【摘要】：背景密枝圓柏(Juniperus convallium)為柏科(Cupressaceae)刺柏屬(Juniperus)植物,是我國特有樹種,主要分布在西藏和四川西部地區(qū)。刺柏又稱 徐巴‖,作為傳統(tǒng)藏藥,在我國有著悠久的用藥歷史,因其具有清熱、解毒、祛濕的功效,被廣泛用于治療風濕性關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、肺炎、腎炎、黃水病等疾病。文獻報道,風濕及類風濕關節(jié)炎等疾病的發(fā)生不僅與補體系統(tǒng)的過度激活有關,還與氧化應激產生的自由基相關�，F(xiàn)代藥理研究也表明,刺柏屬植物在抗炎、抗氧化、抗病毒、抗菌、抗腫瘤、殺蟲等方面均表現(xiàn)出較好的生物活性。刺柏屬植物中的化學成分多樣,主要包括揮發(fā)油、萜類、黃酮、木脂素、香豆素、甾體等。密枝圓柏為刺柏屬代表性植物之一,國內外鮮見對其化學成分和生物活性方面的研究。因此,本文對密枝圓柏的化學成分及其生物活性進行研究具有重要意義。目的六種刺柏屬植物枝葉和果實部位的揮發(fā)性成分,為研究刺柏屬植物不同部位及不同品種間的藥效差異提供參考。分離鑒定密枝圓柏乙醇提取物中化合物的結構,并測定化合物的抗補體、抗氧化和抗流感病毒活性,為闡明密枝圓柏的藥效物質基礎提供一定的參考。方法1.采用HS-GC-MS法對密枝圓柏、高山柏、垂枝香柏和香柏的枝葉及大果圓柏與滇藏方枝柏的枝葉和果實中揮發(fā)性成分進行分析,利用NIST14譜庫并結合相對保留指數(shù)對分離得到的化合物進行結構鑒定,采用面積歸一法確定各組分相對百分含量,并采用Ward's聚類法對枝葉部分的揮發(fā)性成分進行聚類。2.采用正相硅膠、ODS-C_(18)和Sephadex LH-20及制備型高效液相色譜等方法對密枝圓柏乙醇提物進行分離純化,結合理化性質和波譜數(shù)據鑒定化合物結構。采用細胞溶血法測定各萃取部位的抗補體活性,并采用該方法測定化合物的經典、旁路途徑抗補體活性及作用靶點,采用DPPH、ABTS、FRAP法測定化合物抗氧化活性,采用MTT法測定體外抗流感病毒活性。結果1.從6種刺柏屬植物中共鑒定出62個化合物,占各樣品總成分的90.08%~98.82%,包括單萜烯類化合物15種、含氧倍半萜類化合物11種、倍半萜烯類化合物20種、含氧二萜類化合物2種、含氧單萜類化合物12種和異戊酸酯類化合物2種,其中α-蒎烯、β-蒎烯等單萜烯類成分含量較高。果實部位單萜烯含量高達80%以上,且主成分β-蒎烯含量超過45%,與枝葉部位揮發(fā)性成分存在顯著差異。聚類分析結果顯示,大果圓柏、滇藏方枝柏、高山柏和香柏揮發(fā)性成分相似度較高,均以β-蒎烯含量最高,而密枝圓柏和垂枝香柏的主要成分分別為α-蒎烯和α-松油烯。2.密枝圓柏醇提物的乙酸乙酯和正丁醇萃取部位為抗補體活性有效部位,從密枝圓柏乙酸乙酯部位分離鑒定了17個化合物,包括黃酮類化合物9個:穗花杉雙黃酮(1)、柏黃酮(2)、Cupressuflavone-4?-O-β-D-glucosides(3)、柚皮素-7-O-葡萄糖苷(4)、芹菜素(5)、山柰酚-3-O-(6''-O-E-肉桂�；�)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(7)、槲皮素鼠李吡喃糖苷(8)和海波拉亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9);木脂素類化合物3個:Isomassonianoside B(10)、異落葉松脂素-2a-O-D-葡萄糖苷(11)和異落葉松脂素-3a-O-D-葡萄糖苷(12);萜類化合物3個:柳葉二醇(13)、3β-羥基山達海松酸(14)和(1R,3R,4aR,4bS,7R,10aR)-7-ethenyl-1,2,3,4,4a,4b,5,6,7,9,10,10a-dodecahydro-3-hydroxy-1,4a,7-trimethyl-1-phenanthrenemethanol(15);以及大丁苷元(16)和β-谷甾醇(17)。除16外,不同類型化合物對補體系統(tǒng)均具有不同程度的抑制活性,經典途徑CH_(50)為0.05~3.99 mM,旁路途徑AP_(50)為0.58~19.13mM,其中,黃酮類化合物,尤其雙黃酮類,是密枝圓柏中重要的抗補體活性成分,并且酚羥基和糖苷基團可能是影響其抗補體活性的重要因素。黃酮類化合物(1~3,5~9)和木脂素類化合物(10~12)化合物具有不同程度的抗氧化活性。黃酮類化合物2和6具有較弱的抗流感病毒活性。結論1.刺柏屬植物枝葉和果實的揮發(fā)性成分存在顯著差異,且枝葉主成分差異為不同植物分類的主要因素。HS-GC-MS法是一種能夠簡便快捷地分析該屬植物揮發(fā)性成分的方法。2.化合物(1~17)均為首次從密枝圓柏中分離得到,黃酮和木脂素類是其抗補體和抗氧化的主要活性成分,為密枝圓柏藥效物質基礎及質量控制研究提供了依據。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1;R285.5
【圖文】：

圖 1-1 6 種刺柏屬植物標本圖Fig. 1-1 The plants of 6 Juniperus species驗方法 頂空進樣條件分別精密稱取0.002 g干燥的6種刺柏屬植物枝葉和大果圓柏及滇藏方枝末，放入20 mL頂空瓶中，密封后置于樣品盤內。進樣體積：2 mL；流速in；不分流；加熱溫度：120oC；加熱時間：20 min；震動速度：400 rpm序：加熱10 s，靜止10 s。 氣相色譜條件TG-5MS 石英毛細管非極性柱（30 m×0.32 mm×1.00 μm）；載氣 He；柱流L/min；進樣口溫度 250oC；柱溫程序：起始柱溫 40oC（保持 8 min），以 1oC 250oC（保持 30 min）；進樣量 1 μL，不分流。

在上述實驗條件下對正構烷烴標準品，刺柏屬植物密枝圓柏、高山柏、垂枝香柏和香柏的枝葉以及大果圓柏和滇藏方枝柏枝葉和果實的揮發(fā)性成分進行HS-GC-MS分析，分別得到總離子流圖，見圖1-2（樣品及主峰編號同表1-2）。圖 1-2 六種刺柏屬植物枝葉和果實揮發(fā)性成分總離子流圖Fig. 1-2 GC-MS chromatogram of volatile components from twigs and fruits of 6 Juniperusspecies

圖 1-3 6 種刺柏屬植物枝葉的聚類分析Fig. 1-3 Cluster analysis of the twigs of 6 Juniperus species統(tǒng)蒸餾法的比較稱取20、10、5、2 mg刺柏屬植物枝葉和果實粉末，果顯示當樣品量為5和2 mg時，分離色譜峰效果較好本實驗與已報道的傳統(tǒng)水蒸氣法對比，涂永勤從10發(fā)性成分，董艷芳稱取200 g垂枝香柏提取其揮發(fā)油，不需提取，操作簡便快捷。結果的探討-MS法基本可以將刺柏屬植物果實和枝葉部分從揮主成分含量占比較高，對區(qū)分不同部位及不同品種

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1 張姣;德吉;付愛玲;陳道峰;盧燕;;密枝圓柏的化學成分及其抗補體、抗氧化活性[J];中草藥;2019年13期

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1 張姣;密枝圓柏的活性成分研究[D];西南大學;2019年

本文編號：2770067