【摘要】：急性肺損傷(Acute Lung Injury,ALI)是常見于ICU病房中的由非心源性因素所導(dǎo)致的急性、頑固性的缺氧性呼吸衰竭(氧合指數(shù)300 mmHg),臨床上將其嚴(yán)重階段(氧合指數(shù)200 mmHg)稱為急性呼吸窘迫綜合征(Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS),但目前的研究中對(duì)其動(dòng)物模型并沒有明確的劃分標(biāo)準(zhǔn),在絕大多數(shù)的動(dòng)物模型研究中仍然只使用ALI的概念。對(duì)此,本論文中使用ALI。ALI/ARDS因其起病急、發(fā)展快,并存在肺水腫,傳統(tǒng)使用的呼吸支持技術(shù)和藥物治療效果不太理想,其病死率極高,已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)。已有部分相關(guān)研究表明中藥仙茅中的有效成分仙茅苷具有較好的抗炎抗氧化作用,因此仙茅苷可能對(duì)以炎癥和氧化應(yīng)激為主要特征的ALI具有一定的生物學(xué)作用。對(duì)此,本研究通過氣管暴露滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)建立了ALI大鼠模型,以仙茅主要有效成分仙茅苷為研究對(duì)象,重點(diǎn)圍繞仙茅中仙茅苷提取檢測(cè)方法的建立和優(yōu)化,以及仙茅苷對(duì)急性肺損傷大鼠的生物學(xué)作用和可能的機(jī)制進(jìn)行了研究,為仙茅苷預(yù)防急性肺損傷提供實(shí)驗(yàn)線索。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)論如下:(1)對(duì)仙茅中仙茅苷提取的工藝參數(shù)(提取方法、提取試劑種類、提取試劑濃度、固液比,以及提取時(shí)間)分別進(jìn)行了單因素試驗(yàn)。然后在提取試劑濃度、固液比、提取時(shí)間這三個(gè)因素中選擇了3個(gè)水平納入正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行優(yōu)化,最終得到仙茅中仙茅苷的最佳提取工藝為:80%體積分?jǐn)?shù)的甲醇回流提取3 h,料液比為1:50(g:mL),提取率為0.244%。此外,建立了仙茅苷的HPLC分析方法,該色譜條件下,峰形尖銳對(duì)稱,理論塔板數(shù)高,精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率符合要求。(2)通過對(duì)大鼠暴露氣管后滴注脂多糖溶液誘發(fā)急性肺損傷動(dòng)物模型,以肺組織病理變化、病理評(píng)分、動(dòng)脈血?dú)�、肺水腫、支氣管肺泡灌洗液蛋白濃度,以及炎性細(xì)胞等為指標(biāo)對(duì)構(gòu)建的急性肺損傷大鼠模型進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果表明成功構(gòu)建了LPS氣管滴注誘導(dǎo)的ALI大鼠模型。(3)研究了仙茅苷對(duì)急性肺損傷大鼠的生物學(xué)作用。將24只大鼠隨機(jī)分為4組(n=6):正常組,模型組,仙茅苷高劑量干預(yù)組(80 mg/kg)和仙茅苷低劑量干預(yù)組(40 mg/kg)。建立急性肺損傷大鼠模型前,仙茅苷高劑量和低劑量干預(yù)組分別以劑量為80 mg/kg、40 mg/kg的仙茅苷對(duì)大鼠灌胃,每天1次,連續(xù)5天;對(duì)照組和模型組以相應(yīng)體積的羧甲基纖維素鈉溶液灌胃,每天1次,連續(xù)5天。最后一次灌胃2 h后,麻醉大鼠,暴露氣管后,對(duì)模型組、仙茅苷高劑量和低劑量干預(yù)組大鼠進(jìn)行氣管滴注脂多糖溶液(4 mg/kg),對(duì)照組滴注生理鹽水。6小時(shí)后,抽取頸動(dòng)脈血,行血?dú)夥治?收集支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF)檢測(cè)BALF中總蛋白濃度和白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)含量以及進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù),取肺組織勻漿對(duì)MPO、MDA、SOD、CAT活性進(jìn)行檢測(cè),取肺組織進(jìn)行肺濕/干重比的檢測(cè)。結(jié)果表明:1)與LPS組相比,仙茅苷低劑量和高劑量預(yù)處理組均能降低急性肺損傷大鼠肺組織損傷,仙茅苷高劑量干預(yù)組顯著降低BALF中蛋白濃度和肺濕干重比(P0.05),表明仙茅苷可以抑制肺血管通透性的增強(qiáng),減輕肺水腫的發(fā)生;2)與LPS組相比,仙茅苷低劑量給藥組和高劑量干預(yù)組均能顯著提高氧合指數(shù);3)與LPS相比,仙茅苷低劑量和高劑量干預(yù)組均能顯著上調(diào)肺組織中髓過氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)水平(P0.05),表明仙茅苷可以上調(diào)抗氧化酶活性,減輕肺部氧化應(yīng)激損傷;4)與LPS組相比,仙茅苷高劑量預(yù)處理組可以顯著降低BALF中細(xì)胞總數(shù),仙茅苷低劑量和高劑量預(yù)處理組能顯著下調(diào)BALF中白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平、降低中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)量,表明仙茅苷可以減輕炎性浸潤(rùn),下調(diào)促炎性細(xì)胞因子的釋放。綜上,仙茅苷可以通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激降低脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷。
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1.1 仙茅苷化學(xué)結(jié)構(gòu)圖1 The chemical structure of curcu癥是機(jī)體抵御外來有害刺量和長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)的炎癥反癥、哮喘等炎癥相關(guān)的疾效果。在佐劑誘導(dǎo)的大鼠，下調(diào)血清中促炎性細(xì)胞 TNF-α 的表達(dá)，從而抑制大究表明仙茅苷可以減輕地L-6、IL-1β、TNF-α 和 COX仙茅苷通過調(diào)節(jié)炎癥信號(hào)通9]�；钚匝醮兀≧OS）是細(xì)胞在基（O2.）、羥自由基（O

分別注入液相色譜儀。仙茅苷對(duì)照品保留時(shí)間處五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的全波段掃描圖如圖2.1。仙茅苷的的最大吸收波長(zhǎng)有 285 nm 和 230 nm，選擇 285 nm 時(shí)基線更為平穩(wěn)，所以后續(xù)選擇了 285 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。使用液相色譜自帶工作站軟件將得到的譜圖疊加后如圖 2.2。根據(jù)測(cè)得的峰面積積分值，以仙茅苷濃度（C）為橫坐標(biāo)，仙

10濃度對(duì)照品的 HPLC 色譜圖（仙茅苷濃度從上至下依次L, 140 μg/mL, 70 μg/mL, 35 μg/mL, 17.5 μg/mL, 8.75 μg/ 2.2 HPLC chromatograms of reference substance of curculi的配制及紫外檢測(cè)茅粉末 1.000 g，加 50 mL 甲醇，75 ℃下回流提體至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，在 50 ℃，轉(zhuǎn)速為 50 r/min 條件用甲醇少量多次洗滌壁上殘?jiān)�，轉(zhuǎn)移液體至 25 線，微孔濾膜過濾后注入液相色譜。以仙茅提取

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本文編號(hào)：2767318