【摘要】：目的:復(fù)方血栓通膠囊是中山眼科中心與廣東眾生藥業(yè)股份有限公司聯(lián)合研制的純中藥復(fù)方制劑,用于治療糖尿病眼病和糖尿病腎病。目前復(fù)方血栓通膠囊的物質(zhì)基礎(chǔ)研究較薄弱,本課題主要快速鑒定復(fù)方血栓通膠囊體內(nèi)外三七皂苷類成分,研究復(fù)方血栓通膠囊在比格犬體內(nèi)的代謝和組織分布情況;并探索其整合藥代動力學(xué)。為復(fù)方血栓通膠囊的物質(zhì)基礎(chǔ)及臨床應(yīng)用提供一定的依據(jù)。方法:1.根據(jù)三七皂苷的結(jié)構(gòu)特點,擬定HPLC-LTQ-Orbitrap聯(lián)合多重數(shù)據(jù)快速挖掘技術(shù)(MDF和CIF)快速篩選鑒定三七皂苷類成分策略;2.復(fù)方血栓通膠囊連續(xù)灌胃給藥比格犬三天后,收集不同時間點的血漿,12h內(nèi)的尿液和糞便以及2h的眼球和腎臟,采用擬定的多重數(shù)據(jù)挖掘策略,快速鑒定復(fù)方血栓通膠囊體內(nèi)外三七皂苷類成分,研究復(fù)方血栓通膠囊在比格犬體內(nèi)的代謝和組織分布情況。3.建立HPLC-QqQ同時測定血漿中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd五種有效成分的定量分析方法;比格犬灌胃高(30粒/10kg)、中(15粒/kg)、低(8粒/kg)三個劑量的復(fù)方血栓通膠囊,分別在不同時間點于前肢靜脈取血,測定血漿中各待測成分的濃度,繪制藥時曲線和采用DAS軟件計算藥代動力學(xué)參數(shù);根據(jù)各待測成分結(jié)構(gòu)特點和藥代動力學(xué)參數(shù)差異,對其進(jìn)行三醇型和二醇型分類,利用各成分曲線下面積(AUC0-∞)百分率作為自定義權(quán)重系數(shù),分類整合復(fù)方血栓通膠囊中三醇型和二醇型皂苷在比格犬體內(nèi)綜合血藥濃度,繪制各類整合藥時曲線,DAS軟件計算各類整合藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果:1.建立了基于HPLC-LTQ-Orbitrap聯(lián)合多重數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)(MDF和CIF)快速篩選鑒定三七皂苷類成分策略。2.利用多重數(shù)據(jù)技術(shù)快速挖掘策略,鑒定出復(fù)方血栓通膠囊提取液中48個三七皂苷成分,復(fù)方血栓通膠囊灌胃給予比格犬后,在給藥后血漿、糞便和尿液中分別鑒定出18、48和15個三七皂苷類成分;復(fù)方血栓通膠囊灌胃給予比格犬2h后,在比格犬眼球和腎臟中分別鑒定出13、18個三七皂苷類成分。3.三醇型皂苷三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的藥代動力學(xué)參數(shù)相似,Tmax在1-2.5h之間,t1/2在 3.5-12h 之間,MRT0-∞在 6-16h 之間,CLz/F在 1.5-10L/h/kg 之間,AUC0-∞在200-2800ng/mL*h之間,Cmax在30-400 ng/mL之間;二醇型皂苷人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd藥動學(xué)參數(shù)相似,Tmax在5-12h之間,t1/2在40-65h之間,MRT0-∞在65-90h之間,CLz/F 在 0.05-1 L/h/kg 之間,AUC0-∞在 2000-400000ng/mL*h 之間,Cmax 在 30-4500 ng/mL之間。結(jié)果顯示,三醇型皂苷和二醇型皂苷的藥動學(xué)特征具有顯著性差異,在吸收、體內(nèi)滯留、消除等方面,三醇型皂苷較二醇型皂苷吸收快、滯留時間短、消除快。通過三醇型和二醇型皂苷的自定義權(quán)重系數(shù)整合,在不同給藥劑量下,三醇型皂苷整合藥代動力學(xué)參數(shù)Tmax在1-1.5之間,t1/2在3-11之間,MRT0-∞在6-14之間,CLz/F在5-8 L/h/kg 之間,AUC0-∞在 600-2000 ng/mL*h 之間,Cmax 在 80-320 ng/mL 之間;二醇型皂苷整合藥代動力學(xué)參數(shù)Tmax在5-8h之間,t1/2在50-60h之間,MRT0-∞在73-90h之間,CLz/F 在 0.05-0.15L/h/kg 之間,AUC0-∞在 39000-400000 ng/mL*h 之間,Cmax 在520-4100 ng/mL之間。分類整合后的藥代動力學(xué)參數(shù)兼顧了同類別中不同單體皂苷的藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)論:1.課題建立了基于HPLC-LTQ-Orbitrap聯(lián)合多重數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)快速篩選鑒定三七皂苷類成分的策略,可快速鑒定復(fù)方血栓通膠囊在比格犬體內(nèi)外三七皂苷類成分,為化合物的快速篩選鑒定提供了一種新的思路。2.探索了復(fù)方血栓通膠囊在比格犬體內(nèi)三七皂苷的代謝情況。給藥血漿和尿液中的三七皂苷類成分較糞便中少,表明三七皂苷類成分生物利用度低,大部分未被吸收入血直接經(jīng)糞便排出體外。給藥血漿和尿液中鑒定出的三七皂苷類成分種類相似,主要為糖基取代個數(shù)較少的皂苷,以糖基取代個數(shù)為3-4個皂苷居多,這可能由于糖基取代個數(shù)少,分子量相對小,易透膜吸收入血。探索了復(fù)方血栓通膠囊在比格犬眼球和腎臟組織中的分布情況。進(jìn)入眼球中的三七皂苷類成分相對腎臟中種類較少,可能由于血眼屏障的原因,進(jìn)入眼球組織中的三七皂苷糖基取代個數(shù)少,糖基取代個數(shù)主要為1-3個,進(jìn)入腎臟中的三七皂苷類成分糖基個數(shù)主要為3-5個。研究結(jié)果為復(fù)方血栓通膠囊在治療糖尿病視網(wǎng)膜變病以及腎臟疾病藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供了一定的依據(jù)。3.復(fù)方血栓通膠囊三七皂苷的分類整合藥動學(xué)特征充分兼顧了同類別中不同單體皂苷的藥動學(xué)特征,能反映同類別化合物整體在體內(nèi)的存留特性和體內(nèi)藥代動力學(xué)過程,為中藥多組分、整體觀的藥代動力學(xué)研究提供了一種解決方案,為復(fù)方血栓通膠囊臨床用藥方案的設(shè)計提供了依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R286.0;R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2776440