【摘要】：目的本研究目的在于探索雷公藤紅素對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823增殖及有氧糖酵解的影響,探究雷公藤紅素能否調(diào)節(jié)有氧糖酵解從而抑制胃癌細(xì)胞BGC-823的增殖。方法用雷公藤紅素處理胃癌細(xì)胞BGC-823細(xì)胞后,MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活性,克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率與周期分布,并于光鏡下觀察細(xì)胞生長及形態(tài);分光光度計(jì)法檢測細(xì)胞的葡萄糖消耗量、乳酸生成量以及己糖激酶(HK)、乳酸脫氫酶(LDH)活性。蛋白電泳檢測正常胃上皮細(xì)胞GES與BGC-823細(xì)胞內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1(GLUT1)、己糖激酶Ⅱ亞型(HKⅡ)、丙酮酸激酶M2亞型(PKM2)、乳酸脫氫酶A(LDHA)蛋白表達(dá)差異,并用實(shí)驗(yàn)濃度的雷公藤紅素處理BGC-823細(xì)胞后檢測細(xì)胞內(nèi)部上述蛋白分子的表達(dá)情況。結(jié)果1、BGC-823細(xì)胞經(jīng)梯度濃度的雷公藤紅素分別處理24 h、48 h、72 h后,MTT實(shí)驗(yàn)測得加藥組細(xì)胞活力較對(duì)照組下降,雷公藤紅素處理BGC-823細(xì)胞24 h、48 h、72 h后其IC50值分別為(1.66±0.05)μmol/L、(1.49±0.07)μmol/L、(1.32±0.10)μmol/L(N=3,(?)±SD)。2、BGC-823細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)濃度的雷公藤紅素處理10天后,平板克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示,各加藥組細(xì)胞克隆形成率依次為(57.63±5.78)%、(32.64±3.27)%、(0.38±0.27)%,均明顯低于對(duì)照組的克隆形成率(77.60±6.41)%(P0.01),且具有濃度依賴性。3、BGC-823細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)濃度的雷公藤紅素作用后,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞,隨藥物濃度增加,培養(yǎng)皿中活細(xì)胞數(shù)量減少,脫壁懸浮細(xì)胞增多,細(xì)胞密度下降,細(xì)胞形態(tài)由橢圓形變?yōu)樗笮巍?、BGC-823細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)濃度的雷公藤紅素作用后,對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率依次為(14.90±0.87)%、(18.12±0.50)%、(19.15±0.04)%、(24.15±1.76)%,加藥后細(xì)胞凋亡增加(P0.05),且具有濃度依賴性。5、BGC-823細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)濃度的雷公藤紅素作用后,細(xì)胞有絲分裂受阻,滯于G2/M期。6、雷公藤紅素抑制BGC-823細(xì)胞有氧糖酵解中葡萄糖的利用(P0.05)及乳酸的生成(P0.01),具有濃度依賴性。7、與胃上皮細(xì)胞相比,胃癌細(xì)胞中GLUT1、HKⅡ、LDHA的蛋白表達(dá)升高(P0.05),PKM2的表達(dá)下降(P0.05);在BGC-823細(xì)胞中,雷公藤紅素可抑制有氧糖酵解過程中關(guān)鍵因子GLUT1、HKⅡ、LDHA的蛋白表達(dá)(P0.05),但并不影響PKM2的表達(dá)(P0.05)。8、雷公藤紅素對(duì)BGC-823細(xì)胞有氧糖酵解過程中HK和LDH活性的抑制作用不顯著,在濃度達(dá)到1.5μmol/L時(shí)才可抑制HK活性(P0.05),濃度達(dá)到1.5μmol/L才可抑制LDH活性(P0.05)。結(jié)論雷公藤紅素可直接抑制胃癌細(xì)胞BGC-823中GLUT1及有氧糖酵途徑中關(guān)鍵酶HKⅡ、LDHA,并在高濃度時(shí)抑制HK與LDH酶活性,從而阻礙BGC-823對(duì)葡萄糖的攝取利用與乳酸生成,抑制BGC-823細(xì)胞的有氧糖酵解,削減了細(xì)胞能量及生物大分子合成所需原料的供應(yīng),阻礙細(xì)胞周期進(jìn)展并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,使胃癌細(xì)胞生長增殖受到抑制。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

±SD)形式表示。多組間結(jié)果的差異用單因素方差分析異用獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)分析，P<0.05 表示差異具有統(tǒng)結(jié) 果紅素對(duì) BGC-823 細(xì)胞活性的影響 BGC-823 經(jīng)梯度濃度（0.75 μmol/L、1.0 μmol/L、1.75 μmol/L 、2.0 μmol/L）的雷公藤紅素分別處理 T 實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活性并繪制細(xì)胞活性曲線，如圖 1 所濃度及作用時(shí)間的增加 BGC-823 細(xì)胞活性逐漸下降23 細(xì)胞 24 h、48 h、72 h 后半數(shù)抑制率（Iμmol/L、（1.49 0.07）μmol/L、（1.32 0.10）μmol/L（5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L 的雷公藤紅素處進(jìn)一步的探究。

圖 2 雷公藤紅素對(duì) BGC-823 細(xì)胞克隆形成的影響注：A 對(duì)照組；B celastrol 0.75 μmol/L; C celastrol 1.0 μmol/L; D celastrol 1.5 μmol/L表 3 雷公藤紅素對(duì) BGC-823 細(xì)胞克隆形成率的影響（N=3, X SD）組別 克隆形成數(shù)（個(gè)） 接種細(xì)胞數(shù)（個(gè)） 克隆形成率（%）Control 1171 93 1509 14 77.60 6.41Celastrol 0.75 827 91 1512 12 57.63 5.78 **Celastrol 1.0 492 52 1508 15 32.64 3.27 **Celastrol 1.5 006 04 1512 10 0.38 0.27 **注：與對(duì)照組相比：** P<0.01三、雷公藤紅素對(duì) BGC-823 細(xì)胞生長及形態(tài)的影響B(tài)GC-823 細(xì)胞經(jīng) 0.75 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L 的雷公藤紅素處理48h 后，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞生長情況，結(jié)果如圖 3 所示。對(duì)照組

隨藥物濃度增加，BGC-823 細(xì)胞脫壁的懸浮細(xì)胞逐漸增多，如圖3（B）、（C）、（D）中紅色箭頭所示，活細(xì)胞減少，細(xì)胞密度下降，且 BGC-823細(xì)胞形態(tài)逐漸發(fā)生變化，細(xì)胞由橢圓形變?yōu)樗笮�，如下圖中黑色箭頭所示。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2759427