【摘要】：目的:生姜為姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鮮根莖,是最為常見(jiàn)的藥食同源中藥食材。本文對(duì)生姜、干姜及干姜炮制品揮發(fā)油成分進(jìn)行研究,并探討其藥理作用差異的可能原因;通過(guò)檢測(cè)不同產(chǎn)地生姜和直接壓榨姜汁中6-姜酚含量,為生姜相關(guān)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)及產(chǎn)地提供參考依據(jù)和新思路;通過(guò)MOE等軟件預(yù)測(cè)主要成分6-姜酚潛在的抗炎作用靶點(diǎn),并通過(guò)分子生物學(xué)相關(guān)技術(shù)對(duì)預(yù)測(cè)抗炎靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證,探索生姜主要生物活性成分6-姜酚的抗炎機(jī)制。為生姜相關(guān)藥物的靶點(diǎn)選擇及研發(fā)提供理論研究基礎(chǔ)。方法:采用最常用的水蒸氣蒸餾法提取生姜、干姜、炮姜和姜炭的揮發(fā)油,用乙醚稀釋揮發(fā)油后采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)進(jìn)行化學(xué)成分分析,將結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。采用醇回流提取法,提取五種不同產(chǎn)地生姜中的6-姜酚;采用直接壓榨法得到姜汁及姜渣,并采用醇回流法提取鮮姜和姜渣中6-姜酚;通過(guò)高效液相色譜法檢測(cè)各樣品中的6-姜酚含量并對(duì)其進(jìn)行比較分析。利用MOE軟件探究6-姜酚潛在的抗炎作用靶點(diǎn),并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行6-姜酚抗炎機(jī)制的研究。采用MTT法確定6-姜酚的給藥濃度;采用ELISA法檢測(cè)6-姜酚對(duì)炎性因子TNF-α、IL-6及cAMP分泌的影響;采用Western Blot法檢測(cè)6-姜酚對(duì)炎癥細(xì)胞內(nèi)磷酸二酯酶4表達(dá)的影響。結(jié)果:從生姜、干姜、炮姜、姜炭的揮發(fā)油中共鑒定出化合物48種,其中生姜揮發(fā)油30種,干姜揮發(fā)油36種,炮姜揮發(fā)油35種,姜炭揮發(fā)油26種。其中生姜中含量較多的有β-水芹烯、檸檬醛、莰烯等;干姜中主要含有姜烯、β芹倍半水芹烯、β-水芹烯等;炮姜中主要含有姜烯、β-水芹烯等;姜炭中主要有龍腦、姜烯、β-水芹烯等。各產(chǎn)地生姜中6-姜酚含量分別為:遼寧0.123 mg/mL、山東0.121mg/mL、云南0.176 mg/mL、四川0.274 mg/mL、江西0.264 mg/mL;在95.57 g生姜中6-姜酚含量為121.9 mg,66 mL姜汁中的6-姜酚含量為55.39 mg,為生姜中6-姜酚總含量的45.46%,4.98 g姜渣中測(cè)得6-姜酚含量為36.68 mg,為生姜中6-姜酚總含量的30.10%。PDE4為經(jīng)PharmMapper網(wǎng)站篩選出的可能的6-姜酚抗炎作用靶點(diǎn),PDE4與6-姜酚經(jīng)MOE模擬對(duì)接后顯示,該靶點(diǎn)與6-姜酚有著良好的對(duì)接;25-100μg/mL濃度的6-姜酚給藥組與空白組比較P0.05,表示此濃度范圍中6-姜酚對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力無(wú)影響;LPS可激活RAW264.7,使其活力顯著增加,25-100μg/mL濃度的6-姜酚給藥組與LPS對(duì)照組比較P0.05或P0.01,即顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞的活性;6-姜酚給藥組與LPS對(duì)照組相比,其TNF-α、IL-6的分泌均顯著降低,且其對(duì)TNF-α、IL-6分泌的抑制程度均與其給藥濃度呈正相關(guān);而給藥組cAMP的分泌量較LPS對(duì)照組明顯升高,且升高程度與給藥濃度亦呈正相關(guān);LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中PDE4蛋白的表達(dá)量與空白組相比P0.05,即RAW264.7細(xì)胞經(jīng)LPS處理后其PDE4的蛋白表達(dá)量有顯著增加;25-100μg/mL濃度的6-姜酚給藥組與LPS組相比P0.05或P0.01,即6-姜酚可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞PDE4蛋白的表達(dá),且其抑制程度與其給藥濃度呈正相關(guān)。結(jié)論:生姜、干姜及干姜炮制品的揮發(fā)油既有相同成分,也各有其特征成分。姜揮發(fā)油中所含的化合物種類(lèi)和含量在不同的炮制過(guò)程中都有不同程度的變化;而成分上的變化很有可能導(dǎo)致了炮制品藥理作用差異;通過(guò)高效液相色譜法檢測(cè)出的各產(chǎn)地生姜6-姜酚含量中,四川及江西兩地生姜中6-姜酚濃度顯著高于其他三產(chǎn)地。直接壓榨法得到的姜汁6-姜酚含量達(dá)到45.46%,即直接壓榨法可作為一種簡(jiǎn)單可行的方法提取生姜中的6-姜酚,同時(shí)對(duì)直接壓榨姜汁的產(chǎn)品化可行性提供了科學(xué)依據(jù)和參考價(jià)值;PDE4與6-姜酚經(jīng)MOE進(jìn)行模擬對(duì)接后的評(píng)分結(jié)果說(shuō)明PDE4很有可能是6-姜酚抗炎作用的潛在靶點(diǎn),以此為基礎(chǔ)選定PDE4為靶點(diǎn)對(duì)6-姜酚的抗炎作用進(jìn)行后續(xù)研究;25-100μg/mL濃度的6-姜酚對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力無(wú)影響;LPS可使RAW264.7細(xì)胞處于激活狀態(tài),細(xì)胞活力顯著增強(qiáng),而25-100μg/mL濃度的6-姜酚則抑制了激活狀態(tài)下RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞活力,確定了本實(shí)驗(yàn)的給藥濃度為25-100μg/mL;LPS組與空白組相比TNF-α、IL-6分泌顯著增加,cAMP分泌顯著降低,說(shuō)明10μg/mL LPS可使RAW264.7細(xì)胞至炎;而25-100μg/mL濃度的6-姜酚對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞TNF-α、IL-6分泌起抑制作用,但會(huì)促進(jìn)cAMP的分泌,說(shuō)明該濃度范圍的6-姜酚能夠有效的抑制RAW264.7細(xì)胞炎癥,起到抗炎作用;經(jīng)LPS誘導(dǎo)后致炎的RAW264.7細(xì)胞內(nèi)PDE4含量顯著增加,而經(jīng)25-100μg/mL濃度的6-姜酚給藥后的炎癥細(xì)胞內(nèi)PDE4表達(dá)被顯著抑制,說(shuō)明6-姜酚對(duì)RAW264.7細(xì)胞具有抗炎作用,且這種抗炎作用的機(jī)制很可能是6-姜酚抑制了炎癥細(xì)胞內(nèi)PDE4的蛋白表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R284.1
【圖文】：

在上述條件下進(jìn)行分析，總離子流圖見(jiàn)圖1.1-1.4，所得質(zhì)譜圖經(jīng)過(guò)計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理和 WILEY 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)檢索鑒定出的各種化學(xué)成分，結(jié)果見(jiàn)表 1.2。3 結(jié)果由采用水蒸氣蒸餾法提取姜及其炮制品四種藥材的揮發(fā)油，其中干姜的出油率最高為 1.25 mL/100 g(1.25%,V/W)，生姜的出油率最低為 0.20 mL/100 g（0.20%，V/W），其出油率見(jiàn)表 1.1。表 1.1 生姜、干姜及干姜炮制品的出油率藥材 藥材重量/g 揮發(fā)體積/mL 出油率(mL/100g)生姜 100.00 0.20 0.20干姜 20.00 0.25 1.25炮姜 20.03 0.15 0.75姜炭 20.04 0.18 0.90經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）檢測(cè) 4 種藥材揮發(fā)油，分析后所得的總離子流圖如圖 1.1 至圖 1.4 所示。

干姜的揮發(fā)油總離子流圖

圖 1.3 炮姜的揮發(fā)油總離子流圖圖 1.4 姜炭的揮發(fā)油總離子流圖經(jīng) NIST 質(zhì)譜庫(kù)檢索并結(jié)合文獻(xiàn)分析后，4 種分別鑒定出的化學(xué)成分結(jié)果見(jiàn)表1.2：生姜、干姜及干姜炮制品的揮發(fā)油中共鑒定出化合物 48 種，其中生姜 30 種，干姜 36 種，炮姜 35 種，姜炭 26 種。這 4 種炮制品的共有成分為 17 種，分別為α-蒎烯、β-月桂烯、β-水芹烯、β-倍半水芹烯、姜烯、莰烯、α-金合歡烯、α-沒(méi)藥醇、龍腦、樟腦、乙酸香葉酯、α-檸檬醛、β-檸檬醛、β-欖香烯、攬香醇、桉葉油醇、反式-橙花叔醇。干姜、炮姜和姜炭的共有成分有 6 種，分別為α-水芹烯、α-柏木烯、

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本文編號(hào)：2756562