機制之一;2、補青顆�？赡芡ㄟ^調(diào)節(jié)晶狀體中VEGF-VEGFR2-SRC等相關基因的表達,對紫外線照射所致大鼠晶狀體混濁的發(fā)生和發(fā)展起到防止、延緩、保護的目的。
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

SRC免疫組化表達情況：

P-SRC免疫組化表達情況：

a：空白對照組；b：模型對照組；c：杞菊地黃丸組；d：補青高劑量組）

【引證文獻】

相關碩士學位論文 前1條

1 范博妍;補青顆粒對H_2O_2誘導的大鼠晶狀體抗氧化應激的作用及機制研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2786698