發(fā)布時間：2020-07-15 07:28

【摘要】：目的:探討歸仁潤腸顆粒對對STC模型小鼠結(jié)腸神經(jīng)遞質(zhì)NO、Ache、VIP、SP的影響,探討歸仁潤腸顆粒對對STC模型小鼠結(jié)腸AQP3影響,探討歸仁潤腸顆粒對對STC模型小鼠結(jié)腸組織病理變化影響。方法:1嗎啡法建立小鼠STC模型。2利用Elisa法檢測歸仁潤腸顆粒對神經(jīng)遞質(zhì)NO、Ache、VIP、SP影響。3運用HE染色觀察小鼠結(jié)腸組織病理變化。4運用免疫組化法觀測小鼠結(jié)腸組織AQP3表達。結(jié)果:1慢傳輸小鼠模型的復制嗎啡法造模45天后,兩組小鼠無死亡,說明嗎啡方法安全可靠。模型組較正常組小鼠倦怠少動,背毛翻毛少光澤;正常組、模型組小鼠飲食、小便,無顯著差異。模型組和正常組造模前后均體重無差異(P0.05)。造模前后糞便重量變化:與正常組比較,造模前模型組小鼠24h平均糞便干重無顯著差異(P0.05),無統(tǒng)計學意義。經(jīng)過45天造模,與正常組比較,模型組小鼠糞便呈較干硬的顆粒狀,排便粒數(shù)減少,24h平均糞便干重明顯減輕,有明顯差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義。2歸仁潤腸顆粒對慢傳輸便秘小鼠腸道動力影響研究給藥過程中,72只小鼠無死亡,說明實驗方法安全可靠。模型組較正常組小鼠倦怠少動,背毛翻毛少光澤,糞便粒數(shù)較少,呈較小的顆粒狀,表面干燥;歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組較模型組,各組小鼠倦怠少動、背毛翻毛少光澤改善,排便粒數(shù)增多,糞便水分增多表面較濕潤,糞便呈光滑軟便;歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組四組中,歸仁潤腸顆粒低劑量組,顆粒狀糞便較多,歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組三組小鼠糞便差異不明顯,糞便表面濕潤,多呈長條狀;正常組、模型組、歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組小鼠飲食水、小便等,無顯著差異。給藥前后體重觀察:給藥前,正常組與模型組、歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組體重無明顯差異(P0.05)。模型組、歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組各組間比較無明顯差異(P0.05)。給藥后,正常組與模型組、歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組體重無明顯差異(P0.05),無統(tǒng)計學意義。模型組、歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組各組間比較無明顯差異(P0.05)。給藥前后糞便重量變化:給藥前,與正常組比較,模型組、歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組24h平均糞便干重顯著減輕(P0.01)。給藥14日后,與正常組比較,模型組、歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組24h平均糞便干重仍顯著減輕(P0.01);歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組24h平均糞便干重減輕(P0.05)。與模型組比較,歸仁潤腸顆粒中劑量組24h平均糞便干重增重(P0.05);歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組24h平均糞便干重增重顯著(P0.01)。小鼠腸道推進實驗:模型組與正常組相比較,小鼠腸道推進率顯著降低(P0.01);與模型組相比較,歸仁潤腸顆粒低劑量組無明顯差異(P0.05),歸仁潤腸顆粒中劑量組腸道推進率增高(P0.05),歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組腸道推進率顯著增高(P0.01);與歸仁潤腸顆粒高劑量組比較,歸仁潤腸顆粒低劑量組推進率差異明顯(P0.01),歸仁潤腸顆粒中劑量組推進率有差異(P0.05),莫沙必利組推進率作用相似(P0.05)。3歸仁潤腸顆粒對慢傳輸便秘小鼠多機制影響研究歸仁潤腸顆粒對神經(jīng)遞質(zhì)NO的影響:模型組與正常組相比NO濃度明顯升高(P0.01);與模型組比較,歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組各組血液中的NO均下降(P0.05);其中,歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組各組血液中的NO顯著下降(P0.01)。歸仁潤腸顆粒對神經(jīng)遞質(zhì)VIP的影響:模型組與正常組相比VIP濃度明顯升高(P0.01);與模型組比較,、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組各組血液中的VIP均下降(P0.05),其中,歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組下降顯著(P0.01)。歸仁潤腸顆粒對神經(jīng)遞質(zhì)SP的影響:模型組與正常組相比SP濃度降低(P0.05);與模型組比較,歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組各組血液中的SP均顯著升高(P0.01)。歸仁潤腸顆粒對神經(jīng)遞質(zhì)Ach的影響:模型組與正常組相比Ach濃度明顯降低(P0.01);與模型組比較,歸仁潤腸顆粒低劑量組、歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組各組血液中的Ach均升高(P0.05);其中,歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組各組血液中的Ach顯著升高(P0.01)。歸仁潤腸顆粒對小鼠結(jié)腸組織HE染色的影響:正常組結(jié)腸組織內(nèi)杯狀細胞分布均勻,未見明顯杯狀細胞胞漿擴張,未見明顯的間質(zhì)內(nèi)炎癥細胞浸潤。模型組結(jié)腸組織內(nèi)杯狀細胞胞漿明顯擴張,胞漿增大,間質(zhì)內(nèi)見較多以淋巴細胞為主的慢性炎癥細胞浸潤。莫沙必利組結(jié)腸組織內(nèi)杯狀細胞分布較為均勻,杯狀細胞胞漿擴張程度減輕,局部少量杯狀細胞胞漿增大,間質(zhì)內(nèi)少見以淋巴細胞為主的慢性炎癥細胞浸潤。歸仁潤腸顆粒高劑量組結(jié)腸組織內(nèi)杯狀細胞分布較為均勻,杯狀細胞胞漿擴張程度減輕,局部少量杯狀細胞胞漿增大,間質(zhì)內(nèi)少見以淋巴細胞為主的慢性炎癥細胞浸潤,比較莫沙必利組效果好。歸仁潤腸顆粒中劑量組結(jié)腸組織內(nèi)杯狀細胞分布較為均勻,杯狀細胞胞漿擴張程度減輕,局部杯狀細胞胞漿增大,間質(zhì)內(nèi)少見以淋巴細胞為主的慢性炎癥細胞浸潤,比較莫沙必利組效果相似。歸仁潤腸顆粒低劑量組結(jié)腸組織內(nèi)杯狀細胞分布較為均勻,杯狀細胞胞漿擴張程度減輕,局部杯狀細胞胞漿擴張較大、較多,間質(zhì)內(nèi)見以淋巴細胞為主的慢性炎癥細胞浸潤較多,比較莫沙必利組效果差。免疫組化觀察歸仁潤腸顆粒對AQP3表達影響:AQP3陽性表達呈棕黃色或深棕色,散在分布在結(jié)腸腺體間質(zhì)內(nèi)。正常組結(jié)腸組織內(nèi)AQP3陽性細胞呈棕黃色,陽性細胞散在分布在腺體間質(zhì)內(nèi),陽性細胞數(shù)量較少,陽性表達程度較少。模型組內(nèi)AQP3陽性細胞呈棕黃色或深棕色,陽性細胞散在分布在腺體間質(zhì)內(nèi),陽性細胞數(shù)量較多,聚集分布,陽性表達程度較高。莫沙必利組AQP3陽性細胞呈棕黃色,陽性細胞散在分布在腺體間質(zhì)內(nèi),陽性細胞數(shù)量明顯減少,散在分布,陽性表達程度較低。歸仁潤腸顆粒高劑量組AQP3陽性細胞呈棕黃色,陽性細胞散在分布在腺體間質(zhì)內(nèi),陽性細胞數(shù)量明顯減少,散在分布,陽性表達程度較低;比較莫沙必利組,陽性細胞數(shù)量明顯較少,陽性程度減低。歸仁潤腸顆粒中劑量組AQP3陽性細胞呈棕黃色,陽性細胞散在分布在腺體間質(zhì)內(nèi),陽性細胞數(shù)量明顯減少,散在分布,陽性表達程度較低;比較莫沙必利組,陽性細胞數(shù)量相似,陽性程度減低。歸仁潤腸顆粒低劑量組AQP3陽性細胞呈棕黃色,陽性細胞散在分布在腺體間質(zhì)內(nèi),陽性細胞數(shù)量較多,散在分布,少量細胞聚集,陽性表達程度較高。Western blot法檢測歸仁潤腸顆粒AQP3表達的影響:與正常組比較,模型組的相對灰度值顯著提高(P0.01),說明模型組AQP3含量顯著增高。與模型組比較,歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組AQP3相對灰度值均降低(P0.05),其中歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組AQP3相對灰度值均顯著降低(P0.01)。結(jié)論:1該研究以嗎啡法(皮下注射鹽酸嗎啡注射液,2.5 mg/(kg·d),連續(xù)注射45天)制備小鼠STC模型,造模組小鼠倦怠少動,背毛翻毛少光澤,糞便重量較正常組減輕,形態(tài)上呈干硬的顆粒狀,排便粒數(shù)減少,符合STC小的狀態(tài)和糞便性狀改變。結(jié)腸傳輸推進實驗顯示模型組小鼠腸道傳輸功能較正常組小鼠降低,符合STC臨床特點,提示嗎啡法制備STC小鼠成功。嗎啡法制備小鼠STC模型操作簡單,模型穩(wěn)定,安全性高,經(jīng)濟有效。2歸仁潤腸顆�？筛纳芐TC小鼠的糞便性狀。歸仁潤腸顆粒中劑量組、歸仁潤腸顆粒高劑量組、莫沙必利組較模型組改善顯著,小鼠倦怠少動、背毛翻毛少光澤改善,排便粒數(shù)增多,糞便水分增多表面較濕潤,糞便呈光滑軟便,三組間差異不明顯,歸仁潤腸顆粒低劑量組小鼠糞便也有改善,但不如另三組。歸仁潤腸顆�？商岣逽TC小鼠的干糞便干重,達到治療STC的作用,歸仁潤腸顆粒中劑量、歸仁潤腸顆粒高劑量有作用,歸仁潤腸顆粒高劑量更明顯,與莫沙必利相當。歸仁潤腸顆�？杉涌霺TC小鼠的腸道推進率,加快腸道推進率以低、中、高劑量遞增,歸仁潤腸顆粒高劑量改善最明顯,與莫沙必利相當,說明歸仁潤腸顆�？梢蕴岣咝∈蟮哪c蠕動,有治療STC的作用。3歸仁潤腸顆�？梢越档蚇O、VIP的含量,增加Ach、SP的含量,從神經(jīng)遞質(zhì)興奮平滑肌,加強胃腸道推進速度來治療STC。歸仁潤腸顆粒顆粒通過降低AQP3的表達含量,減少AQP3對腸道內(nèi)水分的吸收,從而達到治療STC的作用。歸仁潤腸顆粒中劑量、歸仁潤腸顆粒高劑量、莫沙必利均可使小鼠結(jié)腸的AQP3表達下降。歸仁潤腸顆粒各組中歸仁潤腸顆粒高劑量對STC的治療作用最顯著。在對神經(jīng)遞質(zhì)的影響方面與莫沙必利相似,對AQP3表達的影響方面優(yōu)于莫沙必利,歸仁潤腸顆粒中劑量和歸仁潤腸顆粒低劑量治療STC效果弱于莫沙必利組,歸仁潤腸顆粒低劑量治療STC作用不明顯。4.歸仁潤腸顆粒對NO、VIP、Ach、SP改變明顯,結(jié)合小鼠腸推進率的改變,歸仁潤腸顆�？赡苁峭ㄟ^影響NO、VIP、Ach、SP等神經(jīng)遞質(zhì)加速腸傳輸運動來治療STC。歸仁潤腸顆粒對AQP3的表達均有明顯作用。小鼠糞便的形態(tài)和濕潤程度也有明顯改變,歸仁潤腸顆�？赡苁峭ㄟ^抑制AQP3的表達來減少腸道內(nèi)水分的重吸收,增加糞便的含水量,提高腸蠕動運動來治療STC。
【學位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

正常組 10 24.02±1.43 43.75±5.17模型組 10 24.89±1.88 42.83±5.11圖1 小鼠體重隨時間變化4.3 糞便重量變化造模前模型組小鼠 24h 平均糞便干重與正常組比較無顯著差異（P>0.05）。經(jīng)過45 天造模，糞便形態(tài)上模型組小鼠糞便較正常組呈較干硬的顆粒狀，排便粒數(shù)減少。24h 平均糞便干重明顯減輕與正常組比較明顯減輕（P<0.01）。見表 1。兩組小鼠 24h平均糞便干重條形圖見圖 2。表 2 造模前后小鼠 24h 平均糞便干重比較（g/24h， X±S）組別 n 造模前糞便干重 造模后糞便干重正常組 10 2.33±0.17 2.57±0.19模型組 10 2.29±0.11 1.81±0.15※※注：與正常組比較，※※P<0.01。

長春中醫(yī)藥大學 2019 屆博士學位論文22圖2 兩組小鼠24h平均糞便干重4.4 小鼠腸道推進實驗模型組與正常組相比，小鼠腸道推進率顯著降低（P<0.01），說明嗎啡法建立 STC模型成功，見表 3，圖 3、4 。表 3 兩組小鼠造模后腸道推進率比較（%， X±S）組別 n 腸道推進率正常組 10 83.30±6.04模型組 10 73.68±4.45※※注：與正常組比較，※※P<0.01。圖3 兩組小鼠造模后腸道推進率圖4 小鼠腸道推進實驗

圖3兩組小鼠造模后腸道推進率

【參考文獻】

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本文編號：2756179