【摘要】：目的:觀察淫羊藿苷(Icariin,ICA)對6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)誘導的多巴胺(Dopamine,DA)能神經(jīng)元損傷的保護作用,并探討其可能機制。方法:(1)動物實驗:單側中腦黑質注射6-OHDA(8μg)制備大鼠多巴胺能神經(jīng)元損傷模型,實驗隨機分為5組:空白組、ICA(20 mg/kg)組,6-OHDA(8μg)組,6-OHDA+ICA(10 mg/kg)低劑量組,6-OHDA+ICA(20 mg/kg)高劑量組。造模提前一天灌胃給予ICA,大鼠造模后每天灌胃給予ICA連續(xù)14天。取材前一周通過轉棒實驗觀察ICA對6-OHDA損傷大鼠行為學改變的改善作用;利用免疫組織化學染色法分別檢測大鼠中腦黑質內DA能神經(jīng)元的形態(tài)和數(shù)量的變化以及小膠質細胞激活的情況。(2)細胞實驗:取懷孕14-15天的SD大鼠胚胎的中腦組織,無菌條件下建立神經(jīng)元-膠質細胞共培養(yǎng)模型,實驗隨機分為空白組、ICA(0.1μM)組、6-OHDA(40μM)組、6-OHDA+ICA(0.01μM)低劑量組、6-OHDA+ICA(0.1μM)高劑量組。細胞給予ICA作用30 min后再給予6-OHDA。7天后,利用免疫細胞化學染色法分別檢測共培養(yǎng)細胞中DA能神經(jīng)元的形態(tài)和數(shù)量的變化及小膠質細胞激活的情況。Griess試劑檢測共培養(yǎng)細胞上清液中NO含量,ELISA法檢測TNF-α、IL-1β的含量。蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測共培養(yǎng)中DA能神經(jīng)元表面標記物酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)和小膠質細胞表面特異性蛋白離子鈣接頭蛋白(Ionized calcium-binding adapter molecule-1,Iba1)以及核轉錄因子蛋白家族(NF-κB)中IκBα和p65蛋白的磷酸化水平。結果:(1)動物實驗:6-OHDA組大鼠行為活動能力明顯降低,DA能神經(jīng)元數(shù)量減少,小膠質細胞激活增多;給予ICA后,大鼠行為活動能力得到明顯改善,DA能神經(jīng)元數(shù)量增加,小膠質細胞激活明顯被抑制。(2)神經(jīng)元-膠質細胞共培養(yǎng)實驗:6-OHDA組的DA能神經(jīng)元數(shù)量減少,胞體縮小,樹突大量消失,活化的小膠質細胞增多,細胞上清液中TNF-α、IL-1β和NO的含量明顯上升,NF-κB通路中的IκBα和p65蛋白的磷酸化水平升高;給予ICA處理后,ICA能夠保護6-OHDA導致的DA能神經(jīng)元損傷,抑制小膠質細胞的激活,使Iba1蛋白表達水平下降,細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-1β和NO的含量減少,抑制了磷酸化IκBα和p65蛋白。結論:ICA能夠保護6-OHDA誘導的DA能神經(jīng)元損傷,其作用機制可能與抑制小膠質細胞介導的神經(jīng)炎癥反應有關
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2768989