【摘要】：NHBA是我所植化室石建功教授從天麻中分離得到的腺苷類似物,我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)靜催眠作用,以此為先導(dǎo)化合物,經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾得到了差向異構(gòu)體YZG-330(R型)和YZG-331(S型)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究YZG-331的鎮(zhèn)靜催眠作用及其機(jī)制。Figure 1 Chemical structure ofYZG-330 and YZG-331.在開場實(shí)驗(yàn)中,YZG-331可以劑量依賴性的抑制動(dòng)物的自主活動(dòng)。與溶劑對照組相比,YZG-331(10和50mg·kg-1,i.g.)對動(dòng)物自主活動(dòng)的抑制率分別為81.0%(P0.001)和89.2%(P0.001)。在閡上劑量戊巴比妥鈉睡眠延長實(shí)驗(yàn)中,YZG-331(5,10和20mg·kg-1,i.g.)對小鼠的睡眠時(shí)間延長率分別為35.3%(P0.01),71.2%(P0.001)和 101.7%(P0.01)。YZG-331(1,5 和 25 mg kg-1,i.g.)協(xié)同閡下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠入睡率分別為0%,75%(P0.01)和100%(P0.01)。已知GABAA受體門控Cl-通道的開啟與睡眠直接相關(guān),該受體有五個(gè)已知的結(jié)合位點(diǎn),其中氟馬西尼是BZ位點(diǎn)的拮抗劑,荷包牡丹堿是GABA位點(diǎn)的拮抗劑。而氟馬西尼和荷包牡丹堿均不能拮抗YZG-331的鎮(zhèn)靜作用,推測YZG-331的作用靶點(diǎn)不在GABAA受體的這兩個(gè)位點(diǎn)上。GABA是腦內(nèi)主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),Glu是腦內(nèi)重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),Glu是GABA的前體物質(zhì),可以在酶的催化作用下生成GABA,二者與睡眠-覺醒關(guān)系密切。因此,我們首先運(yùn)用HPLC-ECD法,OPA柱前衍生化后測定了YZG-331對ICR小鼠的下丘腦和皮層中GABA和Glu含量的影響。結(jié)果表明,與溶劑對照組相比,YZG-331(40mg·kg-1,i.g.)使小鼠下丘腦和皮層中GABA含量有顯著的升高,升高率分別為10.3%和11.6%。我們采用微透析法取樣HPLC-ECD法測定小鼠TMN區(qū)細(xì)胞間隙的GABA水平,結(jié)果表明,給小鼠灌胃YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)20 min時(shí),小鼠TMN區(qū)細(xì)胞外液的GABA水平顯著升高至給藥前的2.3倍。GAD催化GABA的合成,GABA-T催化GABA的水解,小鼠腦內(nèi)GABA含量主要這兩個(gè)酶的調(diào)控。檢測結(jié)果表明,YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)給藥組小鼠大腦皮層GAD酶的活性提高了 106.8%(P0.05),合并給予SCZ和YZG-331組與單獨(dú)給予YZG-331組相比GAD酶活性降低了 25%;單獨(dú)給予YZG-331組下丘腦GAD酶活性提高了 58.6%,合并給予SCZ和YZG-331與單獨(dú)給予YZG-331相比,GAD酶活性降低58.8%(P0.05)。YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)對GABA-T酶的活性無顯著影響。對閡上劑量戊巴比妥鈉(38 mg·kg-1,i.g.)誘導(dǎo)的小鼠,在提前5 h腹腔注射GAD酶抑制劑鹽酸氨基脲(semicarbazldehydrochloride,SCZ)100mg·kg-1 后,溶劑對照組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間均無顯著變化,YZG-331(5,10和20mg·kg-1,i.g.)組小鼠的睡眠延長作用被顯著抑制。腦電圖記錄分析結(jié)果表明,單獨(dú)給予SCZ(100mg·kg-1,i.p.)對ICR小鼠的睡眠成分無顯著影響;與對照組相比,灌胃給予小鼠YZG-331(40mg·kg-1)后,NREM睡眠比例顯著增加54.0%(P0.01),REM睡眠比例顯著下降45.2%(P0.05),清醒時(shí)間顯著降低27.5%(P0.001);合并給予SCZ(100 mg·kg-1,i.p.)和 YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)后,SCZ 可以拮抗 YZG-331 對睡眠成分的改變。DA、5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)對睡眠覺醒的平衡起調(diào)節(jié)作用。我們采用HPLC-ECD法檢測了 YZG-331對小鼠下丘腦和皮層組織中DA、5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響。結(jié)果表明,與溶劑對照組相比,化合物YZG-331(40 mg·kg-1,i.g.)能將下丘腦中的DA和DOPAC水平分別提高40.4%(P0.01)和103%(P0.01),但對皮層中的DA和DOPAC水平并無顯著影響,對小鼠下丘腦和皮層中5-HT和5-HIAA在均無顯著影響。小鼠腦內(nèi)DA及5-HT的代謝主要由MAO調(diào)控。與對照組相比,YZG-331(40mg·kg-1,i.g.)組小鼠皮層中MAO有顯著的升高,下丘腦和紋狀體中MAO活性無顯著變化。提示YZG-331可能不僅是通過調(diào)節(jié)MAO活性來調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的水平。綜上所述,新型鎮(zhèn)靜催眠化合物YZG-331的鎮(zhèn)靜催眠機(jī)制可能為:增加GAD酶活性,使GABA合成增加,TMN區(qū)突觸間隙有更多的GABA與GABAA受體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)表明,YZG-331可以使細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度增加,神經(jīng)細(xì)胞超級(jí)化,產(chǎn)生抑制效應(yīng),出現(xiàn)鎮(zhèn)靜催眠作用。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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