【摘要】：目的:前期研究發(fā)現(xiàn)隨著提取物中多糖含量增加,有效成分溶出總量增加,提示多糖可能具有促進(jìn)難溶性成分溶出的作用,但該作用是否具有普遍性,其溶出機制是什么,尚不清楚,故本文期望通過探討中藥多糖增溶作用的普適性及增溶影響因素探討多糖作為增強難溶性藥物溶解度輔料的可行性。方法:1.中藥多糖增溶效果的普適性考察:以黃芩苷為模型藥物,首先建立黃芩苷含量測定方法。比較不同多糖與黃芩苷混合之后對黃芩苷溶解度的影響,篩選出增溶作用最好的多糖。并以該多糖為工具多糖通過紫外分光光度計法篩選多糖對其它不同化合物的增溶能力,確定多糖增溶效果的普適性。2.醋柴胡多糖增溶作用影響因素考察:采用30%、50%、70%、90%不同醇濃度梯度醇沉法分離醋柴胡多糖,采用分子凝膠色譜法測定多糖的平均分子量,探究不同濃度的乙醇沉淀多糖對黃芩苷溶解的影響。3.醋柴胡多糖的性質(zhì)及結(jié)構(gòu)對黃芩苷溶解度影響的考察:以水、0.05mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、1mol/L氯化鈉和0.5mol/L氫氧化鈉為洗脫劑,通過DEAE-FF離子交換層析法和凝膠滲透色譜法分離多糖,比較不同組分多糖對黃芩苷溶解度的影響。采用苯酚硫酸法測定多糖的總多糖含量;間羥基聯(lián)苯法測定糖醛酸含量;利用酸水解法水解、再通過糖腈乙酰化法使水解后的單糖衍生化,利用GC-MS測定相應(yīng)的單糖組成;利用紅外光譜儀確定多糖糖鏈上官能團(tuán)的類型以及核磁共振儀確定多糖的糖苷鍵連接順序,從而進(jìn)一步分析多糖結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與黃芩苷溶解度的關(guān)系。4.醋柴胡多糖水溶液性質(zhì)研究:通過激光筆觀察醋柴胡多糖水溶液是否具有丁達(dá)爾現(xiàn)象,觀察黃芩苷加入醋柴胡多糖之后的溶液性質(zhì);利用熒光探針法測定醋柴胡多糖水溶液的臨界聚集濃度;粒徑分析儀,pH計分別測定醋柴胡多糖水溶液的粒徑、電位和pH值;透射電鏡觀察醋柴胡多糖水溶液分子的構(gòu)象。5醋柴胡多糖對黃芩苷藥物動力學(xué)影響研究:利用SD大鼠進(jìn)行藥物動力實驗,探究聯(lián)用醋柴胡多糖之后對黃芩苷生物利用度的影響。結(jié)果:1.中藥多糖增溶效果的普適性考察:現(xiàn)有方法無其它成分影響黃芩苷測定,方法專屬性良好;黃芩苷在1000-3.9μg/mL范圍內(nèi)線性方程為Y=26.914X+124.79,R~2=0.9997,方法精密度RSD為0.225%;室溫24h內(nèi)穩(wěn)定性RSD為1.643%。不同多糖均具有增加黃芩苷溶解度作用,增加倍數(shù)在2-11.5倍之間,其中以醋柴胡多糖效果最好,其次為靈芝多糖和甘草多糖,故選取醋柴胡多糖為研究對象,考察其對不同結(jié)構(gòu)化合物溶解度影響。結(jié)果顯示醋柴胡多糖對難溶性化合物均有增溶作用,增溶倍數(shù)在1.22-10.81之間,顯示醋柴胡多糖具有普遍增加難溶性藥物溶解度的作用。2.醋柴胡多糖增溶作用影響因素考察:醋柴胡30%乙醇多糖沉淀部分主要分布于1605.198KD范圍左右;50%乙醇多糖沉淀部分主要分布于1394.788KD范圍左右;70%乙醇多糖沉淀部分主要分布于2199.030KD范圍左右;90%乙醇多糖沉淀部分主要分布于26.485KD范圍左右;醋柴胡多糖的不同醇沉部位的增溶能力為90%乙醇多糖沉淀部分30%乙醇多糖沉淀部分70%乙醇多糖沉淀部分:50%乙醇多糖沉淀部分,提示分子量與增溶作用有關(guān)系但不是唯一因素,有必要進(jìn)行多糖增溶作用與其結(jié)構(gòu)性質(zhì)相關(guān)性的探討。3.醋柴胡多糖的性質(zhì)及結(jié)構(gòu)對黃芩苷溶解度的影響:利用離子交換層析柱法和凝膠滲透色譜法分離得到三種均一多糖。通過總多糖含量、糖醛酸含量、單糖組成、分子量、紅外光譜的測定以及核磁~1H、~(13)C、HMBC、HSQC、DEPT、COSY譜圖確定多糖的結(jié)構(gòu):(1)VBCP-2-A是一種分子量為2195.757KD的均一酸性雜多糖,其總多糖含量為89.7%,糖醛酸含量為13.99%,其單糖組成為:鼠李糖:阿拉伯糖:葡萄糖:半乳糖:葡萄醛酸:阿拉伯糖醛酸:半乳糖醛酸=1:6.97:1.29:9.27:0.78:5.65:2.25。以(7)(16)(11)(20)(8)?-L-阿拉伯糖為主鏈,在阿拉伯糖的C-3上連有支鏈,支鏈?zhǔn)?7)(16)(11)(20)(8)?-L-阿拉伯糖或(7)(16)(11)(17)(11)(21)(8)?-D-葡萄糖,或(7)(16)(11)(21)(8)?-D-葡萄糖,或(1,3)?-L-鼠李糖,或(7)(16)(11)(19)(8)?-D-半乳糖,其中在(7)(16)(11)(17)(11)(21)(8)?-D-葡萄糖上的C-2上也連有支鏈。(2)VBCP-3-A是一種分子量為963.544KD的均一酸性雜多糖,其總多糖含量為93.7%,糖醛酸含量為61.16%,其單糖組成為:鼠李糖:阿拉伯糖:半乳糖:半乳糖醛酸=1.00:2.39:0.98:5.93以及少量葡萄糖。多糖的結(jié)構(gòu)主要由1,5-?-L-阿拉伯糖和1,3,5-?,L-阿拉伯糖組成,并且在1,3,5-?,L-阿拉伯糖上的3位上連有1,5-?,L-阿拉伯糖或者1,4-?-D-半乳糖醛酸。(3)VBCP-4-A是一種分子量為1185.182KD的均一酸性雜多糖,其總多糖含量為95.1%,糖醛酸含量為56.22%,其單糖組成為:鼠李糖:阿拉伯糖:半乳糖:半乳糖醛酸:葡萄糖:甘露糖=1.00:2.33:1.04:4.64:0.43:0.14。多糖是以(7)(16)(11)(18)(8)?-L-阿拉伯糖為主鏈,在阿拉伯糖的C-5上連有支鏈,支鏈?zhǔn)?7)(16)(11)(19)(8)?-D-葡萄糖,(7)(16)(11)(19)(8)?-D-半乳糖,(1,2)?-L-鼠李糖,(1,6)?-D-葡萄糖。4.醋柴胡多糖水溶液性質(zhì)研究:醋柴胡水溶液具有明顯的有丁達(dá)爾效應(yīng),黃芩苷在加入醋柴胡多糖之后水溶液從混懸狀態(tài)變?yōu)槌吻逋该鳡顟B(tài),并且黃芩苷隨著多糖含量增加,其溶解度亦增加,提示黃芩苷可能被包裹在醋柴胡多糖之中。通過芘探針方法測定其臨界聚集濃度為0.495mg/mL,說明醋柴胡多糖可能形成聚集體。透射電鏡結(jié)果表明醋柴胡多糖在水溶液里面形成球狀結(jié)構(gòu)。等熱滴定量熱儀測定醋柴胡多糖水溶液滴定黃芩苷的熱量變化,其吉布斯自由能、焓變值以及熵變值均為負(fù)值,提示反應(yīng)屬于一個自發(fā)的吸熱反應(yīng)。5.醋柴胡多糖對黃芩苷藥代動力學(xué)影響的研究:醋柴胡多糖聯(lián)用組能夠提高黃芩苷AUC(0-t)達(dá)到36%,最大血藥濃度Cmax提高33%。結(jié)論:中藥多糖增加難溶性化合物的溶出的作用具有普遍性。其增溶作用可能與多糖的糖醛酸含量以及主鏈結(jié)構(gòu)有關(guān),可能的增溶機制為:醋柴胡多糖水溶液形成具有球狀的高分子聚集物,并且粒徑均一穩(wěn)定,難溶性化合物可被包裹在其中從而達(dá)到增溶效果,且這種效果具有提高生物利用度的作用,提示中藥多糖可開發(fā)為提高難溶性藥物溶解度的功能輔料。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285
【圖文】：

提再水提醇沉方法提取，提取流程如圖 2-1 所示。醋每份 2kg，均用 70%乙醇冷浸過夜，先經(jīng)過 10L 70 4 份的藥渣，用 80L 沸水浸提 3 次，上清用紗布過濾量為 1g/mL。醋柴胡上清水溶液加入 4 倍乙醇，慢加，分離沉淀并凍干，放置干燥箱備用。醋柴胡多糖粉洗大約 3 次去除小分子醇溶部分，棄上清。沉淀重新ge 法除去蛋白質(zhì)。用 0.5 g/mL 的多糖水溶液與 sevag5:1 的比例混合物劇烈震搖，離心 20 min，3000 r/m，大概除 7 次。把得到的多糖溶液濃縮去除溶液中殘水溶解，以 4 倍乙醇醇沉，離心取上清，放入-80℃糖。醋柴胡

入到 5mL 的 EP 管中，加入超純水 4mL，按照 2.2.3 項方法處理樣品，通過比較黃芩苷溶解度確定其增溶作用的強弱。2.3 實驗結(jié)果2.3.1 黃芩苷方法專屬性、標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度以及穩(wěn)定性如圖 2-2 所示，多糖溶液不影響黃芩苷的測定，說明方法專屬性良好。如圖2-3 所示黃芩苷在 1000-3.9 μg/mL，線性方程為 Y=26.914X+124.79,R2=0.9997，表明線性良好。黃芩苷樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣 6 次，結(jié)果如表 2-1，RSD＝0.225%，表明所選方法精密度良好。黃芩苷在常溫 0、2、4、6、8、12、24 h 進(jìn)樣,測定樣品中黃芩苷素的峰面積,結(jié)果如表 2-2， RSD＝1.643%，表明樣品溶液在 24 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖 2-4 不同多糖對黃芩苷溶解度的影響Figure 2-4 Effect of different polysaccharides on the solubility of baicali討論芩苷作為中藥黃芩的有效成分之一，具有鎮(zhèn)靜、解熱、保肝、抗炎肺炎衣原體、保護(hù)心腦缺血再灌注損傷等活性[39]，但由于其水溶性，導(dǎo)致其生物利用度低，影響藥效的發(fā)揮[40]。因此，本文選取黃合物，考察中藥多糖對其溶解度的影響，從而驗證中藥多糖增加難度這一現(xiàn)象是不是普遍存在。果顯示，所選取的十多種來源于不同藥材的多糖均具有增加黃芩苷提示多糖增加難溶性藥物溶解度這一現(xiàn)象可能是中藥中存在的普遍獻(xiàn)，我們發(fā)現(xiàn)，從巴西蘑菇中分離出主要由 β-(1-6)-葡聚糖的多糖作用，可以增加灰黃霉素的溶解度[38]，與我們的結(jié)果一致，提示

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2774196