【摘要】：紅花注射液是由紅花經(jīng)水煎煮醇沉等工藝加工而成的單方注射液,具有活血化瘀、抗氧化、降脂、抗炎等作用,臨床主要應用于預防和治療冠心病、心肌梗塞等疾病。目前針對紅花注射液的臨床研究和藥理研究報道較多,但基于紅花注射液的活性成分的研究報道較少,并主要集中于對羥基紅花黃色素A(HSYA)含量與生物活性的研究。為進一步探索其藥效物質基礎,本研究評價了紅花注射液體外延長活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)、抑制血小板聚集以及抗氧化等活性,并以這些生物活性指標為依據(jù),采用活性導向分離方法,對紅花注射液的抗凝血活性部位和化學成分進行了研究。本文內容包括以下幾個方面:1.以體外延長人正常血漿APTT、PT和抑制血小板聚集為評價指標,分別評價了7個企業(yè)生產的紅花注射液的體外生物活性;采用清除1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH?)體外篩選模型,研究了紅花注射液的體外抗氧化活性;利用福林酚法和AlCl_3比色法測定了紅花注射液的總多酚和總黃酮含量。結果表明:不同生產企業(yè)的紅花注射液對APTT具有明顯的延長作用(P0.05),并呈量效相關性,但對PT作用不顯著(P0.05),即紅花注射液對內源性凝血途徑有顯著影響,對外源性凝血途徑無明顯作用;紅花注射液對ADP誘導的家兔血小板聚集有顯著的抑制作用,以及對DPPH?具有顯著的清除作用,并呈量效相關性。2.采用大孔樹脂D101層析柱對紅花注射液進行了粗分離,并獲得4個組分;采用體外生物活性篩選方法評價了各組分的體外生物活性。實驗結果表明:四個化學成分群均具有體外延長APTT、PT以及抑制血小板聚集作用;延長APTT、PT作用強弱排序均為Fr_4Fr_3Fr_2Fr_1;此外,Fr_3組分具有較強的抑制血小板聚集作用和抗氧化活性,且總多酚含量高。3.通過凝膠柱層析與制備液相對Fr_4進行了反復分離純化,并分離得到三個化合物。利用UPLC-MS和核磁共振~1H NMR、~(13)C NMR以及標準品比對等方法,對化合物進行了結構鑒定。三個化合物分別為對羥基苯甲醛、對羥基肉桂酸和(8Z)-癸烯-4,6-二炔-1-O-β-D-葡萄糖苷。活性測定結果表明:對羥基肉桂酸延長APTT活性最強,對羥基苯甲醛次之。4.利用高效液相色譜法測定了紅花注射液主要化學成分羥基紅花黃色素A、對羥基肉桂酸和對羥基苯甲醛的含量。利用Pearson’s法比較分析了紅花注射液體外抗凝血、抑制血小板聚集及抗氧化活性與其總黃酮、總多酚含量之間的相關性;比較分析了羥基紅花黃色素A含量與體外抗凝血活性之間的量效關系。相關性分析表明:整體來看總黃酮含量與APTT延長率存在一定的相關性、總多酚含量與DPPH?清除率具有良好的相關性;羥基紅花黃色素A含量與APTT之間無明顯量效關系。結論:紅花注射液體外延長APTT活性的化學物質基礎可能為紅花注射液中的黃酮醇及黃酮醇苷類成分;體外抗氧化活性的化學物質基礎可能為多酚類物質。
【學位授予單位】：山西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R286.0
【圖文】：

紅花注射液化學成分與生物活性研究下血小板能夠調節(jié)血液的粘度，發(fā)揮正常功能，如血小板可避免失血過多，起到止血作用。當血管內膜受到損傷時，就膜外，這時可能會導致血小板過度聚集引起血小板血栓或者 ADP、啟動 AA 代謝、激活凝血因子 FXII、XI 加快血小板聚血過程損傷或血小板的活化會導致凝血因子的產生和增多，而凝血，產生凝血酶，繼而誘導纖維蛋白原生成纖維蛋白，纖維蛋凝聚，導致凝血。作用流程圖如圖 1.1。

圖 1.2 纖維蛋白溶解過程Fig.1.2 Fibrinolysis process流異常血脂癥、高纖維蛋白原癥、紅細胞增多使血液黏度增大、脫水等、血流緩慢也是引發(fā)血栓的重要因素。血系統(tǒng)血途徑圖 1.2、圖 1.3 可知，凝血過程由三個階段組成，凝血酶原激活物成、凝血酶形成以及纖維蛋白形成[83,84]。也有學者認為可分為內源凝血途徑。凝血因子包含可作用于內源性凝血系統(tǒng)的因子和外源兩大類，反應過程如圖 1.3，最后集于共同途徑促使纖維蛋白形成5,86]。Kallikrein Prekallikrein

101.5.3 主要創(chuàng)新點本研究首次以體外延長活化部分凝血活酶時間、凝血酶原時間以及體外清除DPPH 為生物活性指標篩選紅花注射液的藥效物質。圖 1.4 研究思路與技術流程圖Fig.1.4 Research ideas and technology flow chart

【參考文獻】

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本文編號：2768311