【摘要】：目的:闡明造成同源藥材(桑枝和桑白皮)功效差異的關(guān)鍵藥效物質(zhì),為二者質(zhì)量控制和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)完善提供科學(xué)依據(jù),也為合理利用桑源中藥提供證據(jù)。方法:1.采用HPLC技術(shù)對(duì)桑不同藥用部位進(jìn)行分析,優(yōu)化色譜條件使化學(xué)成分得到最大化表征,從而盡可能的揭示各不同藥用部位在化學(xué)組成上的異同。2.利用UPLC-QTOF-MS提供的質(zhì)譜信息,結(jié)合課題組前期分離的對(duì)照品,對(duì)桑枝、桑白皮成分進(jìn)行鑒定,明確桑枝、桑白皮的共性和差異成分。3.對(duì)桑枝、桑白皮的主要成分進(jìn)行HPLC定量,并歸納二者差異成分的含量、比例關(guān)系等信息。4.選取代表性的桑枝、桑白皮藥材提取物開(kāi)展與傳統(tǒng)功效相關(guān)的藥效評(píng)價(jià)。針對(duì)桑枝和桑白皮都具有抗炎的共同特點(diǎn),選擇二甲苯致小鼠耳腫脹炎癥動(dòng)物模型評(píng)價(jià)二者抗炎作用。以小鼠氨水誘咳試驗(yàn)評(píng)價(jià)桑白皮的平喘作用。5.將化學(xué)信息和藥效信息相對(duì)應(yīng),利用化學(xué)計(jì)量學(xué)手段,分析主要成分、差異成分與功效的相關(guān)性。結(jié)果:1.建立了桑不同藥用部位的HPLC指紋圖譜及共有模式圖,桑白皮共有峰10個(gè),桑枝共有峰11個(gè),桑葉共有峰12個(gè),桑椹共有峰8個(gè)。基于對(duì)照品比對(duì)和UPLC-QTOF/MS提供的精確相對(duì)分子量對(duì)10個(gè)特征峰進(jìn)行了指認(rèn)。2.采用UPLC-QTOF/MS技術(shù),根據(jù)化合物的精確相對(duì)分子量,桑枝桑白皮共標(biāo)定了147個(gè)峰,其中二者共有35個(gè),桑白皮特有55個(gè),桑枝特有57個(gè);結(jié)合二級(jí)質(zhì)譜裂解信息對(duì)桑枝、桑白皮成分進(jìn)行推測(cè),鑒定了39個(gè)化合物,二苯乙烯類(lèi)16個(gè),2-芳基苯并呋喃類(lèi)4個(gè),香豆素類(lèi)化合物4個(gè),黃酮類(lèi)10個(gè),diels-alder型加合物3個(gè),酚酸類(lèi)1個(gè),生物堿1個(gè)。3.建立了桑枝、桑白皮中5種主要成分的hplc含量測(cè)定方法,對(duì)53批桑白皮和54批桑枝藥材進(jìn)行測(cè)定。桑白皮的指標(biāo)成分為桑皮苷a、氧化白藜蘆醇、桑酮g、桑酮h、桑辛素;桑枝的指標(biāo)成分為桑皮苷a、氧化白藜蘆醇、桑酮g、柘樹(shù)黃酮c、桑辛素。明確了桑枝、桑白皮的共性成分及專(zhuān)屬性成分以及它們?cè)诙嗯嗡幉闹械暮�。同時(shí),對(duì)桑白皮產(chǎn)地加工過(guò)程中去皮的合理性進(jìn)行分析。4.二甲苯致小鼠耳腫脹試驗(yàn)中,桑白皮高劑量(9.6g/kg),低劑量(2.4g/kg)及桑枝高劑量(12g/kg)組小鼠耳腫脹度均明顯降低,結(jié)果具有顯著性差異(p0.05或p0.01);小鼠氨水誘咳實(shí)驗(yàn)中,桑白皮高、低劑量組都可以減少咳嗽小鼠的咳嗽次數(shù),與模型對(duì)照組相比,結(jié)果有顯著性差異(咳嗽潛伏期p0.01,咳嗽次數(shù)p0.001;咳嗽潛伏期p0.05,咳嗽次數(shù)p0.01)。桑枝高、低劑量與模型對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異。5.桑枝、桑白皮均有抗炎作用,可能是二苯乙烯類(lèi)(桑皮苷a)和黃酮類(lèi)(桑酮g、桑酮h、柘樹(shù)黃酮c、桑辛素等)成分共同作用的結(jié)果;桑白皮的止咳作用可能與其桑皮苷a的含量較高有關(guān)。6.綜述了桑枝、桑白皮化學(xué)成分、藥理活性及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究進(jìn)展。結(jié)論:通過(guò)多批次藥材的定性定量比較,基本明確了桑枝、桑白皮化學(xué)成分的共性和差異性。桑皮苷a、氧化白藜蘆醇、桑酮g、和桑辛素4個(gè)成分為桑枝、桑白皮所共有,但成分的含量和比例差異非常大。桑酮h為桑白皮的特有成分,柘樹(shù)黃酮c為桑枝的特有成分。另外,對(duì)桑白皮產(chǎn)地加工過(guò)程中去皮的合理性進(jìn)行分析。藥效實(shí)驗(yàn)表明,桑枝、桑白皮均有抗炎作用,可能是二苯乙烯類(lèi)和黃酮類(lèi)成分共同作用的結(jié)果;桑白皮的止咳作用可能與其桑皮苷a的含量較高有關(guān)。研究結(jié)果可為桑枝、桑白皮的質(zhì)量控制和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)完善提供參考數(shù)據(jù)和建議。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R284.1;R285.5
【圖文】：

市售桑白皮飲片圖

圖 1-2 市售桑枝飲片圖1.2 方法1.2.1 HPLC 色譜條件色譜柱為 Agilent Eclipse XDB C18（4.6×250 mm，5 μm） ；以乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫：0 ~ 5 min，9%A；5 ~ 13 min，9% ~ 13%A；13 ~22 min，13% ~ 22%A；22 ~ 31 min，22% ~ 34%A；31 ~ 44 min，34% ~ 48%A；44 ~ 54min，48% ~ 53%A；54 ~ 59 min，53% ~ 65%A；59 ~ 75 min，65%A；75 ~ 80 min，65% ~ 79%A。流速 1.0 mL min-1，柱溫 30℃，檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm，進(jìn)樣體積 10 μL。1.2.2 UPLC-MS 條件色譜柱為 ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100 mm，1.7 μm)，以乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫：0 ~ 3 min，12%~50%A；3 ~ 8 min，50% ~ 70%A；

桑白皮HPLC指紋圖譜

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2778763